VDR（Fo KI）基因多态性与溃疡性结肠炎易感性的关系分析

黄涛，刘春庆，赵磊

北京市大兴区人民医院普外科 北京 102600

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种常见的肠道非特异性炎症，其容易反复发作、病程较长，部分患者还可能会发生癌变［1-2］。维生素D受体作为核受体家族成员之一，它通过与维生素D相结合，再通过结合靶器官从而在体内发挥生物学功能［3］。编码维生素D受体的基因起始密码子区域表现为FokI基因多态性，该基因多态性是影响维生素D受体（VDR）发挥生物学功能唯一位点，同时与其他位点无交叉作用［4-5］。既往研究发现，FokI基因多态性与Graves病、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎等多个疾病的易感性相关［5-7］，并且有研究报道称维生素D的缺乏可能是溃疡性结肠炎病情加重的重要原因［8］。1,25-(OH)2D3是维生素D3的活性代谢产物，其不仅和机体钙代谢有关，同时还参与细胞增殖、分化及凋亡［9-10］，而血清25(OH)D含量是反应机体维生素D水平的重要指标［11］。目前关于FokI基因多态性、维生素D水平及溃疡性结肠炎三者关系的报道比较少。因此本研究检测溃疡性结肠炎患者维生素D受体FokI基因多态性及血清25(OH)D水平，探讨其与溃疡性结肠炎易感性的关系，旨在为溃疡性结肠炎的诊治提供一定的参考依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年2月至2016年10月期间在本院就诊的78例溃疡性结肠炎患者作为观察组，同期选择本院体检中心90例健康体检者作为对照组。溃疡性结肠炎患者根据其结肠镜结果分为广泛型（n=38）和远端型（n=40）；疾病的严重程度按照改良Truelove Witts标准［12］进行分型，分为轻度（n=18）、中度（n=32）、重度（n=28）。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。两组一般资料对比，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表1。

表1 两组一般资料对比

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 （1）观察组：①年龄18～70岁；②按照中国炎症性肠病诊断治疗规范的共识进行诊断［12］，经病理确诊为溃疡性结肠炎；③近6个月内未服用过维生素D及相关制品；④自愿并同意参加此次研究，并能够配合完成该研究。（2）对照组：①年龄18～70岁；②体检及实验室检查结果正常者；③自愿参加本研究，依从性较好，配合完成该项研究。

1.2.2 排除标准 （1）合并严重的心、肝、肾功能障碍等疾病；（2）伴有癫痫、精神疾病等情况；（3）认知功能障碍；（4）参加本研究前4 w内参加过其他临床试验。

1.3 主要试剂

血液基因组DNA试剂盒（DP318-02）、PCR反应试剂盒(KT121221)、PCR纯化试剂盒均为北京天根生物科技有限公司产品，FokI上下游引物由深圳华大基因公司合成，用于检测25(OH)D的ELISA试剂盒购自江苏科晶生物科技有限公司。

1.4 血样采集

使用一次性真空抗凝采血管采集患者空腹静脉血2 mL，用于血液基因组DNA提取；另使用一次性真空非抗凝采血管采集空腹静脉血3 mL，室温下放置30 min后4000 g进行离心，离心时间15 min，将血清分离放置于另一个干净的EP管中，于-20°C保存备用，用于血清25(OH)D水平的检测。

1.5 FokI基因多态性的检测

按照血液基因组DNA试剂盒的操作方法提取全基因组DNA，并进行稀释（按10倍稀释），于-20°C保存备用。运用Primer 6.0软件进行引物设计，由深圳华大基因公司合成。FokI和内参GAPDH引物见表2。PCR反应体系及反应条件见表3，进行PCR反应获得PCR产物，按照PCR纯化试剂盒说明书的操作步骤对PCR产物进行纯化（纯度要求：OD260/OD280约为1.8），PCR纯化产物送至深圳华大基因公司进行测序，将测序数据运用GeneMapper 5.0软件进行基因型的判读。

1.6 血清25(OH)D水平的检测

取出备存血清，按照25(OH)D的ELISA试剂盒实验步骤检测两组研究对象血清25(OH)D水平。

表2 各个基因的上下游引物

1.7 统计学方法

运用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。计量资料采用（xˉ±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料采用［n(%)］表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组VDR（FokI）等位基因和基因型频率分布

两组FokI位点的基因型分布满足Hardy-Weinberg平衡定律。观察组（C）等位基因突变频率低于对照组，（TC+CC）基因型频率低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。

2.2 不同病变范围、严重程度患者VDR（FokI）基因多态性比较

不同病变范围、严重程度患者VDR（FokI）等位基因和基因型频率分布比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表5。

2.3 两组血清25(OH)D水平对比

观察组血清25(OH)D水平低于对照组，差异具有统计学差异（P＜0.001），其中对照组、观察组血清25(OH)D水平≤30μg的比例分别为35.56%、51.28%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表6。

表4 两组VDR（FokI）等位基因和基因型频率分布［n(%)］

表5 不同病变范围、严重程度患者VDR（FokI）基因多态性比较［n(%)］

表6 两组血清25(OH)D水平对比

3 讨论

维生素D作为体内一类脂溶性类固醇激素，其主要包括VitD2和VitD3，两者在体内均无生物性活性，经机体吸收后在肾脏和肝脏部位经过转化生成1,25-(OH)2D3，然后与VDR相结合后发挥生物学功能［13-14］。维生素D是机体参与钙磷代谢的关键激素之一，同时与机体多个组织器官与系统的生理功能密切相关［15-16］。已有研究报道溃疡性结肠炎与VDR（FokI）基因多态性的关系，Farnood等［17］发现，在伊朗人群中，溃疡性结肠炎患者FokI位点的等位基因（C）突变频率低于健康对照组，而Hughes等［18］发现在高加索白种人群中溃疡性结肠炎的易感性与FokI位点基因突变无关，这些研究结果表明不同种族人群的遗传背景不同，VDR（FokI）基因多态性与溃疡性结肠炎的易感性也不同。

本研究选取我国汉族人群中溃疡性结肠炎患者和健康者作为研究对象，通过比较两组VDR（FokI）等位基因和基因型频率分布，结果显示，观察组（C）等位基因突变频率低于对照组，（TC+CC）基因型频率低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05），提示VDR（FokI）位点（C）等位基因突变可能降低溃疡性结肠炎的发生风险。同时检测不同病变范围、严重程度患者溃疡性结肠炎患者VDR（FokI）等位基因及基因型频率分布，结果显示，不同病变范围、严重程度溃疡性结肠炎患者VDR（FokI）等位基因及基因型频率分布比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），说明VDR（FokI）基因突变可能与溃疡性结肠炎病变范围及严重程度无关。

此外，本研究比较了溃疡性结肠炎患者与健康者血清25(OH)D水平的差异，结果显示，溃疡性结肠炎患者血清25(OH)D水平低于对照组，且观察组血清25(OH)D水平≤30μg的患者比例（51.28%）高于健康者（35.56%），与Rodrigues等［19］的报道印度人群血清25(OH)D水平基本相符，25(OH)D水平≤30 μg的比例则高于Jahnsen等［20］报道的高加索人群的15.0%。推测导致上述研究结果差异的原因可能是影响机体维生素D水平并非单一因素，其他因素如气候、季节、饮食结构、遗传因素等均与维生素D水平调节有关。

综上所述，VDR（FokI）基因突变可能降低溃疡性结肠炎的发病风险，但未见与疾病的严重程度和病变范围有关，且溃疡性结肠炎患者血清25(OH)D水平普遍降低。