复方黄芩“水膜”外用治疗急性湿疹抗炎和抑制金葡菌的实验研究

王首帆 徐宜厚 徐爱琴 朱立宏 秦宗碧 邱百怡

摘要目的：探讨复方黄芩“水膜”外用对急性湿疹大鼠皮肤抗炎和抑制金黄色葡萄球菌的作用机制。方法：64只雄性大鼠根据随机数字表法分为复方黄芩“水膜”观察组（黄芩组）、黄蒲洁肤洗液组（黄蒲组）、硼酸液组（硼酸组）和生理盐水组（盐水组）4组，每组16只，鼠右耳予以100%二甲苯致炎后，分别用各组药物湿敷1 h进行干预。检测大鼠右耳肿胀程度;常规HE染色，观察各组每个视野100个表皮细胞中的炎性反应细胞数。采用试管稀释法对4组所用药物作连续对倍稀释，观察体外对金黄色葡萄球菌的抑制情况。结果：1）与盐水组比较，黄芩组、黄蒲组和硼酸组大鼠右耳肿胀度均下降（均P<0.05），其中黄芩组和硼酸组较黄蒲组显著下降（P<0.05），而黄芩组与硼酸组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。2）与盐水组比较，黄芩组、黄蒲组和硼酸组大鼠右耳表皮细胞中炎性反应细胞数均减少（均P<0.05），其中黄芩组和硼酸组较黄蒲组显著减少（P<0.05），而黄芩组与硼酸组间差异无统计学意义（P>0.05）。3）黄芩组最低抑菌浓度（MIC）为15.6 mg/mL（1∶16），药物最小杀菌浓度（MBC）为7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸组（P<0.05）而低于黄蒲组（P<0.05）。结论：复方黄芩“水膜”外用治疗急性湿疹能有效改善大鼠的肿胀度，具有良好的抗炎和抑制金黄色葡萄球菌的作用。

关键词复方黄芩;“水膜”;急性湿疹;抗炎;金黄色葡萄球菌

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.01.017

湿疹是最常见的以皮损对称分布、剧烈瘙痒等为临床表现的一种过敏性炎性反应性皮肤病，根据国内普查发现其中以急性湿疹发病率最高，约占52%[13]。湿疹病因复杂，现代医学主要归因于环境等因素引起的皮肤过敏、感染等，因此针对湿疹病因病理主要以抗过敏药物、抗组胺药和皮质类固醇激素为主要治疗方案，这些外用制剂的治疗虽然能够控制急性湿疹的临床症状，改善皮肤丘疹、渗出和瘙痒等症状，但是长期使用这类药物存在易反复发作、加重病情等不良反应[47]。因此探寻安全有效的中药外用制剂十分必要。纵观古今文献未见湿疹的病名，由古籍记载参照对应临床症状可得将湿疹归属于中医学“疮”“廯”和“风”的范畴。《诸病源候论·疮病诸候》中有“疮”的病因病机相关记载“湿热相搏，故头面身体皆生疮。其疮初如疙，须臾生汁，热胜者则变为脓，随痉随发”，认为急性湿疹发病虽在表但病根在里，属于先天禀赋不足，又外感六淫内蕴湿热，内外合邪浸淫肌肤发疮疡[89]。本研究选用复方黄芩“水膜”湿敷患处以清泻湿热、凉血消肿止痒，标本兼治，观察其抗炎和抑制金黄色葡萄球菌的作用。现报道如下。

1材料与方法

1.1材料

64只雄性大鼠，体重为180～200 g，购自武汉爱博泰克生物科技有限公司，许可证号：SCXX（鄂）20070029。动物饲养于本单位动物实验中心，饲养条件：温度（23±1）°C，湿度（50±1）%，以12/12 h为光暗周期。

1.2方法

1.2.1分组与模型制备根据随机数字表法分为复方黄芩“水膜”观察组（黄芩组）、黄蒲洁肤洗液组（黄蒲组）、硼酸液组（硼酸组）和生理盐水组（盐水组）4组，每组16只。同等环境下，正常供水和垫料，所有雄性大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，将大鼠右耳予以100%二甲苯致炎后。出现肉眼可见的右耳肿胀即为造模成功。见图1。

1.2.2干预方法动物造模后进行干预。1）黄芩组：以复方黄芩“水膜”（即复方黄芩水煎剂精制而成的浓缩药液“水膜”）湿敷右耳;2）黄蒲组：以黄蒲洁肤洗液（厂家五〇五药业有限公司;国药准字B20021012药味组成：黄柏、蛇床子、黄连、土茯苓、白鲜皮、苦参、百部、虎杖、蒲公英、丹参、丁香、地肤子）湿敷右耳;3）硼酸组：以硼酸液（厂家东莞市辉宏化工有限公司;生产批号29182942）湿敷右耳;4）盐水组：以生理盐水湿敷右耳。以上4组均湿敷1 h，分6次湿敷（每次间隔10 min），10 min/次。

1.2.3检测指标与方法

1.2.3.1大鼠右耳肿胀程度每组8只大鼠麻醉处死，切除大鼠左右两耳，右耳肿胀程度为两耳的重量差。

1.2.3.2大鼠表皮细胞形态学每组随机选取8只大鼠，麻醉处死后取大鼠右耳于10%多聚甲醛中固定，并根据标准组织学技术石蜡包埋，连续切片，4 μm/片，常规HE染色，观察各组每个视野100个表皮细胞中的炎性反应细胞数。

1.2.3.3体外对金黄色葡萄球菌的抑制将金黄色葡萄球菌（ATCC25923，中国药品生物制品检定所）接种于营养肉汤培养基，培养传代，配成2×108/mL的菌液，采用试管稀释法对4种药物作连续对倍稀释（每个试管总量为1 mL），再加入10 μL菌液，比较找出对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度（MIC）;同时再转种于固定培养基，观察有无细菌生长，找出药物的最小杀菌浓度（MBC）。

1.3统计学方法采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验或秩和检验;计数资料以例数（百分率）表示，采用非参数χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1复方黄芩“水膜”对大鼠右耳肿胀度的影响与盐水组比较，黄芩组、黄蒲组和硼酸组大鼠右耳的肿胀度均下降（P<0.05），其中黄芩组和硼酸组较黄蒲组显著下降（P<0.05），而黄芩组与硼酸组间差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2各組大鼠表皮细胞的形态学观察与盐水组比较，黄芩组、黄蒲组和硼酸组大鼠右耳表皮细胞中炎性反应细胞数均减少（P<0.05），其中黄芩组和硼酸组较黄蒲组显著减少（P<0.05），而黄芩组与硼酸组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1、图2、表2。

2.3各组对金黄色葡萄球菌的抑制作用黄芩组MIC为15.6 mg/mL（1∶16），MBC为7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸组（P<0.05）而低于黄蒲组（P<0.05）。见表2。

3讨论

《黄帝内经》原文以“诸痛痒疮，皆属于心”和“营气不从，逆于肉里，乃生痈肿”道出急性湿疹的病因病机，心火旺盛，脾虚生湿，心火旺而耗血伤阴，脾虚，脾失健运，湿热内蕴而血燥风动，不能及时滋养肌肤;又外感风湿热邪，心主血脉，血热偏虚，湿热淫邪内外相搏，肌肤浸淫而发疮。中医外治法历史悠久、疗效确切，采用在急性湿疹患者局部外用药，使药力直接作用于病所，从而达到治病的目的[1013]。急性湿疹好发于皮肤，其病位表浅，丘疹、脓疱等病灶外露可见，采用中药外治的方法不仅可以使药力直达病所，药物直接作用于患处而透达腠理，疏畅患处所处经脉，调和气血，扶正祛邪，还能通过腠理毛窍，经皮给药透皮吸收循经深入脏腑，内外合治，治标的同时兼顾治本，疗效更显著。经皮给药具有诸多优势，比如使药效不被胃肠道酶、消化液、PH值等口服药物必经的渠道所虚弱，因此近年来医者对中药外用制剂的研究从透皮吸收机制研究、透皮吸收促进剂研究等方面展开，并取得不错的研究成果。目前中药外用制剂剂型繁多，有水剂、油剂、酊剂、糊剂和软膏剂等，其中水剂属于“水膜”疗法，即将外用中药以水煎煮获得浓缩药液后湿敷于患处，形成一个“水膜”的隔离效应，使外界与皮损暂时隔断，促进药物发挥透达腠理，疏畅患处所处经脉、调和气血、扶正祛邪的作用;而其他诸如油剂、酊剂、糊剂和软膏剂等剂型，需要复杂的制备工艺才能实现，不如“水膜”便利、价廉[14]。因此本研究选择复方黄芩“水膜”的外用治疗方法，结果显示复方黄芩“水膜”可有效改善急性湿疹大鼠耳廓肿胀程度。

急性湿疹一种具有急性炎性反应的常见过敏性炎性反应性皮肤病，中医学临床症状主要体现在局部患处皮肤红、肿、热;全身症状则以心烦、口渴、舌红、苔黄、尿黄、便干等表现出炎性反应。现代医学研究[1517]中发现，急性湿疹皮损处组织炎性反应时释放炎性反应递质，比如组胺、5羟色胺（5HT）、前列腺素E2（PGE2）等，这些炎性反应递质的释放造成皮损局部血流速度增速，血管扩张;血液代谢增加充血;血液产热增加而导致皮损处皮肤颜色变红，温度升高;而这些炎性反应又会进一步引起局部充血和毛细血管壁通透性增高，积聚渗出物而致局部皮肤红肿。本研究结果显示：与盐水组比较，黄芩组、黄蒲组和硼酸组大鼠右耳的表皮细胞中炎性反应细胞数均减少，其中黄芩组和硼酸组较黄蒲组显著减少，而黄芩组与硼酸组间未见明显统计学意义，提示复方黄芩“水膜”治疗急性湿疹具有一定的抗炎作用。

急性湿疹最常见的并发症就是继发感染，最常见因素是患者由于瘙痒难忍而搔抓，造成原来的湿疹皮损感染出现周围现脓疱及脓性分泌物。研究表明，在急性湿疹中感染菌种以金黄色葡萄球菌阳性率最高，且高于亚急性、慢性湿疹的金黄色葡萄球菌检出率，说明金黄色葡萄球菌与急性湿疹继发感染密切相关。临床上在瘙痒搔抓皮肤增厚瘙痒的循环中，细菌感染反复加重，增加急性湿疹的皮损渗出分泌物，而这些分泌物可能为金黄色葡萄球菌寄生提供了一定生存条件[1819]。本研究结果显示，黄芩组MIC为15.6 mg/mL（1∶16），MBC为7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸而低于黄蒲组，提示复方黄芩“水膜”在体外急性湿疹研究中具有一定的抑制金黄色葡萄球菌的作用。

总之，复方黄芩“水膜”外用治疗急性湿疹能有效改善大鼠的肿胀度，减少大鼠右耳的表皮细胞中炎性反应细胞数，同时抑制金黄色葡萄球菌，有效改善大鼠急性湿疹的症状，疗效显著，为临床广泛应用提供了基础实验依据。

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（2017-07-07收稿责任编辑：张雄杰）