注射用牡荆素Beagle犬长期毒性试验研究*

牛海军，李晓亮，李光辉

（安徽省合肥七星医药科技有限公司，安徽 合肥 230088）

牡荆素（vitexin）是从蔷薇科植物山楂叶中提取经纯化而得的单一高纯度（＞99%）化合物，加入适宜的辅料可制成冻干产品注射用牡荆素[1]。前期研究发现，牡荆素对缺氧复氧心肌细胞有明显保护作用[2-8]，并可改善模型动物心脏血流动力学，降低心肌耗氧量，并增加心肌供血供氧[9-11]。本品常规以山楂叶制剂口服给药，改为静脉给药中药注射剂不仅保留了药效，而且起效更快，在急危重症的治疗方面发挥着重要作用。由于近年来中药注射剂不良事件时有发生，应更重视中药注射剂的安全性。本研究中对注射用牡荆素进行了长期毒性试验[12-15]，依据新药审批长期毒性试验要求，进一步研究牡荆素的用药安全性。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物、仪器与试药

动物：Beagle犬24只，普通级，4～6月龄，体质量5.0～8.0 kg，雌雄各半，由嘉兴市嘉安实验动物养殖有限公司供应，实验动物使用许可证号为SYXK（浙）2010-0043，动物合格证号为0002293。按《犬的饲养SOP操作规程》进行饲养管理，饲养于不锈钢犬笼内，每笼1只，温度16～26℃，相对湿度40% ～70%，中央空调集中通风（每1 h通风8～10次），光照12 h，明暗交替。

仪器：ADVIA2120型自动血细胞分析仪（德国Bayer公司）；7020型全自动生化分析仪（日本日立公司）；CA-560型全自动血凝分析仪（日本Sysmex株式会社）；IMS-972型电解质分析仪（深圳希莱恒公司）；SP2006型心电图解析系统（日本Softron公司）；H-800型尿液分析仪（长春迪瑞公司）；YZ6EI型检眼镜（苏州医疗器械厂）；TCS-150型电子台秤（梅特勒-托利多＜常州＞有限公司）；PL4001-L型电子分析天平（梅特勒-托利多＜上海＞有限公司）；ER-120A型电子分析天平（日本A／D公司）；RM2235型病理组织切片机、EG1160型病理组织包埋机、TP1050型病理组织脱水机、HI1210型病理组织摊片机、St5010型病理组织自动染色机（德国Leica公司）；E600型落射荧光生物显微镜（日本尼康公司）；CH-3型高级研究显微镜（日本Olympus公司）。

试药：注射用牡荆素（合肥七星医药科技有限公司，批号为 20101012，规格为每瓶 30 mg，含量 97.1% ），临用前用0.9%氯化钠注射液配制成不同质量浓度、同等容量的溶液，供静脉滴注用。

1.2 方法

将24只Beagle犬随机分为牡荆素高剂量组（A1组，50 mg ／kg）、中剂量组（A2组，20 mg ／kg）、低剂量组（A3组，8 mg／kg）（均静脉滴注给药）和对照组（B组，静脉滴注等体积0.9%氯化钠注射液），各6只，雌雄各半，用药3个月，每天观察并记录犬的外观、行为活动、步态、精神、食欲、尿、大便、呼吸、瞳孔、皮毛，有无流涎、恶心、呕吐，以及注射部位有无出血、水肿、感染等。记录每天的摄食量，每周称体质量、测体温各1次。进行血液学、血液生化学检查，心电图、眼科检查，尿液分析，并于给药 1.5 个月（t3）、3 个月（停药次日，t4）和恢复期结束（停药1个月，t5）分别剖检1／3犬（每剂量组2只，雌雄各半）。对给药期间死亡犬及时进行系统尸体解剖及病理组织学检查。

1.3 统计学处理

2 结果

一般反应：研究期间未见明显毒副反应，也未引起动物死亡。

体质量：各犬体质量均随研究时间的延长而增长，但除高剂量组在给药3周和5周的平均体质量轻于相应时间的对照组外（P＜0.05），其他周各用药组的平均体质量与相应时间的对照组相似（P＞0.05）。详见图1。

图1 静脉滴注注射用牡荆素对Beagle犬体质量的影响

体温：除给药4周高剂量组犬的平均体温低于相应时间点的对照组（P＜0.05）外，其他周各给药组犬平均体温均与相应时间点的对照组相似（P＞0.05），且各犬的体温均在正常体温范围（37.5～39.7℃）内。详见图2。

图2 静脉滴注注射用牡荆素对Beagle犬体温的影响

图3 Beagle犬注射用牡荆素毒性试验病理切片图（HE，×100）

摄食：研究期间各给药组犬每周平均摄食量均与对照组相似（P＞0.05）。详见表 1。

表1 注射用牡荆素对Beagle犬摄食量的影响（±s，g）

表1 注射用牡荆素对Beagle犬摄食量的影响（±s，g）

组别 给药前给药期停药后2周1周1周2周3周4周5周6周7周8周9周10周396±5 398±5 396±5 395±5 11周396±5 398±5 395±6 394±8 12周395±6 397±6 394±7 395±6 1周2周3周4周A1组A2组A3组B组400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 395±5 397±4 397±2 397±2 397±4 397±5 397±2 397±3 396±4 397±5 396±3 397±3 395±5 398±4 395±4 396±4 392±5 399±3 394±5 397±4 391±5 399±3 393±6 396±4 394±6 399±3 396±5 397±5 395±5 399±1 395±4 397±4 394±7 398±4 396±5 396±5 396±1 398±3 397±4 398±3 397±0 399±2 398±3 399±2 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0

血液学指标：给药对犬的血液学指标无明显影响，且既无剂量反应关系，差异也无规律性，同时每只犬的测定值均在正常值范围内。详见表2。

血清生化学指标：给药对犬的血清生化学指标无明显影响，且既无剂量反应关系，差异也无规律性，同时各犬的测定值均在正常值范围内。结果见表3。

心电图：给药前（t0），t3，t4，t5时检查，均未发现异常心电图。详见表4。

尿：t0，t3，t4，t5时检查，各给药组犬尿的颜色、透明度、比重、pH、亚硝酸盐、葡萄糖、维生素C、白细胞、隐血、胆红素、尿胆原、酮体、微白蛋白均未见明显异常，与对照组比较无明显差异（P＞0.05）。

眼科：t0、t3、t4和 t5时检查，给药组犬眼结膜、角膜、瞳孔、晶状体、玻璃体、视乳头、视网膜（反射、血管、斑点）结构均正常，与对照组比较无明显差异（P＞0.05）。

表2 注射用牡荆素对Beagle犬血液学指标的影响（±s，n=6）

表2 注射用牡荆素对Beagle犬血液学指标的影响（±s，n=6）

检测时间W B C（×1 0 3／μ L） R B C（×1 0 6／μ L） H G B（g／d L）A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 1 1.4 6 ±1.1 4 1 0.3 9 ±0.3 4 1 1.4 7 ±1.4 7 1 0.8 1 ±5.2 5 1 8.4 1 ±1.4 2 1 2.0 4 ±1.6 6 1 0.2 8 ±1.3 2 1 2.4 4 ±1.9 2 1 0.0 8 ±0.7 3 1 5.5 3 ±3.0 8 1 2.5 3 ±3.8 6 1 1.8 6 ±1.8 4 1 1.1 4 ±1.8 7 1 0.3 9 ±1.0 8 1 8.0 6 ±0.6 0 1 1.2 9 ±0.8 8 1 0.4 7 ±1.1 4 1 2.3 6 ±1.6 7 1 1.9 6 ±1.8 7 2 0.0 2 ±1.4 2 6.0 5 ±0.2 7 6.5 0 ±0.4 1 6.1 0 ±0.6 6 6.5 2 ±0.2 0 7.3 5 ±0.0 7*6.3 6 ±0.4 8 6.7 1 ±0.2 4**6.6 3 ±0.4 8 6.6 6 ±0.4 5 6.7 4 ±0.0 1 5.9 0 ±0.3 6 6.2 9 ±0.4 8 6.0 0 ±0.5 1 6.5 0 ±0.5 0 6.7 2 ±0.2 8 5.9 9 ±0.5 2 6.0 9 ±0.3 9 6.2 8 ±0.7 5 6.8 6 ±0.6 8 6.7 6 ±0.1 5 1 2 2±6 1 2 9±7 1 2 6±1 3 1 3 6±1 1 1 5 5±1*1 2 7±1 0 1 3 5±7*1 3 5±8 1 3 8±1 3 1 4 3±4 1 1 6±4 1 2 5±8 1 2 4±1 3 1 3 3±1 3 1 4 4±2 1 2 3±1 0 1 2 6±7 1 3 4±1 4 1 4 6±1 0 1 4 1±4检测时间H C T（%）M C V（f L）M C H（p g）A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1组3 7.4 ±1.6 4 0.3 ±2.2 3 7.4 ±4.1 4 1.1 ±2.7 5 6.8 ±0.4**A 2组3 9.2 ±3.1 4 1.7 ±2.0 4 0.4 ±2.2 4 2.0 ±3.7 5 2.9 ±2.0 3 5.8 ±1.5 3 8.7 ±2.8 3 7.1 ±3.9 4 0.4 ±3.9 5 2.7 ±0.4 3 8.3 ±2.9 3 9.1 ±2.2 4 0.0 ±4.2 4 3.8 ±3.0 5 3.1 ±0.1 6 1.9 ±1.3*6 2.0 ±1.2*6 1.3 ±1.4*6 3.0 ±2.7 7 7.3 ±0.1 6 1.6 ±1.5*6 2.1 ±1.6*6 1.1 ±2.2*6 2.9 ±2.1 7 8.6 ±2.8 6 0.8 ±2.9*6 1.5 ±1.1**6 1.8 ±2.5 6 2.1 ±1.7 7 8.4 ±2.7 6 4.0 ±1.5 6 4.3 ±1.7 6 3.8 ±1.4 6 4.0 ±2.2 7 8.6 ±2.0 2 0.1 ±0.4 1 9.8 ±0.3**2 0.7 ±0.5 2 0.9 ±1.1 2 1.1 ±0.0 2 0.0 ±0.6 2 0.1 ±0.7 2 0.4 ±0.9 2 0.7 ±0.9 2 1.2 ±0.4 1 9.6 ±0.8*1 9.8 ±0.4**2 0.6 ±1.0 2 0.4 ±0.5 2 1.4 ±0.6 2 0.5 ±0.4 2 0.6 ±0.4 2 1.3 ±0.6 2 1.3 ±0.7 2 0.9 ±0.1检测时间M C H C（g／d L） C H C M（g／d L）C H（p g）A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组2 0.8 ±0.4 2 0.9 ±0.4 2 0.8 ±0.5 2 0.9 ±0.7 2 0.5 ±0.0检测时间t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1组3 2 6±7 3 2 0±5 3 3 8±4 3 3 2±4 2 7 3±0 3 2 4±2 3 2 4±4 3 3 4±4 3 2 9±4 2 7 0±4 3 2 3±5 3 2 3±4 3 3 4±7 3 2 8±2*2 7 3±2 3 2 1±4 3 2 1±4 3 3 4±3 3 3 3±3 2 6 6±8 3 2 6±7 3 2 6±3 3 2 7±2 3 2 8±4 2 6 7±1 3 2 7±4 3 2 7±5 3 2 7±3 3 2 8±3 2 6 4±1 3 3 2±4 3 2 8±3 3 2 7±6 3 2 6±3 2 6 5±4 3 2 7±4 3 2 7±4 3 2 7±4 3 2 9±3 2 6 2±6 2 0.1 ±0.4 2 0.1 ±0.3**2 0.0 ±0.5*2 0.6 ±1.1 2 0.5 ±0.1 2 0.1 ±0.7 2 0.2 ±0.7 1 9.9 ±0.8 2 0.5 ±0.8 2 0.6 ±0.7 2 0.1 ±0.9 2 0.0 ±0.5**2 0.1 ±1.0 2 0.2 ±0.4 2 0.7 ±0.4 R D W（%）H D W（g／d L） P L T（×1 0 3／μ L）A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1组1 4.4 ±0.4*1 4.8 ±0.6 1 3.4 ±0.4 1 3.6±0.7 1 4.8 ±0.2 1 4.3 ±0.6 1 4.6 ±0.7 1 3.9 ±0.4 1 4.3±0.6 1 3.9 ±0.6 1 4.3 ±0.9 1 4.7 ±0.9 1 3.5 ±0.7 1 3.7±0.2 1 4.6 ±0.1 1 3.6 ±0.6 1 4.0 ±0.6 1 3.7 ±0.7 1 3.5±0.7 1 4.4 ±0.1 1 9.6 ±1.0 2 0.2 ±0.7 1 9.9 ±0.9 2 0.1±0.9 1 6.3 ±0.4 2 0.3 ±0.9 2 1.2 ±1.1 2 0.8 ±0.7 2 0.3±0.3 1 3.8 ±0.1*2 0.4 ±1.1 2 1.5 ±1.0 2 0.0 ±0.9 2 0.1 ±0.3 1 4.8 ±0.6 1 9.5 ±0.6 2 0.8 ±1.8 2 0.5 ±1.1 2 0.2 ±0.6 1 5.2 ±0.4 8 8±3 2 1 1 4±3 3 1 1 6±1 9 1 1 7±3 4 2 2 1±2 2 9 5±2 6 8 0±2 9 1 2 8±3 4 1 3 3±2 8 2 5 3±5 4 1 0 7±4 9 1 0 2±4 1 1 1 5±2 0 8 0±4 0 2 6 6±6 7 7 4±3 4 8 5±3 1 1 1 2±5 3 9 4±2 3 2 4 1±6检测时间M P V（f L） N E U T（×1 0 3／μ L） L Y M P H（×1 0 3／μ L）A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组5.1 ±1.2 4.4 ±1.0 5.4 ±1.1 4.7 ±1.3 1 0.3 ±1.4检测时间t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1组1 2.3 ±2.2 1 0.6 ±1.1*1 6.5 ±3.0 1 2.2 ±1.6 1 0.4 ±0.1 1 1.0 ±0.9 1 0.7 ±1.0*1 5.5 ±1.5 1 0.2 ±2.3 1 0.4 ±0.2 1 1.3 ±0.8 1 1.8 ±1.4 1 4.2 ±0.9 1 4.7 ±5.7 1 0.2 ±0.1 1 1.7 ±1.6 1 2.1 ±0.8 1 5.4 ±2.5 1 3.3 ±1.6 1 0.0 ±0.1 4.9 ±1.4 4.1 ±0.7 5.0 ±1.3 6.4 ±4.5 7.2 ±0.6 6.0 ±1.4*5.0 ±1.3 6.1 ±1.7 5.5 ±0.6 6.4 ±1.3 5.0 ±1.9 5.0 ±1.9 5.3 ±1.2 5.5 ±0.9 8.9 ±2.4 4.5 ±0.8 4.6 ±0.9 5.6 ±0.9 6.0 ±0.8 7.3 ±0.0 4.9 ±0.7 5.1 ±0.4 5.2 ±0.5 3.3 ±0.7 9.1 ±0.6 4.8 ± 0.6 4.2 ± 0.6 5.3 ±1.0 3.8 ±0.6 7.1 ±1.1 5.7 ±1.7 5.6 ±1.2 4.7 ±0.7 3.9 ±0.5 7.1 ±1.5 M O N O（×1 0 3／μ L） E O S（×1 0 3／μ L） B A S O（×1 0 3／μ L）A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组A 1组A 2组A 3组B组t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 0.7 4 ±0.0 9 0.5 4 ±0.0 4 0.6 3 ±0.1 3 0.6 4 ±0.2 8 0.6 9 ±0.0 2 0.6 1 ±0.1 0 0.5 8 ±0.0 9 0.5 5 ±0.1 0 0.4 3 ±0.0 8 0.9 0 ±0.2 9 0.7 3 ±0.1 7 0.6 3 ±0.1 2 0.5 7 ±0.1 0 0.5 4 ±0.1 0 0.9 5 ±0.0 1 0.7 1 ±0.1 2 0.6 0 ±0.0 8 0.6 1 ±0.0 9 0.5 8 ±0.1 5 1.4 8 ±0.3 5 0.7 1 ±0.3 7 0.4 4 ±0.2 5 0.6 0 ±0.5 6 0.2 6 ±0.0 4 1.1 6 ±0.1 7 0.4 8 ±0.1 7 0.3 4 ±0.1 4 0.3 3 ±0.1 4 0.2 5 ±0.0 7 0.9 0 ±0.2 8 0.9 2 ±0.6 8 0.5 4 ±0.4 2 0.4 0 ±0.1 6 0.3 3 ±0.1 5 0.8 1 ±0.3 4 0.8 2 ±0.5 2 0.6 2 ±0.4 8 0.5 9 ±0.3 3 0.4 7 ±0.2 1 0.4 9 ±0.3 7 0.0 7 ±0.0 2 0.0 9 ±0.0 4 0.0 5 ±0.0 3 0.0 5 ±0.0 2 0.1 1 ±0.0 0 0.0 8 ± 0.0 2 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 2 0.0 5 ±0.0 1 0.0 8 ±0.0 1*0.0 9 ±0.0 2 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 2 0.0 6 ±0.0 2 0.0 8 ±0.0 0*0.0 8 ±0.0 3 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 1 0.0 9 ±0.0 5 0.1 4 ±0.0 1

脏器系数：t3，t4，t5时剖检，给药对犬脏器的质量及系数无明显影响（P＞0.05）。详见表 5。

大体观察和病理组织学：t3，t4，t5时分别对犬进行常规大体观察和病理组织学检查。3期检查仅个别犬出现与剂量无关的膀胱炎、肾髓质炎性细胞浸润；同时，注射局部出现可逆并呈现一定剂量相关性的血管及其周围组织病变，以程度不同的注射局部血管壁肉芽组织增生、炎性细胞浸润、血管外结缔组织轻度水肿为主，未见明显血管坏死等严重刺激性病变，考虑为与受试物剂量

相关的反复静脉滴注引起的物理性刺激，而非受试物的直接毒性损害作用。在本试验剂量下，静脉滴注注射用牡荆素3个月并停药1个月对Beagle犬各脏器组织无实质性损伤作用。相关病理图见图3。

续表2 注射用牡荆素对Beagle犬血液学的影响（±s，n=6）

续表2 注射用牡荆素对Beagle犬血液学的影响（±s，n=6）

注：与 B 组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；t1为给药前 2周，t2为给药前 1周，t3为给药 1.5个月，t4为停药次日，t5为恢复期结束；下表同。各检测指标依次为白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比容、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白含量、红细胞平均血红蛋白浓度、平均红细胞血红蛋白浓度、血红蛋白量、红细胞体积分布宽度、红细胞血红蛋白分布宽度、血小板浓度、平均血小板体积、中性粒细胞浓度、淋巴细胞浓度、单核细胞浓度、嗜酸性粒细胞浓度、嗜碱性粒细胞浓度、大的不染色细胞浓度、网织红细胞浓度、平均网织红细胞体积、网织红细胞内血红蛋白浓度、网织红细胞血红蛋白量、凝血酶原时间。

检测时间LUC（×103／μL） RETIC（×109／L） MCVr（fL）A1组A2组A3组B组A1组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 0.09 ±0.03 0.09 ±0.02 0.07 ±0.02 0.12 ±0.03 0.19 ±0.01*0.07 ±0.01*0.07 ± 0.02 0.07 ± 0.01 0.07 ± 0.02 0.21 ± 0.08 0.09 ±0.02 0.08 ±0.01 0.08 ±0.02 0.09 ±0.03 0.20 ±0.01*0.10 ±0.03 0.10 ±0.03 0.09 ±0.02 0.13 ±0.07 0.33 ±0.04 108.9 ±31.8 133.7 ±17.8 108.8 ±60.1 82.7 ±30.7 43.6 ±1.8 A2组129.2 ±42.5 140.7 ±45.9 103.4 ±64.8 63.2 ±14.0 36.0 ±21.3 96.2 ±17.5 158.8 ±62.5 136.9 ±105.0 87.6 ±33.8 49.2 ±26.6 116.4 ±23.1 140.0 ±39.9 87.3 ±37.3 77.9 ±21.2 35.1 ±6.9 84.6 ±1.4 84.0 ±2.4 84.0 ±2.6**84.0 ±2.2 98.8 ±1.6 84.7 ±2.6 84.1 ±1.8 84.9 ±4.4*86.5 ±2.4 100.0 ±0.6 83.0 ±2.1 84.2 ±1.6 83.4 ±2.9**83.1 ±0.4*99.3 ±1.4 84.9 ±0.8 85.3 ±1.9 89.6 ±1.1 85.7 ±1.7 99.3 ±1.0检测时间CHCMr（g／dL）CHr（pg）PT（s）A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组6.9 ±0.6 6.8 ±0.2 6.5 ±0.3 5.8 ±0.2 6.0 ±0.1 t1 t2 t3 t4 t5 292.0 ±3.0 293.0 ±4.0 298.0 ±10*298.0 ±4.0 257.0 ±3.0 291.0 ±4.0 292.0 ±5.0 287.0 ±12.0 295.0 ±3.0 259.0 ±2.0 295.0 ±4.0 291.0 ±8.0 298.0 ±22.0 300.0 ±2.0 260.0 ±1.0 293.0±3.0 293.0±4.0 284.0 ±6.0 294.0 ±5.0 253.0 ±6.0 24.6 ±0.5 24.5 ±0.6 24.9 ±0.5 24.9 ±0.7 25.3 ±0.1 24.5 ±0.7 24.4 ±0.8 24.2 ±1.8 25.4 ±0.8 25.7 ±0.0 24.3 ±0.6 24.3 ±0.3 24.7 ±1.5 24.9 ±0.1 25.7 ±0.1 24.8 ±0.3 24.8 ±0.6 25.4 ±0.8 25.1 ±0.7 25.1 ±0.4 6.9 ±0.3 7.3 ±0.5*6.5 ±0.3 6.0 ±0.3 6.2 ±0.1 7.0 ±0.3 7.3 ±0.7 6.5 ±0.4 5.7 ±0.1 6.0 ±0.1 7.3 ±0.4 6.9 ±0.4 6.8 ±0.4 5.9 ±0.2 6.1 ±0.1

表3 注射用牡荆素对Beagle犬血清生化学指标的影响（±s，n=6）

表3 注射用牡荆素对Beagle犬血清生化学指标的影响（±s，n=6）

检测时间ALT[nmol／（s·L）] AST[nmol／（s·L）] ALP[nmol／（s·L）]A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 401±35 429±69 1 936±1 494*855±567 489±103 387±86 405±81 602±117 710±202 445±86 373±41 403±49 527±100 751±246 534±62 374±61 387±60 490±109 557±164 579±213 482±35 453±71 609±70*497±99 427±16 503±67 412±67 542±77 555±70 653±47 519±71 479±57 555±96 583±85 501±40 507±56 432±48 527±45 566±72 481±60 2 998±281 2 936±269 5 128±2 634 2 212±170 1 782±445 3 344±520 3 106±340 2 765±526 1 941±194 2 083±10 3 137±996 3 060±796 2 682±649 2 917±762 2 414±387 3 007±615 2 879±475 2 765±699 2 706±1 313 1 957±229检测时间Glu（mmol／L） TBil（μmol／L） TC（mmol／L）A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 5.779 ±0.407 5.365 ±0.559 5.468 ±0.097 4.810±0.465 5.169 ±0.168 5.570 ±0.150 5.000 ±0.360 5.561 ±0.356 4.742±0.490 4.976 ±0.218 5.752 ±0.544 5.276 ±0.485 5.877 ±0.113 5.076±0.201 4.962 ±0.274 5.746 ±0.269 5.204 ±0.173 5.637 ±0.352 4.577±0.435 4.993 ±0.500 0.734 ±0.114 0.705 ±0.140**0.343 ±0.276 0.470±0.265 0.277 ±0.139 0.709 ±0.106 1.000 ±0.188 0.264 ±0.083 0.636±0.388*0.298 ±0.197 0.815 ±0.055 0.854 ±0.127 0.306 ±0.142 0.536±0.186*0.493 ±0.353 0.885 ±0.271 0.937 ±0.091 0.334 ±0.159 0.092±0.185 0.292 ±0.407 5.395 ±0.479 5.720 ±0.620 5.210 ±1.043 6.049±0.939 6.207 ±1.912 5.990 ±0.552 6.000 ±0.432 5.605 ±0.859 6.142±0.713 6.540 ±0.549 5.282 ±0.801 5.266 ±0.687 4.869 ±0.795 5.832±0.455 6.069 ±0.130*5.834 ±0.651 6.382 ±0.709 5.727 ±0.785 5.978±0.910 7.568 ±0.400检测时间ALB（g／L）TP（g／L） BUN（mmol／L）A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 23.86±0.94 24.96±1.05 27.87±1.74 31.46±2.67 32.61±3.13 24.33±0.82 25.00±0.96 29.13±1.91 30.30±5.01 31.55±0.70 23.51±2.08 24.92±1.34 28.98±2.09 31.11±2.39 30.66±2.08 24.09±1.45 25.05±1.35 29.74±1.19 29.95±1.14 34.65±4.89 49.59±1.44 51.54±2.06 54.49±2.94 60.41±2.40 67.91±0.32**53.88±1.27 56.00±1.78 56.58±1.70 60.75±2.69 66.98±0.62**53.81±3.78 56.10±3.77 59.79±3.48 61.12±3.57 65.91±4.36 53.02±4.69 54.81±4.72 58.73±4.15 61.37±6.11 77.58±1.21 2.399±0.525 2.968±0.588 1.933±0.339**2.322±0.156**3.175±1.265 2.741±0.313 3.000±0.449 2.444±0.422*3.030±0.611 2.546±0.066 2.455±0.254 3.658±0.461 2.133±0.444**2.812±0.355*3.419±0.728 2.926±0.645 3.577±0.719 3.387±0.816 3.911±0.589 2.853±1.265检测时间Crea（μmol／L） γ-GT[nmol／（s·L）] CK[nmol／（s·L）]A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 43.58 ±2.29 59.61 ±2.98 74.87 ±3.03**82.65 ±4.52 98.02 ±4.31 49.24 ±3.54 66.00 ±2.46 80.25 ±4.12 86.25 ±2.99 108.08 ±0.43 45.50 ± 4.36 64.22 ±5.26 74.58 ±11.36 85.24 ±3.64 104.73 ±6.03 46.46 ±5.52 66.24 ±7.07 84.76 ±4.16 86.25 ±5.22 107.16 ±3.45 54±22 51±23 126±96 43±30 53±55 56±21 60±13 62±13 25±18 41±58 60±7 59±15 65±5 29±43 39±55 70±23 51±14 60±4 27±21 74±11 5 042±637 4 359±1 819 4 593±1 550 2 954±626*2 720±687 5 684±2 269 4 077±2 260 4 961±1 686 3 887±531 4 130±1 305 5 120±897 4 737±801 4 233±742 3 697±340 3 787±640 5 595±1 363 4 267±1 251 4 763±986 4 431±958 2 725±332

续表3 注射用牡荆素对Beagle犬血清生化学指标的影响（±s，n=6）

续表3 注射用牡荆素对Beagle犬血清生化学指标的影响（±s，n=6）

注：各检测指标依次为丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、血糖、总胆红素、总胆固醇、白蛋白、总蛋白、尿素氮、肌酐、γ-谷氨酰转肽酶、肌酸激酶、三酰甘油、钠离子浓度、钾离子浓度、氯离子浓度、总钙浓度。

检测时间TG（mmol／L） Na+（mmol／L） K+（mmol／L）A1组A2组0.586 ±0.086 0.571 ±0.086 0.650±0.221 0.494 ±0.050 0.469 ±0.001*A3组B组A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B组t1 t2 t3 t4 t5 0.545 ±0.043 0.582 ±0.046 0.502 ±0.121 0.483 ±0.143 0.518 ±0.134 0.550 ±0.089 0.566 ±0.078 0.489±0.102 0.512 ±0.057 0.531 ±0.009 0.536 ±0.079 0.551 ±0.094 0.451±0.047 0.531 ±0.113 0.598 ±0.040 143.5 ±0.6 143.9 ±0.5 145.9 ±0.6 145.8 ±0.1 145.0 ±0.0 144.5 ±0.9*144.7 ±0.8*145.7 ±0.7 146.4 ±0.8 145.3 ±0.6 143.5 ±1.0 143.3 ±0.3 145.5±0.9 145.3 ±0.5 144.6 ±0.6 143.4 ±0.4 143.7 ±0.4 144.7±2.8 145.1 ±0.9 145.5 ±0.3 4.74 ±0.10*4.89 ±0.19 4.57 ±0.18 4，74 ±0.03 4.26 ±0.05 4.59 ± 0.23 4.96 ± 0.18 4.63±0.10 4.29 ± 0.06 4.18 ± 0.21 4.58 ±0.14 5.16 ±0.21 4.64±0.15 4.26 ±0.18 4.40 ±0.19 4.59 ±0.09 5.02 ±0.19 4.71 ±0.19 4.65 ±0.50 4.41 ±0.19检测时间Cl-（mmol／L）TCa（mmol／L）A1组A2组A3组B组A1组A2组A3组B t1 t2 t3 t4 t5 107.9 ±0.6 108.2 ±1.2 110.6 ±0.5 111.1 ±0.4**109.3 ±0.4 108.2 ±0.6 108.4 ±1.0 111.8 ±1.4 111.2 ±0.9**109.8 ±1.2 107.5 ±1.0 108.1 ±0.8 111.6 ±1.2 110.5 ±0.7*109.2 ±0.3 107.6 ±0.5 107.7±0.4 110.6 ±3.2 109.2 ±0.2 109.1±0.8 2.54 ±0.02 2.49 ±0.05 2.78 ±0.18 2.43 ±0.07 3.12±0.06 2.57 ±0.03 2.51 ±0.04 2.65 ±0.19 2.40 ±0.01 3.15±0.03 2.57 ±0.01 2.49 ±0.04 2.63 ±0.08 2.35 ±0.19 3.13±0.03 2.55 ±0.03 2.51±0.04 2.58 ±0.14 2.41 ±0.03 3.07±0.08

表4 注射用牡荆素对Beagle犬心电图的影响（±s，n=6）

表4 注射用牡荆素对Beagle犬心电图的影响（±s，n=6）

时间（s） 电压（mV）组别 检查时间心率（次／分） P-R间期（s） Q-T间期（s） Q-T比值 S-T段（mV）P波QRS波0.04 ± 0.01 0.04 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.05 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.04 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.05 ± 0.01 P波R波T波A1组A2组A3组B组t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 135±13 131±16 110±19 109±20 131±5 130±5 112±15 115±17 142±14 144±13 112±19 110±28 152±34 158±36 121±24 117±18 0.10 ± 0.01 0.11 ±0.03 0.09 ±0.02 0.09 ±0.00 0.10 ± 0.02 0.10 ±0.01 0.10 ±0.01 0.12 ±0.01 0.11 ±0.01 0.11 ± 0.01 0.10 ±0.03 0.09 ±0.00 0.09 ±0.02 0.10 ±0.02 0.11 ± 0.02 0.11 ±0.01 0.20 ±0.03 0.20 ±0.03 0.24 ±0.05 0.22 ±0.01 0.18 ±0.00 0.19 ±0.01 0.22 ±0.03 0.25 ±0.05 0.19 ±0.01 0.19 ±0.02 0.20 ±0.02 0.21 ±0.04 0.19 ±0.02 0.18 ±0.02 0.22 ±0.05 0.21 ±0.00 0.30 ±0.05 0.29 ±0.05 0.33 ±0.06 0.30 ±0.01 0.27 ± 0.01 0.27 ±0.01 0.30 ±0.04 0.34 ±0.08 0.29 ± 0.02 0.29 ±0.03 0.28 ±0.02 0.28 ± 0.01 0.29 ±0.02 0.29 ± 0.03 0.32 ±0.05 0.29 ±0.03 0.06 ±0.03 0.03 ±0.04 0.00 ±0.07 0.06 ± 0.01 0.04 ±0.02 0.07 ±0.03-0.01 ± 0.08 0.09 ±0.01 0.06 ± 0.03 0.06 ±0.03 0.05 ±0.02 0.05 ± 0.04 0.03 ±0.05 0.04 ± 0.06 0.03 ±0.07 0.05 ±0.07 0.06 ± 0.01 0.05 ±0.01 0.04 ±0.01 0.04 ± 0.00 0.06 ±0.02 0.07 ± 0.01 0.06 ±0.01 0.05 ±0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ±0.02 0.06 ±0.02 0.04 ±0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ±0.01 0.07 ±0.01 0.06 ±0.01 0.24 ± 0.07 0.20 ± 0.04 0.18 ± 0.09 0.21 ± 0.09 0.22 ± 0.08 0.21 ± 0.06 0.22 ± 0.07 0.16 ± 0.07 0.20 ± 0.04 0.22 ± 0.03 0.26 ± 0.06 0.25 ± 0.01 0.26 ± 0.04 0.26 ± 0.05 0.28 ± 0.06 0.28 ± 0.02 1.78 ±0.15 1.74 ±0.22 1.73 ± 1.20 2.49 ±0.49 1.82 ±0.38 1.85 ±0.37 2.24 ±1.01 2.18 ± 1.84 1.95 ±0.33 2.00 ±0.36 1.33 ±0.82 1.81 ± 0.91 2.00 ±0.35 1.99 ±0.38 2.55 ± 0.30 2.69 ±0.47 0.44 ±0.15 0.41 ±0.19 0.19 ± 0.08 0.21 ±0.04 0.45 ±0.07 0.47 ±0.12 0.17 ± 0.33 0.03 ±0.27 0.33 ±0.06 0.40 ± 0.07 0.20 ±0.08 0.06 ± 0.34 0.36 ±0.26 0.35 ±0.24 0.33 ± 0.15 0.30 ±0.02

3 讨论

近年，随着对中药注射剂研发力度的增加，其用药安全性也被广泛关注。已上市的中药注射剂出现临床不良反应的报道也逐年增多，为保证注射用牡荆素的临床用药安全，依据长期毒性实验要求，需进一步研究牡荆素的用药安全性，大剂量长时间重复给药，检测药物可能对人体产生不良反应，判断药物对靶器官的毒性损伤，推测安全范围，对临床用药具有重要指导意义。故设计长期毒性试验周期，在注射用牡荆素50，20，8 mg／kg剂量下，连续给药3个月，对照组静脉滴注等体积0.9%氯化钠注射液，并对部分受试动物停药后连续观察4周，观察犬一般状况、血液生化指标、大体解剖及病理学特征。结果显示，不同剂量注射用牡荆素对各指标总体上无明显影响，且在Beagle犬体内均呈线性方式代谢，暴露量随给药时间延长而有所减小，未产生明显的毒副反应，中毒靶器官也未显示，故其安全无毒剂量大于 50 mg ／（kg·d）。

综上所述，在本试验剂量条件下，Beagle犬连续3个月静脉滴注注射用牡荆素较安全，未发现明显的毒副反应，安全无毒剂量大于 50 mg ／（kg·d）。

表5 注射用牡荆素对Beagle犬脏器的影响（±s，n=6）

表5 注射用牡荆素对Beagle犬脏器的影响（±s，n=6）

项目 时间A1组 A2组 A3组 B组项目 时间A1组 A2组 A3组 B组心脏 质量（g）系数肝脏 质量（g）系数脾脏 质量（g）系数肺脏 质量（g）系数肾脏 质量（g）系数脑 质量（g）系数t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 65.39 ±0.06 80.91 ±13.24 85.98 ±19.24 6.96 ±0.31 7.02 ±0.29 7.43 ±0.94 278.25±31.49 286.19 ±20.85 359.89 ±31.90 29.56±2.02 24.96 ±1.26 31.32 ±5.86 49.23±10.25 56.27 ±20.00 46.55±7.95 5.27 ±1.33 4.82 ±1.15 4.03±0.29 82.19 ±12.86 95.05 ±14.57 80.40±4.84 8.72 ±0.97 8.25 ±0.25 7.00 ±0.27 45.27 ±1.60 47.89 ±3.67 49.53 ±6.82 4.82 ±0.05 4.18 ±0.19 4.12 ±0.19 77.54 ±2.00 75.13 ±2.56 77.20 ±3.49 8.25 ±0.16 6.57 ±0.59 6.73±0.36 73.89 ±1.58 72.90±15.23 80.18 ±9.77 7.86 ±0.07 6.57 ±0.92 6.93 ±0.72 286.38 ±2.90 320.65 ±53.20 263.43 ±11.61 30.48 ±0.61 28.92 ±2.78 22.80 ±0.59 49.90 ±7.70 42.14 ±1.07 49.03 ±2.09 5.32 ±0.98 3.83 ±0.37 4.24 ±0.10 88.05 ±2.28 78.28±14.92 85.60 ±0.98 9.37 ±0.04 7.05±0.85 7.41 ±0.05 38.56±3.31 42.80 ±1.11 43.80 ±5.90 4.10±0.23 3.88 ±0.17 3.79 ±0.44 81.02±3.37 76.66 ±12.63 69.21 ±2.50 8.63±0.62 6.91 ±0.66 5.99 ±0.11 77.89 ±6.83 77.02 ±5.46 84.06 ±12.40 8.08 ±0.18 7.10 ±0.10 7.39±0.20 266.31 ±8.47 296.26 ±3.67 308.38 ±34.69 27.81 ±3.93 27.39 ±1.98 27.20 ±1.68 51.23 ±1.56 43.76 ±10.20 44.47 ±9.91 5.33 ±0.42 4.01 ±0.60 3.88 ±0.20 101.16 ±8.56 83.57 ±1.90 82.15 ±12.25 10.50 ±0.27 7.72 ±0.48 7.22 ±0.18 46.36 ±1.25 44.63 ±5.75 43.27 ±3.43 4.84 ±0.66 4.11 ±0.18 3.83 ±0.36 73.45 ±4.53 77.31 ±4.69 78.08 ±0.88 7.63 ±0.37 7.13 ±0.17 6.95 ±1.13 73.99±9.96 76.54 ±0.18 85.26 ±12.66 7.54±0.80 6.87 ±0.23 7.22 ±0.27 325.63 ±53.14 311.14 ±22.73 271.93 ±76.26 33.16 ±4.47 27.95 ±2.93 22.74 ±2.23 59.97 ±5.18 59.23 ±2.49 49.83 ±20.90 6.11±0.35 5.31 ±0.05 4.11 ±1.00 86.71±8.04 90.30 ±7.39 90.69 ±19.64 8.84±0.57 8.09 ±0.43 7.63 ±0.25 40.18 ±0.87 42.35 ±7.26 42.46±14.80 4.10 ±0.21 3.81 ±0.77 3.53±0.60 80.95 ±7.72 80.92 ±0.72 78.38±4.14 8.25 ±0.55 7.26 ±0.17 6.70 ±0.89胸腺 质量（g）系数肾上腺 质量（g）系数睾丸 质量（g）系数附睾 质量（g）系数子宫 质量（g）系数卵巢 质量（g）系数t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 18.01 ±5.01 16.17 ±2.35 10.67 ±3.05 1.93 ±0.62 1.40 ±0.03 0.95 ±0.36 0.76 ±0.04 0.97 ±0.14 1.08 ±0.02 0.08 ±0.00 0.09 ±0.02 0.09 ±0.01 5.930 11.140 19.070 0.610 0.890 1.550 1.650 2.160 4.479 0.240 0.300 0.550 1.55 1.43 16.87 0.17 0.14 1.58 0.64 1.00 2.61 0.07 0.10 0.24 18.61 ±0.81 15.52±1.91 14.11 ±4.49 1.98 ±0.15 1.41 ±0.27 1.22 ±0.41 1.20 ±0.07 0.88 ±0.13 1.21 ±0.09 0.13 ±0.00 0.08 ±0.02 0.10 ±0.01 2.680 17.730 14.750 0.280 1.530 1.290 1.050 2.610 3.840 0.130 0.360 0.600 2.24 2.77 17.85 0.24 0.26 1.53 0.85 0.89 2.09 0.09 0.08 0.18 19.24 ±0.86 18.11 ±8.94 17.20 ±3.33 2.01 ±0.31 1.64 ±0.69 1.57±0.56 1.18 ±0.25 0.87 ±0.11 0.94±0.03 0.12 ±0.01 0.08 ±0.00 0.08±0.01 10.720 12.480 18.930 1.030 1.090 1.480 2.660 2.220 4.340 0.330 0.310 0.600 1.55 1.50 3.47 0.17 0.15 0.35 0.52 0.82 0.82 0.06 0.08 0.08 22.71±2.96 25.86 ±4.03 16.02 ±0.40 2.31 ±0.24 2.33 ±0.44 1.37 ±0.22 0.78 ±0.11 0.91 ±0.07 1.09 ±0.23 0.08 ±0.01 0.08 ±0.01 0.09 ±0.00 8.650 11.480 22.830 0.870 1.050 1.700 2.310 2.240 4.550 0.290 0.320 0.650 1.77 2.41 2.87 0.18 0.21 0.28 0.80 1.05 0.77 0.08 0.09 0.07