硝苯地平缓释片（Ⅰ）含量及含量均匀度测定方法的改进

安徽省合肥市食品药品检验中心（230088）王玮 秦绍刚

硝苯地平缓释片（Ⅰ）是一种预防和治疗冠心病心绞痛常用药物，并未收载与中国药典中，其执行标准为国家药品标准WS1-(X-056)2004Z，本文参照药典[1]中硝苯地平片含量测定项下方法，建立一种测定硝苯地平缓释片（Ⅰ）中含量及含量均匀度的方法，结果准确，硝苯地平和降解产物可以完全分离。

1 仪器与试药

1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；AB265-S电子分析天平（德国梅特勒-托利多公司）；UV-3900紫外可见分光光度计（日本日立公司）。硝苯地平对照品（批号：100338-201103，中国食品药品检定研究院）；硝苯地平缓释片（Ⅰ）片（亚宝药业集团股份有限公司，批号120107和120903）；甲醇为色谱纯，水为屈臣氏重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水（60∶40），流速为1.0ml·min-1，检测波长为235 nm，进样量：20μl，柱温：30.0℃。理论塔板数按硝苯地平峰计算应不小于2000，硝苯地平与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取硝苯地平对照品10.90mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品20片，精密称取总片重，研细，精密称取适量（约相当于硝苯地平10mg），置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察 精密称取硝苯地平对照品10.70mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分别置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按拟定的色谱条件进行检测，记录色谱图，以硝苯地平浓度（μg·mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，得回归方程Y=57.798X-92.149，r=0.9998。表明硝苯地平在8.56～42.8μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.4 精密度、重复性及稳定性试验 分别取同一种对照品溶液（21.8μg·mL-1），在上述色谱条件下，重复测定6次，每次20μl，主峰面积的RSD为0.18%（n=6），表明精密度良好。

分别取同一批硝苯地平缓释片（Ⅰ）（批号：120903）共6份，在上述色谱条件下进样，记录色谱图，硝苯地平含量测定的RSD为0.15%，表明本法重复性好。分别取同一种对照品溶液（21.4μg·mL-1），在室温下放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h进样，记录色谱图。硝苯地平峰面积的RSD为0.22%，表明溶液的稳定性良好。

2.5 回收率试验 称取已知含量的供试品细粉（批号：120903）适量各9份，置50ml容量瓶中，分别加入硝苯地平对照品适量，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.1项下色谱条件，分别进样。记录色谱图与峰面积，考察加样回收率，结果见附表1。

附表1 硝苯地平回收率实验（n=9）

附表2 样品含量测定结果

附图 硝苯地平液相色谱图

2.6 专属性试验

2.6.1 酸降解溶液的配制 精密量取硝苯地平对照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10ml量瓶中，加5mol·L-1盐酸溶液100μl，放置30分钟，加5mol·L-1氢氧化钠溶液100μl，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.6.2 碱降解溶液的配制 精密量取硝苯地平对照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10 ml量瓶中，加5mol·L-1氢氧化钠溶液100μl，放置30分钟，加5mol·L-1盐酸溶液100μl，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.6.3 光破坏溶液的配制 将硝苯地平对照品溶液（0.218mg·mL-1），置日光下放置24小时后，即得。

2.6.4 热降解溶液的配制 将硝苯地平对照品溶液（0.218mg·mL-1），置100℃水浴中加热3小时后，即得。

按2.1条件进样，记录图谱（附图a-d）。结果显示，本品四种破坏条件下，均产生明显的降解产物（6.5分钟处为硝苯地平杂质Ⅰ，7.7分钟处为硝苯地平杂质Ⅱ）。在碱破坏时2种杂质峰较大，而光照条件下，硝苯地平严重降解为硝苯地平杂质Ⅱ，可见硝苯地平对光敏感，试验过程要避光操作。在此色谱条件下，硝苯地平与相邻杂质峰的分离度约为3.4，理论塔板数为4000，表明该方法专属性良好。

2.7 最低检测限 取对照品溶液（8.56μg·mL-1）用水稀释若干倍，在上述色谱条件下测定，以信噪比S/N＝3计算检测限，硝苯地品检测限约为0.05μg。

2.8 样品含量测定 避光操作。将样品按照2.2.2项下的方法制成供试品溶液。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。另取硝苯地平对照品，同法操作，按外标法以峰面积计算，即得，结果见附表2。

2.9 样品含量均匀度测定 避光操作。取本品1片，除去包衣后，置50ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，加甲醇定量稀释制成每1ml中约含20μg的溶液，作为供试品溶液。照含量测定项下的方法测定含量，结果均符合规定。

3 讨论

笔者采用HPLC法测定硝苯地平缓释片（Ⅰ）中硝苯地平的含量，能有效地控制该药的质量。参考相关学者研究[2][3][4]，在检测波长的选择上，笔者将20μg·mL-1的硝苯地平对照品甲醇水溶液在紫外光谱区扫描，在235nm的波长有最大吸收，故本文选择235nm作为检测波长。

原有国家标准中要求称样于研钵中加氯仿研磨，再转移至容量瓶中，研磨及转移的过程又增加了测定误差的步骤。整过程繁琐费时、环境污染大，易造成误差。本文直接用甲醇超声溶解即可。比对色谱柱Venusil M P C18(250mm×4.6mm，5μm)与Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；硝苯地平的峰形和塔板都差不多，选择较简单的甲醇-水（60∶40）作为流动相体系，完全可以满足试验需求。