萝卜缨有效成分含量及抗氧化活性研究

段树成，管桂林，曲珊珊，彭新颜，柳全文，金成武*

(1.鲁东大学 食品工程学院，山东 烟台 264025；2.青岛农业大学 食品科学与工程学院，山东 青岛 266109)

萝卜属于十字花科萝卜属，是我国重要的蔬菜作物之一[1]。目前我国萝卜的主要食用部位是萝卜根部，通常，萝卜缨在收获萝卜时被丢弃在田间地头，只有很少一部分被用作调味品来腌制泡菜、咸菜等[2]。萝卜缨性味甘苦平，富含精油、多种维生素和抗病毒成分，其蛋白质、维生素及微量元素含量远远高于萝卜根部，具有保肝、促进胃肠蠕动、保护心血管活性等功能[3,4]。在韩国，萝卜缨资源作为调味品得到了广泛的研究与发展，将萝卜缨粉末添加到面粉中对于松糕或者其他传统糕点，可使其具有良好风味，并且明显提高糕点的品质[5,6]。

本研究结合萝卜缨叶柄粗大、咀嚼困难、不易消化的现实问题，对萝卜缨叶柄和叶片有效成分含量及抗氧化活性差异进行研究，旨在改善萝卜缨浪费严重，利用率低的现状，为萝卜缨资源在调味品中的合理发展提供了理论参考价值。

1 实验材料与设备

1.1 实验材料

本实验使用的样品为青萝卜缨，品种为小缨萝卜(RaphanussativusL.)，购于烟台。

1.2 实验试剂

无水乙醇、95%乙醇、甲醇、氯化亚铁、乙酸钾、过硫酸钾、三氯化铝、铁氰化钾、无水碳酸钠、三氯化铁、福林酚、没食子酸、槲皮素：均为分析纯。

1.3 实验设备

主要设备的名称与生产厂家见表1。

表1 实验设备与生产厂家Table 1 Experimental equipments and manufacturers

2 实验方法

2.1 样品前处理和提取物制备

2.1.1 样品前处理2.1.1.1 萝卜缨清洗后干燥

将萝卜缨清洗干净，放入65 ℃恒温鼓风干燥箱中干燥直至重量不变。

2.1.1.2 样品分离、粉碎

将干燥后的萝卜缨的叶柄和叶片分离，分别粉碎，装入密封容器中备用。

2.1.2 样品提取物制备2.1.2.1 样品提取

分别取一定量的叶柄和叶片粉末，加入80%的乙醇溶液，用超声波清洗机辅助多次提取至滤液变澄清为止。

2.1.2.2 样品浓缩与干燥

用真空旋转蒸发仪对滤液进行浓缩，直到浓缩成浓稠状半固体物。将浓缩后的叶柄和叶片样品放入-80 ℃的超低温冰箱中冷冻12 h，取出后放入真空冷冻干燥机中进行干燥，干燥品低温保藏备用。

2.2 有效成分含量测定

2.2.1 总酚含量测定

采用福林酚法进行样品总多酚含量测定[7]。配制不同浓度没食子酸标准溶液，分别吸取没食子酸标准溶液和叶柄、叶片样品反应液，依次加入反应试剂。为减小误差，实验时做3组平行实验，取平均值。以没食子酸的浓度为横坐标、吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线图(y=0.0121x-0.0047，R2=0.9998)。

2.2.2 总黄酮含量测定

吸取蒸馏水2.8 mL、95%的乙醇1.5 mL，再加入各槲皮素标准溶液和样品反应液0.5 mL、10% AlCl3溶液0.1 mL和1 mol/L的乙酸钾溶液0.1 mL，混合均匀后在黑暗环境下反应40 min。在415 nm波长下测量其吸光度。为减小误差，实验时做3组平行实验，取平均值。以槲皮素的浓度为横坐标、吸光度A为纵坐标，绘制得到标准曲线(y=0.0068x+0.0036，R2=0.9996)。

2.2.3 HPLC分析2.2.3.1 Shimadzu 20A 型HPLC

由在线脱气机(DGU-20A5)、四元输液泵(LC-20AT)、进样器(SIL-20A)、紫外检测器(SPD-20A)、柱恒温控制箱(CBM-20A)组成。

2.2.3.2 HPLC分析条件

流速：1 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：A：0.1%三氯乙酸的水溶液；B：乙腈；梯度洗脱程序：0～15 min，10%～15% B；15～40 min，15%～30% B；40～55 min，30%～50% B；55～65 min，50%～75% B；65～70 min，75%～90% B；液相色谱使用浓度为10000 mg/L的样品溶液，使用之前样品用孔径为0.22 μm针筒式滤膜过滤器过滤。

2.3 抗氧化活性测定

在抗氧化活性测定的实验中，均使用浓度为1000 mg/L的样品溶液。为减小误差，实验时均做3组平行实验。

2.3.1 DPPH自由基清除能力测定

分别取1 mL的叶柄提取液和叶片提取液于试管中，取1 mL 80%的甲醇溶液代替样品提取物作为对照。然后向所有试管中加入3 mL浓度为0.15 mmol/L的DPPH溶液。暗反应30 min测定各溶液在517 nm波长下的吸光度。对于样品的DPPH自由基清除能力用清除率表示：

DPPH自由基清除率(%)=(A对照-A样品)/A对照×100%。

式中：A对照为80%的甲醇溶液与DPPH混合溶液的吸光度；A样品为各样品提取液与DPPH混合溶液的吸光度。

2.3.2 ABTS自由基清除能力测定[8]

分别吸取叶柄和叶片溶液0.5 mL于不同的试管中，加入5 mL经稀释后A734 nm=0.70±0.02的ABTS溶液混合均匀，对照组用80%的甲醇溶液代替样品，其他条件不变。室温环境下静置反应10 min，在732 nm波长下测各样品的吸光度。对于样品的ABTS自由基清除能力用清除率表示：

ABTS自由基清除率(%)=(A对照-A样品)/A对照×100%。

式中：A对照为80%的甲醇溶液与ABTS混合溶液的吸光度；A样品为各样品提取液与ABTS混合溶液的吸光度。

2.3.3 铁离子螯合能力测定

分别吸取2 mL叶柄和叶片样品提取液于试管中，以蒸馏水作为空白组。依次加0.1 mL浓度为2 mmol/L的氯化亚铁、0.4 mL浓度为5 mmol/L的Ferrozine溶液、0.4 mL蒸馏水，用漩涡混合仪混匀。在黑暗环境下反应10 min后用分光光度计进行测定，波长设定为562 nm。吸光度值越小，表示铁离子螯合能力越强。样品对铁离子的螯合能力用螯合率表示：

螯合率(%)=(A0-A1)/A0×100%。

式中：A0为水与其他试剂混合溶液的吸光度；A1为各样品提取液和其他试剂混合溶液的吸光度。

2.3.4 还原能力测定

采用普鲁士蓝法测定萝卜缨不同部位的还原能力[9]。

3 结果

3.1 萝卜缨不同部位总酚含量的差异

在干燥的萝卜叶片样品中，含有6.54 mg/g总酚类物质；萝卜叶柄样品中，含有3.40 mg/g总酚类物质，见图1。萝卜叶片多酚类物质含量约为叶柄的1.9倍。

图1 萝卜缨不同部位干物质中总多酚含量Fig.1 The content of total polyphenols in different parts of radish leaves

3.2 萝卜缨不同部位总黄酮含量的差异

图2 萝卜缨不同部位干物质中总黄酮含量Fig.2 The content of total flavonoids in different parts of radish leaves

由图2可知，萝卜缨不同部位的总黄酮含量有较大的差异。每克萝卜叶片干物质中，总黄酮的含量约为5.13 mg；萝卜叶柄干物质中总酮物质的含量为0.52 mg/g。萝卜缨中的总黄酮主要集中在叶片部位,含量为叶柄的10倍之多。

3.3 萝卜缨不同部位HPLC 分析对比

图3 萝卜缨不同部位HPLC分析 Fig.3 HPLC analysis of different parts of radish leaves

在图3高效液相色谱图中，出峰时间与物质的种类有关，峰面积与物质的含量成正比，通过高效液相色谱分析结果可以看出，萝卜缨叶片和叶柄的较大峰的出峰时间基本相同，为14.5，19.2，23.5，25.5，27.5，29.5 min等。换言之，在280 nm波长处萝卜叶片和叶柄中的化合物种类总体相同，但含量差别较大，同种物质在萝卜叶片中的含量比在萝卜叶柄中的含量高。猜测这可能会导致叶柄和叶片的抗氧化活性的差异，且叶片的抗氧化能力要高于叶柄。

3.4 抗氧化活性分析

3.4.1 萝卜缨不同部位DPPH自由基清除能力的差异

图4 萝卜缨不同部位DPPH自由基清除率Fig.4 DPPH radical scavenging rate in different parts of radish leaves

由图4可知，萝卜叶柄和叶片的DPPH自由基清除能力相差非常大，萝卜叶片的DPPH自由基清除率为62.34%，萝卜叶柄的DPPH自由基清除率仅为1.34%，其结果低于萝卜叶片近47倍。所以，萝卜缨中具有DPPH自由基清除能力的有效物质主要集中在叶片部位，且清除能力较高。

3.4.2 萝卜缨不同部位ABTS自由基清除能力的差异

由图5可知，萝卜叶片的ABTS自由基清除率超过50%，而萝卜叶柄的ABTS自由基清除率不到4%，不及萝卜叶片的1/10，可见萝卜叶片部分具有较强的抗氧化作用。

图5 萝卜缨不同部位ABTS自由基清除率Fig.5 ABTS radical scavenging rate in different parts of radish leaves

3.4.3 萝卜缨不同部位铁离子螯合能力的差异

图6 萝卜缨不同部位铁离子螯合能力Fig.6 The chelating ability of iron ions in different parts of radish leaves

由图6可知，萝卜叶柄的铁离子螯合率为44.41%，叶片的铁离子螯合率为89.54%。萝卜叶片的铁离子螯合能力比较高，其铁离子螯合率是叶柄的2倍多，而萝卜叶柄的铁离子螯合能力不突出。

3.4.4 萝卜缨不同部位还原能力的差异

图7 萝卜缨不同部位还原能力Fig.7 The reducmg ability in different parts of radish leaves

由图7可知，萝卜叶柄和叶片都有一定的还原能力。叶柄在700 nm条件下的吸光度为0.101，叶片为0.244。萝卜叶柄和叶片相比较，叶片的还原能力高于叶柄的还原能力，是叶柄的2倍多。

4 讨论与结论

萝卜作为家喻户晓的蔬菜，已得到广泛种植与培育，而萝卜缨资源常常被丢弃。通过本研究发现，萝卜叶片、叶柄中总酚含量分别为6.54，3.4 mg/g，与Park等[10]研究中萝卜根的总酚含量0.24～0.27 mg/g、青萝卜的总酚含量0.40 mg/g相比可知，萝卜叶片和叶柄均比萝卜根、青萝卜的总酚含量高出数十倍，尤其是叶片中含量高达萝卜根的27倍，且萝卜叶片多酚含量约为萝卜叶柄的1.9倍之多。同时，与张皓月[11]研究发现的青萝卜根皮中黄酮含量0.85 mg/g、根肉中0.28 mg/g相比，萝卜叶片中黄酮含量约是根肉中的18倍，而萝卜叶柄中总黄酮含量为0.52 mg/g，介于根皮、根肉二者之间。因此，萝卜缨比萝卜根含有更多的有效成分，尤其是软而嫩的叶片部位含量最高，对萝卜叶片、叶柄的分离利用能获取更多的营养成分。通过进一步对萝卜叶片和叶柄的抗氧化活性研究，发现叶片具有更高的抗氧化活性，DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、铁离子螯合能力以及还原能力等均显著优于叶柄。叶片的DPPH自由基清除率约为叶柄的46倍；ABTS自由基清除能力为叶柄的15倍之多。萝卜缨的抗氧化活性远高于萝卜根，与黑胡椒、山楂等物质接近[12-14]。可见，萝卜叶片抗氧化活性较高，具有极高的食用价值。多酚、黄酮类物质对氧化损伤有重要保护作用，同时大多数与抗氧化生理活性相关的化合物在280 nm波长处有较强的吸收[15-17]。通过该波长下进行的高效液相色谱分析结果可以看出，萝卜叶片与叶柄化合物种类相近，但同种物质在萝卜叶片中的含量远高于叶柄。总的来看，萝卜叶片总多酚、总黄酮含量远高于叶柄，抗氧化活性也呈现同种表现，这与Ziani等、Rafaela等[18]的研究中总黄酮、总多酚含量与抗氧化活性呈显著正相关的结果一致，从而证实了叶片多酚、黄酮类物质含量高，使其抗氧化活性明显优于叶柄。

本研究为开发萝卜缨资源的合理利用提供了理论基础，为调味品产业发展注入了新的血液。因叶片的风味优于叶柄且具有较高的营养价值，我们可以分而取之，为我们食品产业发展提供更有价值的食用方法，在鲜食的同时，还可以将原料腌制成咸菜、泡菜等，更可以以风味改善品质的方式加入到面粉、饮料等产品中，给日常生活带来新的体验。