r-干扰素释放试验在基层应用的价值

吴进凤

（北京市昌平区结核病防治所 检验科，北京 102200）

0 引言

结核病是由结核杆菌引起的慢性呼吸道传染病，据世界卫生组织报道，每年全球因结核病导致死亡人数超过150 万，结核病是世界10 大死亡病因之一[1]。人体除了指甲和头发，其他部位都有可能会患上结核病[2]，结核病的临床表现多种多样，各种结核病中最常见的是肺结核[3]。面对结核病临床表现的复杂性，及时有效的检测方法尤为重要，痰涂片抗酸染色、结核菌培养是目前临床上最常用的检测方法。痰涂片操作简便、快捷，但该方法阳性率较低而且易被漏检；结核杆菌培养是结核病诊断的“金标准”，但该方法培养时间较长，不利于早期诊治[4]。r-干扰素释放试验和结核抗体检测，是近几年在临床上应用较多的免疫学检测方法。通过对这两种检测方法敏感性的比较，分析r-干扰素释放试验在结核病中的诊断价值和实用性。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2015 年1 月至2018 年12 月在本所初治的肺结核患者共计283 人，其中男性174 人，女性109人。年龄16～89 岁，平均（39.80±18.97）岁。所选患者283 人均进行痰涂片抗酸染色、r-干扰素释放试验、结核抗体检测。

1.2 诊断标准

肺结核患者诊断，依据中华医学会结核病学分会编写的《临床诊疗指南-结核病学分册》[5]标准，非结核均经临床诊断排除。

1.3 方法

（1）痰涂片抗酸染色:采用萋-尼氏染色方法进行处理[6]。涂片染色所用试剂均由珠海贝索生物有限公司生产。痰标本涂片、染色、干燥、镜检。显微镜镜检结果报告如下:连续观察300 视野，根据镜下所见抗酸杆菌数量分级报告。蓝色背景下抗酸杆菌显现红色，镜下300 视野可见1～8 条以上抗酸杆菌为阳性，镜下未见抗酸杆菌为阴性。

（2）r-干扰素释放试验（T-SPOT.TB）:使用结核感染T 细胞检测试剂盒（Oxford immunotec ltd），实验操作按照免疫斑点干扰素释放试验[6]和试剂盒说明书进行。抽取患者静脉血5 mL，依次进行单个核细胞提取与计数、孵育、抗原抗体结合、显色、斑点计数。显微镜镜下计数报告结果如下:抗原A 孔或抗原B 孔斑点数-空白孔斑点数≧6 为阳性，提示有结核菌感染。反之为阴性。

（3）结核抗体检测:使用上海奥普生物医药有限公司生产的结核分枝杆菌IgG 抗体检测试剂盒，操作按照试剂盒说明书进行。结果判读如下:反应孔有红色质控点，中间有红色斑点出现为阳性；只有红色质控点，中间无红色斑点为阴性。

1.4 观察指标

分析283 人的检测结果。根据痰涂片的结果，分成涂片阴性组和涂片阳性组。对这两组T-SPOT.TB和结核抗体的结果进行比较，评价T-SPOT.TB 在结核病诊断中的价值。

1.5 统计学方法

分析数据使用SPSS 2.0 软件进行，数据资料用χ2检验，P＜0.05 有统计学意义。

1.6 质量控制

实验操作人员严格按照标准操作规程进行实验。

2 结果

2.1 225 例结核病患者痰涂片结果分析

283 例痰涂片结果:萋-尼氏染色镜检，涂阴246 例，占86.93 %（246/283）；涂 阳37 例，占13.07 %（37/283）。

2.2 涂片阴性组，T-SPOT.TB 与结核抗体结果比较

涂片阴性组共246 例，T-SPOT.TB 阳性率为52.85 %（130/246），高于结核抗体的13.41 %（33/246）.有显著性差异（χ2=86.323，P＜0.05），见表1。

表1 涂片阴性组T-SPOT.TB 与结核抗体结果比较

2.3 涂片阳性组，T-SPOT.TB 与结核抗体结果比较

涂片阳性组共37 例，T-SPOT.TB 阳性率为91.89 %（34/37），高于结核抗体的29.73 %（11/37），有显著性差异（χ2=29.997，P＜0.05），见表2。

表2 涂片阳性组T-SPOT.TB 与结核抗体结果比较

2.4 T-SPOT.TB 结果与结核抗体结果在结核病诊断中的比较

T-SPOT.TB 诊断结核病的敏感度为57.95 %（164/283），高于结核抗体的敏感度15.55 %（44/283），有显著性差异（χ2=109.454,P＜0.05），见表3。

表3 T-SPOT.TB 与结核抗体在结核病中诊断结果比较

3 讨论

我国是全球结核病疫情较为严重的国家之一，患者人数多。我国结核病防治工作的重点，是对结核病患者进行早诊断、早治疗，提高患者病愈后的生活质量[7]，然而前来就诊的患者，大多临床表现都不典型，给临床的快速诊断增加了很大难度[8]。目前，痰涂片和结核菌培养是结核病诊断常用的检测方法，但是由于痰涂片受标本质量、阅片者经验等因素影响，阳性率较低；而痰培养耗时长拖延诊断。因此急需快速精准的检测方法辅助临床诊断[9]。近几年，结核抗体和T-SPOT.TB 这两种免疫学检测方法在临床上广泛应用。尤其对于留痰困难（例如:精神科的结核病患者，留痰非常困难）、干咳无痰患者，免疫学检测方法更加适用。T-SPOT.TB 原理:结核病患者外周血中的效应T 淋巴细胞对结核有特异性，在受到结核分枝杆菌刺激后，会释放γ-干扰素，是目前检测结核抗原特异性T 淋巴细胞敏感度最高的方法[10,11]。

本文通过对283 例结核病患者的检测结果进行比较，涂阴人数占86.93 %（246/283），涂阳人数占13.07 %（37/283）。涂片阴性组T-SPOT.TB阳性率为52.85 %（130/246），高于结核抗体的13.41 %（33/246）.有显著性差异。涂片阳性组，T-SPOT.TB 阳性率为91.89 %（34/37），高于结核抗体的29.73 %（11/37），有显著性差异。T-SPOT.TB 检测结果显示其敏感度为57.95 %（164/283），高于结核抗体的敏感度15.55 %（44/283）。以上结果数据与徐静[12]和李才信[13]等相关文献报道结果有一定差异。

本研究中三种检测方法，T-SPOT.TB 敏感性最高，其次是结核抗体检测，痰涂片最低。通过涂片分组后对两种实验结果进行比较、分析得出:两种免疫学检测方法中，结核抗体检测方法简单，快捷，而该方法的敏感性各文献报道有很大差异。而T-SPOT.TB 的敏感度明显高于结核抗体的敏感度。作为一种新的结核病诊断方法，T-SPOT.TB 操作简便，所需时间短，敏感性高，是诊断结核病的“金标准”之外的非常有效的诊断方法，既可以广泛的应用于结核感染筛查[14,15]，又可以作为涂片以外的辅助诊断指标[9,16]，有利于结核病早期诊断与治疗。

T-SPOT.TB 更适用于基层结防机构，首先，不需要特殊仪器设备，人工显微镜下即可判读，操作简便；其次，对于不能自主留痰的患者，抽血检测更加简单易行；再其次，本单位承担辖区内多所高校以及200 多万人口（其中流动人口多于原住人口）的结核病防控工作，在处理结核病疫情和突发事件中，此项检查也可用于密切接触者筛查。综上所述，T-SPOT.TB 适合在基层结防机构推广应用。