高效液相色谱法测定培养基中的苯磺隆

吴　妍　陈家豪　钟楚欣　李玉君　张宏涛



高效液相色谱法测定培养基中的苯磺隆

吴妍陈家豪钟楚欣李玉君张宏涛

（广东中科英海科技有限公司 广东佛山 528000）

采用高效液相色谱法，使用C18柱和紫外检测器，采用液液萃取法对藻类培养基中的苯磺隆进行分析，线性范围为0.100~20.0mga.i./L，相关系数为0.9994、0.9993。LOD为0.00581mga.i./L，LOQ为0.0194mga.i./L。样品回收率均在80%～120%，RSD小于5%。

苯磺隆；液液萃取；高效液相色谱

苯磺隆由D.T.Ferguson报道，是美国杜邦公司开发的一种新型、高效、低毒的磺酰脲类麦田除草剂，对一年生和多年生阔叶杂草有防除特效，用药量极少，毒性低，残留期短，对麦类和下茬作物安全[1]。目前的国家标准多采用高效液相色谱法[2]，针对不同分析样品，样品前处理方法也有所不同。本文采用高效液相色谱法，通过试验研究采用乙酸乙酯萃取后旋蒸，用甲醇氨水溶液溶解上样。

1 试验部分

1.1 试验用水、试剂与仪器

试验用水：藻类培养基；试剂：甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、磷酸（色谱纯）、氨水（分析纯）、乙酸乙酯（色谱纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、苯磺隆标准品（纯度为97.5 %）；仪器：Alliancee2695 液相色谱仪、平行蒸发仪。

1.2 分析条件

仪器：Alliancee2695 液相色谱仪；色谱柱：XBridgeC18 (4.6×150 mm)，粒径5µm；柱箱温：35.0℃；流动相：甲醇：0.1%磷酸溶液：乙腈=5.0%:60.0%:35.0%；流速：1.000 mL/min；进样体积：20 μL；检测器：UV（紫外检测器）；检测波长：254 nm。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液的配制

准确称取0.00301 g受试物标准品（纯度为97.5 %）于10 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解后，用甲醇将容量瓶定容至刻度，配制成浓度为293 mga.i./L标准溶液，作为贮备液。取293 mga.i./L标准溶液，用甲醇氨水溶液（V甲醇∶V氨水溶液=1∶1；氨水溶液：V氨水∶V水=1∶500 ）稀释，配制下表8个标准溶液浓度。

表1 　分析方法学验证试验——系列浓度标准溶液配制表

1.3.2 前处理方法

取已用磷酸调pH至3.00 ~4.00 的试验溶液100 mL于分液漏斗中，加入适量氯化钠摇匀溶解后，分别加入30.0 mL乙酸乙酯，液液萃取2次，收集有机层溶液通过无水硫酸钠过滤至装有20 μL浓氨水的旋蒸瓶中，减压蒸干液体（50 °C），加入1.00 mL甲醇氨水溶液（V甲醇∶V氨水=1∶1），超声混合均匀后，通过0.22 μm滤膜过滤后上机待测。

1.3.3 添加回收率试验

添加回收试验设计藻类培养基中的回收试验，共有2个浓度组，每个浓度组均设5个平行，同时设不加苯磺隆标准品的空白对照，空白对照组不设平行。见表2。

表2 　分析方法学验证试验——添加回收试验分组及浓度

按上述前处理方法和分析条件进行测定。

1.3.4 定量方法

建立外标曲线，通过比较标准溶液和试验溶液中苯磺隆的峰面积，外标法计算出试验溶液中受试物的浓度。

2 结果

2.1 专属性检查

取空白溶液和苯磺隆标准溶液进样测试（色谱图见图1、图2）。结果表明，在苯磺隆保留时间处，空白溶液没有色谱峰出现，苯磺隆标准溶液有色谱峰出现，符合要求。

图1 　空白溶液的色谱图

图2 　苯磺隆标准溶液的色谱图

2.2 检测限（LOD）、定量限（LOQ）与精密度

用0.100 mga.i./L的标准溶液进样分析，得到信噪比（S/N）为51.6，以S/N≥3计算LOD为0.00581 mga.i./L，以S/N≥10 计算LOQ为0.0194 mga.i./L。以0.100 mga.i./L的标准溶液连续进样6次所得峰面积的RSD为2.00 %，符合要求。

2.3 线性范围

以系列标准溶液分别进样，测定其峰面积（见下表），线性方程1为Y=2.774 ×104X-3.769 ×103，R2=0.9988 ，r=0.9994 ；线性方程2为Y=2.820 ×104X-1.686 ×102，R2=0.9986 ，r=0.9993 ，均符合要求。

表3 　分析方法学验证试验——线性范围试验结果表1

表4　 分析方法学验证试验——线性范围试验结果表2

2.4 添加回收率试验结果

试验结果表明，低浓度样品平均回收率为85.2 %，RSD为3.66 %；高浓度样品平均回收率为93.6 %，RSD为0.239 %，样品回收率均在80 ～120 %，RSD小于5 %，符合要求。由此上述试验结果可得出，该方法的精密度与准确度均较好。

3 讨论

苯磺隆在碱性环境稳定，如用0.1 %氨水做流动相，则出峰快而尖；虽然用0.1 %磷酸做流动相时出峰慢，但其分离度更好，为更好分离杂质，减少对主峰及定量的影响，故本方法选择用甲醇∶0.1 %磷酸溶液∶乙腈=5.0 %∶60.0 %∶35.0 %作为流动相。

选用甲醇氨水溶液（V甲醇∶V氨水=1∶1）作为溶样溶剂是基于对苯磺隆溶解度及稳定性的考虑，当氨水比例过高或过低都会对其稳定性造成影响。而在前处理时加入磷酸调pH至3.00~4.00是为提高萃取效率，以求做到更低浓度的定量。

4 小结

本方法检测苯磺隆具有精密度高、准确、分离效果好、回收率高等优点，能准确测得藻类培养基中苯磺隆的含量，且本方法线性范围宽，检测限与定量限更低，灵敏度更高，最小检测浓度可达0.100 mga.i./L，是一种理想的分析方法。

[1]王天斌,柳梅,苯磺隆的高效液相色谱分析[J].化工标准.计量.质量,2005,25(2):22-24

10.3969/j.issn.2095-1205.2019.04.29

吴妍(1990- )，女，广东潮州人，研究方向：环境毒理检测及理化分析。

张宏涛(1978- )，男，吉林双辽人，工程师，研究方向：毒理学研究。

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2095-1205(2019)04-51-02