鲤鱼鳞促钙吸收肽的可控制备

王诗瑶 杨平 徐昕 张婉悦 汤震宇 刘影

【摘 要】 本实验以研究促钙吸收肽的可控制备为主要内容，用超声波辅助提取出鱼鳞中的酸溶性胶原蛋白，酶解法将胶原蛋白水解成小分子肽，测定与钙的结合量找到制备促钙吸收肽的最佳工艺，采用鲤鱼鳞为原料，减少可利用营养物质的浪费。

【关键词】 鲤鱼鳞；促钙吸收肽；超声波辅助提取

[Abstract] In order to study the controllable preparation of calcium promoting peptide， the acid-soluble collagen from fish scales was extracted by ultrasonic assisted extraction， and the collagen was hydrolyzed into small peptide by enzymatic hydrolysis. The optimum technology for preparing calcium-promoting peptide was found by determining the binding amount of calcium and the waste of available nutrients was reduced by using carp scale as raw material.

[Keywords] carp scale； calcium stimulating peptide； ultrasonic assisted extraction

我國水产品产量一直处于领先地位，每年产生250万吨的下脚料，大部分被浪费[1]。超声波提取技术作为一种新技术，具有传统提取方法达不到的优点[2]。钙是一种必需微量营养元素，美国农业部国家营养数据库的数据表明[3]， 通常食用的谷物中钙含量均无法达到3.3%推荐钙摄入量。本研究以鲤鱼鳞为原料，利用超声波辅助提取出ASC，并用酶解技术将ASC分解成小分子肽促进钙的吸收。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

鲤鱼鳞 水产品市场取得；碱性蛋白酶，中性蛋白酶，复合蛋白酶 丹麦Novozymes公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.2 主要仪器设备

SB25-12DTD超声波清洗机 宁波新芝生物科技股份有限公司；SHA-B/C数显恒温水浴振荡器 天津市赛得利斯实验分析仪器制造厂；721G可见分光光度计 上海仪电分析仪器有限公司；LGJ-12冷冻干燥机 北京松源华兴科技发展有限公司；TGL-15GE离心机 湖南科学仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 胶原蛋白提取 将除杂后的鱼鳞于0.5M乙酸溶液（1：10（w/v））浸泡48h（以上过程均在4℃下进行），并在30℃于500W的超声波下辅助分离30min，过滤后滤液中加入NaCl至最终浓度为0.9M，静置12h，悬浮液用8000r/min离心20min，沉淀重新溶于0.5M乙酸，转入透析袋内，用0.5M乙酸和蒸馏水分别透析12h，每隔3h换一次溶液，冷冻干燥后即为ASC[4-5]。

1.3.2 促钙吸收肽制备 将胶原蛋白用水配成10%的悬浊液。（1）底物浓度不同：调整温度40℃，pH5.5，酶解时间50min，底物浓度分别为1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL。（2）温度不同：调整底物浓度20mg/mL，pH5.5，酶解时间50min，温度分别为40℃、45℃、50℃、55℃、60℃。（3）pH不同：其余条件同上，pH分别为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5。（4）酶解时间不同：调整底物浓度20mg/mL。

复合蛋白酶：温度55℃，pH7.0。

中性蛋白酶：温度50℃，pH6.5。

碱性蛋白酶：温度55℃，pH7.5。

酶解时间分别为50min、108min、165min、223min、280min。恒温2h，100℃下灭酶10min，测定不同底物浓度下所得样品的钙结合率[6]。

钙结合率的测定：参照文献[7-8]的方法，测定并计算钙结合率。

2 结果分析

2.1 pH不同

由图1可知，复合蛋白酶在pH 7、中性蛋白酶在pH 6.5、碱性蛋白酶在pH 7.5达到最大值，且三种蛋白酶中中性酶的钙浓度最高。

2.2 酶解温度不同

由图2可知，复合蛋白酶在55℃、中性蛋白酶在50℃、碱性蛋白酶在60℃达到最大值，且三种蛋白酶中中性酶的值最高。

2.3 酶解时间不同

由图3可知，复合蛋白酶在165min、中性蛋白酶在223min、碱性蛋白酶在280min达到最大值，且三种蛋白酶中中性酶的值最高。

3 结论

由上图可知，中性蛋白酶效果最佳。本试验采用单因素试验的方法获得制备促钙吸收肽的最佳工艺，中性蛋白酶酶解、pH 6.5、酶解温度50℃、酶解时223min的条件下是制备促钙吸收肽的最佳工艺。

参考文献：

[1] 刘文涛，李国英，缪煜清，等.鱼鳞的研究现状及应用前景 [J].水利渔业，2006，26（1）：20-23.

[2] 焦岩，王振宇，蓝靛果花色苷超声波辅助提取优化及其降 血脂作用[J].中国食品学报，2010，10（2）：52-59.

[3] Hou T， Wang C， Ma Z， et al. Desalted duck egg white eptides： promotion of calcium uptake and structure characterization[J]. J Agric Food Chem， 2015， 63（27）： 8170-8176.

[4] 梁建华.超声波辅助提取罗非鱼皮胶原蛋白及其功能结构 性质的研究[D].广州：华南理工大学，2015.

[5] 肖枫.黄河鲤鱼鳞胶原蛋白的性质及胶原肽活性研究[D]. 镇江：江苏大学，2014.

[6] 何莉萍，刘良忠.中性蛋白酶和碱性蛋白酶对玉米蛋白水 解作用的研究[J].食品科学，2007，29（3）：152-157.

[7] 傅启高，雒秋江.用邻-甲酚酞比色法测定饲料中钙含量的 研究[N].动物营养学报，1996-8（3）.

[8] 戚邦华.邻—甲酚酞新光度法快速测定饲料中钙[J].中国饲 料，1998（07）：22-23.