B族链球菌在妊娠末期孕妇中的感染状态与阴道微生态评分相关性分析*

曹清芸，柏明见，何美琳，侯 芳，梁国威

(航天中心医院a.检验科；b.病理科,北京 100049)

B族链球菌(group BStreptococcus，GBS)又称无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)，为革兰氏阳性球菌。美国疾病预防控制中心报告显示，孕妇感染GBS后，导致早产、胎膜早破、产褥感染等疾病发生风险增加[1]，并可引起新生儿败血症、肺炎和脑膜炎[2]。部分国家已对孕35～37周的孕妇常规行GBS筛查，并对GBS阳性的孕妇预防性使用抗生素[3]。妊娠期由于生理激素的改变，阴道微生态的构成发生变化，同时阴道前庭腺体和阴道分泌物增加，外阴处于湿润状态利于细菌的生长和繁殖。因此，妊娠期更容易发生各种阴道感染[4]。Nugent等人在1991年根据阴道分泌物涂片革兰氏染色的结果提出了新的诊断标准被称为诊断细菌性阴道病(bacterial vaginosis，BV)的金标准[5]，目前，Nugent评分已被广泛应用于临床诊断BV。BV是由阴道菌群紊乱引起，考虑GBS的阳性率可能会受阴道菌群紊乱影响，因此本研究拟对妊娠末期孕妇GBS感染和Nugent评分[5]进行相关性探讨，为孕妇产前检查提供更多的帮助。

1材料与方法

1.1 研究对象 本研究为回顾性研究，通过我院检验科实验室信息系统(laboratory information system，LIS)进行检索，时间为2017年10月～2018年8月，检索策略如下，初始内容为GBS，共检索出妊娠末期孕妇1 294例，进一步对上述孕妇进行检索，其中673例孕妇未完善阴道微生态检查排除在外，最终纳入621例孕妇，平均年龄30.7±4.3岁。

1.2 试剂与仪器 GBS核酸检测试剂盒来自博尔诚(北京)科技有限公司，检测仪器为实时荧光定量PCR分析仪(ABI 7500，美国)。Nugent评分用革兰氏染液(梅里埃公司)及普通光学显微镜一台。所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 方法

1.3.1 标本采集：由我院产科医生采集孕妇阴道分泌物标本，共采集两份阴道分泌物拭子并立即送检，其中一份做Nugent评分，另一份做GBS核酸检测，采样孕妇纳入标准：无心血管、肝、肾及免疫系统严重疾病；无甲状腺及妊娠并发糖尿病；取样前2周内无全身或阴道局部使用抗生素；取样前24 h未使用过栓剂和洗液。

1.3.2 实时荧光定量PCR：利用TaqMan探针实时PCR技术，针对GBS基因组特异且无高频SNP位点的序列区域CAMP因子，设计出特异性引物和探针，配以全封闭PCR体系，检测标本中的B族链球菌DNA。体系中通过加入内参照系统排除PCR反应过程中可能的假阴性结果，并通过加入UNG避免可能的扩增污染物造成的假阳性结果。具体扩增步骤为：①UNG反应50℃ 2 min；②预变性95℃ 5 min；③PCR (95℃15s→60℃35s)45个循环。

1.3.3 Nugent评分：将阴道分泌物涂片经革兰染色后，在油镜下观察四种优势菌形态并计数，即乳酸杆菌、阴道加德纳菌、普雷沃菌和动弯杆菌，以半定量评估法对阴道分泌物标本进行评分，标本分值为四种细菌形态分值之和[5]。正常为0～3分，疑似为4～6分，BV患者为7～10分，见表1。

表1正常人和BV患者阴道分泌物革兰染色Nugent计分

每个油镜视野定量菌体数定量分值乳酸杆菌阴道加德纳菌/普雷沃菌动弯杆菌>306～301～5<10012344321022110

1.4 统计学分析 采用SPSS 16.0 软件进行统计，组间率的比较采用卡方检验(χ2)，组间量的比较采用独立样本t检验，双侧P值<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 高龄孕妇组与低龄孕妇组GBS阳性率比较 以35岁为界进行分组，分为低龄孕妇组(≤35岁)与高龄孕妇组(>35岁)，其中，低龄孕妇组497例，GBS阳性66例，阳性率为13.30%，高龄孕妇组124例，GBS阳性14例，阳性率11.29%，组间阳性率比较差异无统计学意义(χ2=0.350，P>0.05)。

2.2 GBS阴性组、阳性组Nugent评分 GBS结果阴性组(n=541)与阳性组(n=80)Nugent评分水平分别为4.07±1.11 vs 4.66±1.49，差异有统计学意义(t=-3.380，P<0.001)。

2.3 Nugent评分分组组间GBS阳性率比较 以Nugent评分进行分组，Nugent≤3分为正常组，4分≤Nugent≤6分为疑似组，Nugent≥7分为BV患者组，三组GBS阳性率分别为9.14%(17/186)，11.81%(45/381)和33.33(18/54)。对三组阳性率进行比较，正常组与疑似组间GBS阳性率差异无统计学意义(χ2=0.916，P=0.339)，正常组与BV组GBS阳性率差异有统计学意义(χ2=19.665，P<0.001)，疑似组与BV组GBS阳性率差异有统计学意义(χ2=17.689，P<0.001)。

3讨论西方国家在近几十年对 GBS感染进行了大量研究，现已证实GBS为围产期感染的主要致病菌之一，占围产期感染的首位。国内相关文献报道的妊娠妇女 GBS带菌率为10.1%～32.4%[6]。时春艳等[7]研究显示，北京地区孕妇GBS阴道带菌率为13%。本研究入组人群亦为北京地区孕妇，结果显示在621例孕妇中GBS阳性率为12.88%，与时春艳等研究结果接近。同时本研究显示GBS感染在高龄组与低龄组孕妇间差异无统计学意义。GBS为革兰阳性球菌，是健康妇女阴道菌群的常驻菌。妊娠期由于体内雌激素水平升高，利于细菌的滋生和繁殖，引起阴道菌群紊乱，进而诱发下生殖道细菌感染。将阴道分泌物经革兰染色后进行Nugent评分是诊断BV的主要方法之一。本研究发现GBS阳性组的Nugent评分高于GBS阴性组，且差异有统计学意义，同时，以Nugent评分分组后，BV患者组GBS阳性率高于正常组与疑似组。因此，我们考虑妊娠末期孕妇GBS阳性率与Nugent评分有一定相关性，提示当患者处于BV状态时，GBS感染的阳性率增高的几率增大，有一定的提示作用。经过文献检索，目前相关研究较少，而本研究的样本量相对较少，在今后的工作中需进一步扩大样本量，进一步验证该结论的可靠性。

综上所述，GBS感染与阴道微生态紊乱有一定的相关性，Nugent评分越高，GBS感染率越高，有一定的临床提示意义。