茯砖茶提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病的保护作用研究

胡安恺，姚立筠，赵悦伶，刘畅，王岳飞，徐平*

茯砖茶提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病的保护作用研究

胡安恺1，姚立筠2，赵悦伶2，刘畅1，王岳飞2，徐平2*

1. 东北农业大学食品学院乳品工程系，黑龙江 哈尔滨 150030；2. 浙江大学茶叶研究所，浙江 杭州 310058

茯砖茶是我国特有的一种黑茶。本文以茯砖茶为原料，分别制备了茯砖茶水提物（FWE）、经95%乙醇沉后得到的醇溶物（FES）和醇沉物（FEP），并探究了3种提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病的保护作用。研究表明，3种茯砖茶提取物都能够减轻炎症性肠病的肠道结构损伤，其中FWE组效果最好；同时茯砖茶提取物可以显著提升小鼠血清和肠道组织上清液中超氧化物岐化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）水平以及降低白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，且作用效果均为FWE组＞FES组＞FEP组；在蛋白水平上，FWE组小鼠肠道组织的NF-κB p65蛋白水平有所降低；IκBα的蛋白水平在FWE组和FES组中有所增加；核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素氧化酶-1（HO-1）的相关蛋白水平在FWE组和FES组也有所增加。综上所述，茯砖茶提取物可以通过抗氧化和抗炎途径对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病发挥预防保护作用。

茯砖茶；炎症性肠病（IBD）；炎症；氧化应激

炎症性肠病（Inflammatory bowel disease，IBD）是世界范围内一种高发的疾病，主要包括克罗恩病（Crohn's disease，CD）和溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）[1]，其中最为常见的是溃疡性结肠炎。溃疡性结肠炎的主要特征是从结肠开始的粘膜炎症，并且可以持续不断地影响整个肠道。除了引发炎症之外，常见的组织形态改变包括丧失杯状细胞，破坏改变隐窝结构，以及轻微溃疡[2]。慢性溃疡性结肠炎不仅使患结肠癌的风险增加200%~800%，并且因其潜在的全身性炎症，导致其与其他慢性疾病的发生有关，包括类风湿关节炎、强直性脊柱炎、银屑病等[3]。研究表明IBD与结肠氧化应激和炎症因子的增加以及肠道屏障功能的丧失相关联[4]。已有研究发现结肠炎小鼠和IBD患者体内，由肠道固有层免疫细胞分泌的IL-6（Interleukin-6，白细胞介素-6）、TNF（Tumor necrosis factor，肿瘤坏死因子）（多为TNF-α）的蛋白水平均明显增加，表明细胞因子在IBD的发病机制中有着重要的作用[5]。

茶叶及其功能成分的抗氧化和抗炎功能使其具有防治IBD的可能。已有流行病学调查发现饮茶能减少溃疡性结肠炎和克罗恩病的发病率[6-7]。同时，研究发现不同茶类（包括红茶、绿茶、黑茶）可以通过抗氧化、抗炎和调节肠道微生物对小鼠结肠炎具有一定的防治作用[8]。然而，也有研究报道EGCG（Epigallocatechin gallate，表没食子儿茶素没食子酸酯）可能会加剧IBD小鼠的体重下降，这与EGCG可以抑制蛋白质、脂肪和碳水化合物的消化和吸收有关[9]。尽管茶叶对IBD存在潜在的防治作用，但不同茶类及其不同成分对IBD的作用存在差别。茯砖茶是我国特有的一类茶，其特点在于独特的“发花”工艺，使得茯砖茶化学成分产生了不同于其他茶类的变化，造就了其独特的品质特点。研究表明，茯砖茶及其多酚、多糖等提取物具有调节肠道菌群、降脂减肥[10-14]、保护肝脏[15]、防治腹泻[16]等功效，茯砖茶能通过增强肠道组织修复、调节肠道微生物和抑制结肠炎症等途径来维持小鼠肠道的健康[17]。然而，茯砖茶防治小鼠IBD的主要物质基础还鲜有报道。

因此，我们利用水提、醇沉等方法分别制备了茯砖茶水提取物（FWE）、富集茯砖茶多酚的醇溶提取物（FES）及富集茯砖茶多糖的醇沉提取物（FEP），并进一步评价了3种提取物对DSS（Dextran sulfate sodium，葡聚糖硫酸钠）诱导小鼠炎症性肠病的预防保护作用，以及对IBD小鼠氧化应激和炎症因子的影响，以期为茯砖茶防治炎症性肠炎的作用机制和应用方案提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

茯砖茶购于湖南省白沙溪茶厂股份有限公司；DSS购于安诺伦（北京）生物科技有限公司；GSH（Glutathione，谷胱甘肽）、SOD（Super oxide dismutase，超氧化物岐化酶）、CAT（Catalase，过氧化氢酶）、IL-6、IL-1β、TNF-α试剂盒购于科诺迪生物科技有限公司；RIPA裂解液、PMSF（Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟）、磷酸化蛋白酶抑制剂、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、β-actin（β-肌动蛋白）、NF-κB（Nuclear Factor kappa-B，核因子κB） p65、IκBα（Inhibitor of NF-κB，NF-κB抑制蛋白）、HO-1（Heme oxidase -1，血红素氧化酶-1）购于武汉赛维尔生物科技有限公司；Nrf2（Nuclear factor erythroid-2-related factor 2，核因子E2相关因子2）购于美国Affinity Biosciences公司；其他常规试剂购于中国医药集团有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 茯砖茶提取物的制备

每次称取茯砖茶50.0 g放入1 L锥形瓶中（总共500 g，每份50 g），加500 mL 100℃的蒸馏水在沸水浴中浸提10 min，共提取3次。趁热减压过滤后合并滤液，旋转蒸发，浓缩至100~150 mL。将浓缩后的水浸提液冷冻干燥，冻干粉即为茯砖茶水提物（FWE）。在浓缩后的水浸提液中加入4倍体积的95%乙醇，4℃静置24 h后，3 000 r·min-1离心5min，收集沉淀物，洗涤并冷冻干燥后即得富集多糖的茯砖茶醇沉提取物（FEP）；上清液旋转蒸发回收乙醇，经冷冻干燥，即得富集多酚的茯砖茶醇溶物（FES）。

1.2.2 茯砖茶提取物成分测定

参照文献[18]测定总酚含量：配制2 mg·mL-1的样品溶液，取0.1 mL样品溶液加入10 mL具塞试管，加蒸馏水至6 mL，再加入0.5 mL 50%（∶）福林酚试剂（现配），混匀，5 min后加入1 mL 5%碳酸钠溶液，加水至10 mL，室温静置60 min。用10 mm比色皿，以试剂空白为参比，于760 nm处测吸光度，利用标准曲线换算成样品溶液的总酚含量。

参照文献[19]测定总糖含量：配制2 mg·mL-1的样品溶液，取0.2 mL样品溶液加入25 mL具塞试管，以蒸馏水补至2.0 mL。加入1.0 mL 6%苯酚，摇匀，迅速加入5.0 mL浓硫酸，摇匀，室温放置20 min后于490 nm处测吸光度。

参照文献[19]测定糖醛酸含量：吸取0.2 mL 2 mg·mL-1的样品溶液，以蒸馏水补至1.0 mL。在冰水浴中向各管加入4 mL浓硫酸，摇匀后置于85℃水浴中加热20 min，冷却至室温后加0.2 mL咔唑溶液，在室温下保持2 h，于530 nm处测吸光度。

参照文献[19]测定可溶性蛋白含量：配制2 mg·mL-1的样品溶液，取0.2 mL样品溶液，以蒸馏水补至1.0 mL。加入5.0 mL考马斯亮蓝溶液，摇匀，放置2~5 min后于595 nm处测吸光度。

参照文献[18]测定氨基酸含量：吸取1 mL 2 mg·mL-1的样品溶液加入25 mL比色管中，再加入0.5 mL pH=8.04磷酸盐缓冲液和0.5 mL 2%茚三酮溶液，置于沸水浴中加热15 min，冷却后加水至10 mL。10 min后于570 nm处测吸光度。

1.2.3 动物试验

选用SPF级的C57BL/6J雄性小鼠，6周龄，购于上海斯莱克公司生产许可证：SCXK（沪）2017-0005。所有的动物试验均于浙江大学实验动物中心进行饲养，动物试验设计征得浙江大学实验动物伦理委员会同意（ZJU20190004）。小鼠于动物房适应性饲养一周后，将试验小鼠（n=5）随机分成4组，一组为炎症性肠病对照组（Control），其余3组为处理组：FWE处理组、FES处理组和FEP处理组。分别配制小鼠饮用水进行喂养：对照组给予无菌水、试验组给予相应的提取物水溶液（4 mg·mL-1）；喂养15 d后，将DSS（2%，∶）添加至水/提取物溶液中，混合喂养7 d，进行小鼠炎症性肠炎模型造模，7 d后进行相关后续试验。

1.2.4 指标测定

日常观察指标：每3 d进行换水、称量体重、测量每5只小鼠的总饮水量以及腹泻便血情况。便血评分标准参照文献[20]：正常粪便得0分；轻微肉眼可见血丝得1分；粪便有可见血痕得2分；大便带血得3分；脱肛和直肠出血得4分。腹泻评分标准参照文献[20]：正常粪便得0分；粪便较黄得1分；粪便呈柔软状得2分；粪便没有具体形态得3分；脱肛，身体蜷缩得4分。

标本采集：喂养完毕后，摘眼球取血，血液静置1 h后，3 000 r·min-1离心20 min，取上清液置于–80℃冰箱保存，待做ELISA（Enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附试验）检测。取小鼠结直肠组织，用PBS（Phosphate buffer solution，磷酸盐缓冲液）漂洗干净后，取近肛门端的1 cm肠道组织，置于4%的甲醛中固定24 h，待做H&E（Hematoxylin eosin，苏木精伊红）染色。另取40 mg肠道组织，于无菌室中用含3倍双抗浓度的PBS冲洗3遍，置于24孔板中，加入500 μL含10%牛血清及1%双抗的RPMI-1640培养基，于5%CO2的37℃培养箱中培养24 h，收集肠道组织上清液，置于–80℃保存，待做ELISA检测。剩余肠道组织于液氮中快速封存，置于–80℃保存。

H&E染色：取4%甲醛中固定好的肠道组织。将样本洗涤、脱水和透明、浸蜡、包埋处理后，切成5 μm厚度组织切片，放入温水中展平，然后将切片转移至载玻片上，45℃恒温干燥过夜。过夜之后用二甲苯将切片进行脱蜡，各10 min。然后用无水乙醇洗涤两次各1 min。将切片分别用100%、95%、90%、85%和70%乙醇浸泡2 min，蒸馏水洗涤2 min。而后苏木精染色15 min，流水15 min冲洗，0.1%伊红染色5 min，再依次100%、95%、90%、85%和70%乙醇倒序脱水，二甲苯透明两次各10 min，中性树胶封片。

ELISA检测：取各组小鼠的血清及肠道组织上清液，按照试剂盒说明书，测定其中的GSH、SOD、CAT、IL-6、IL-1β、TNF-α指标。

Western Blot检测：组织块用冷PBS洗涤2~3次，去除血污，剪成小块置于匀浆管中。加入1~2个2 mm的小磁珠，加入10倍组织体积裂解液置于匀浆机中制作匀浆，匀浆后，冰浴30 min，收集上清。将蛋白溶液按照4∶1的比例加入5×蛋白上样缓冲液，沸水浴变性15 min。蛋白经SDS-PAGE电泳（浓缩胶电压75 V，分离胶用120 V），PVDF（Polyvinylidene fluoride，聚偏氟乙烯）转膜过夜（25 V恒压）后，用5%脱脂牛奶封闭1 h，4℃孵育一抗3 h，用TBST（Tris buffered saline tween，洗膜缓冲液）洗3次，室温下孵育二抗30 min后，用TBST洗3次。加入混合好的化学发光溶液充分反应，1~2 min后进行曝光。曝光后利用Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值。

1.3 统计学方法

应用SPSS 20.0 统计软件进行分析，试验结果采用平均数±标准差来表示。各组间比较采用单因素ANOVA分析，两两比较采用LSD-检验，＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 茯砖茶提取物主要成分分析

3种茯砖茶提取物的制备流程如图1-A所示。在水提的基础上，我们进一步通过醇沉对多糖和多酚进行了分离。从图1-B中可以看出，醇沉物FEP中总酚含量显著低于水提取物FWE和醇溶提取物FES，而总糖和糖醛酸含量相对较高；FES中酚类物质较高，同时多糖物质显著低于FEP。FWE中主要活性物质含量处于平均水平。

2.2 茯砖茶提取物对小鼠体重生长及饮水量的影响

小鼠的体重质量变化情况如图2-A所示。试验前期，小鼠的体重增长较为稳定。第16天开始用DSS喂养小鼠，DSS处理前3 d体重增长变缓，3 d后，体重下降明显，其中FEP的体重下降最少，FES居中，FWE组体重下降最为明显。小鼠的饮水量变化如图2-B所示。可以看出，小鼠的饮水量差异不大，但在DSS干预的第4~7天，小鼠的饮水量明显下降。由于DSS引发的肠道炎症反应，小鼠从第19天开始粪便出现明显的血丝，并随着DSS处理时间的增加，在第20、21天小鼠甚至出现了明显大便带血的情况（图2-C）。小鼠腹泻情况如图2-D所示，腹泻情况与便血情况相当，小鼠从第19天开始有轻微的腹泻现象，且随着天数的增加，腹泻症状加剧，到第22天，通过观察，可以发现粪便已无具体形态，并且部分小鼠有轻微的脱肛现象，身体蜷缩。由小鼠便血与腹泻的症状情况观察结果可看出，对照组和茯砖茶提取物处理组的症状差异不明显。

2.3 茯砖茶提取物对小鼠肠道的影响

为进一步考察DSS诱导对小鼠肠道的损伤和茯砖茶的保护作用，我们测量了小鼠的肠道长度并取近肛门端1 cm处的肠道组织进行了H&E染色。发现茯砖茶提取物对小鼠的肠道组织长度没有显著影响（图3-A和3-B）。H&E染色结果表明（图3-C），模型组小鼠的肠道组织细胞排列紊乱，上皮细胞大量破损，肠道粘膜损坏，隐窝损坏，有大量的炎性细胞浸润。而FWE组、FES组和FEP组，损伤程度相对减轻。在FWE处理组，肠道粘膜组织结构、肠道上皮细胞基本完整，隐窝结构清晰可见；FES组虽然仍有一定的炎症细胞浸润，但粘膜组织结构、肠道上皮细胞损伤较小，隐窝结构破损较轻；在FEP处理组中，虽然已经恢复了一部分的隐窝结构，但粘膜组织结构、肠道上皮细胞还未完全恢复，仍有炎性细胞浸润。表明FWE和FES处理对DSS诱导小鼠肠道炎症的缓解作用要好于FEP。

注：FWE：水提取物；FES：醇溶提取物；FEP：醇沉物。下同

图2 茯砖茶提取物对小鼠体质量、饮水量、便血及腹泻的影响

2.4 茯砖茶提取物对IBD小鼠氧化应激和炎症的影响

IBD伴随着氧化应激和炎症的发生。为研究茯砖茶提取物对小鼠IBD的作用机制，我们首先分析了小鼠肠道局部氧化应激状态和炎症因子水平。结果表明，在IBD对照组中小鼠肠道的抗氧化酶SOD、CAT的活力以及GSH的含量较低（图4-A—4-C），而炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α则处于较高水平（图4-D—F）。茯砖茶提取物可以显著提升小鼠肠道局部的抗氧化应激能力和降低炎症因子水平。同时，无论是对抗氧化应激的提升还是炎症的抑制，FWE的效果最为突出，其次是FES，而FEP作用相对较弱。

尽管炎症性肠炎是局部疾病，但是却存在潜在的全身性炎症的风险。为此，我们进一步评价了茯砖茶提取物对IBD小鼠血清中氧化应激状态和炎症因子水平的影响（图5-A—5-F）。结果发现，IBD模型小鼠血清中SOD和CAT活性与GSH含量较低，分别只有241.8 U·mL-1、87.7 U·mL-1和7.5 ng·mL-1，茯砖茶提取物处理后SOD、CAT的活性及GSH含量显著提升了。在血清炎症因子水平方面，茯砖茶能显著抑制IBD小鼠体内的IL-6、IL-1β、TNF-α水平，效果趋势与抗氧化一致。这些结果表明，茯砖茶提取物能显著缓解DSS诱导的小鼠体内（包括肠道局部和血清）氧化应激和炎症水平。

2.5 茯砖茶提取物对抗氧化和抗炎信号通路关键蛋白表达的影响

为进一步探究茯砖茶提取物对IBD小鼠的抗氧化和抗炎机制，我们通过western blot评价了茯砖茶提取物对小鼠肠道炎症和抗氧化重要信号通路的影响。结果如图6所示，FWE处理能显著降低小鼠肠道组织的炎症相关信号通路重要蛋白NF-κB p65水平，同时提升IκBα的蛋白表达水平；此外，Nrf2和HO-1是机体抗氧化相关信号通路的重要蛋白。在本试验中，FWE能显著提高Nrf2和HO-1的表达。FES虽然能提高Nrf2和HO-1的表达，但与IBD模型组对比没有显著性差异。而在FEP处理组中，小鼠肠道组织中Nrf2和HO-1的表达水平与模型组相比没有明显提高。

注：CK：对照；FWE：水提取物；FES：醇溶提取物；FEP：醇沉物。*表示P<0.05，***表示P<0.001。下同

图5 茯砖茶提取物对小鼠血清中抗氧化及炎症因子的影响

图6 茯砖茶提取物对小鼠肠道组织中炎症和氧化应激相关通路信号的影响

3 讨论与结论

茯砖茶属于黑茶的一种，因自带“金花”——“冠突散囊菌”而备受关注。研究发现茯砖茶具有降血糖、调节血脂、抗氧化、减肥及防治腹泻等功效[21]。同时，茯砖茶提取物还具有增强肠道组织修复、调节肠道微生物和抑制肠炎症等功能，在维护肠道健康方面显示出良好的应用前景[17]。茯砖茶功能的物质基础主要是多酚和多糖等活性物质，然而，不同提取工艺会导致活性物质在提取物中具有不同的富集状态，这是否会引起提取物功能的变化是一个值得关注问题。

本试验中，我们通过水提醇沉的手段，得到了FWE、FES和FEP 3个茯砖茶提取物。成分分析结果表明，醇沉手段一定程度上能富集茯砖茶水提物中的多酚类和多糖类物质，使得FES中多酚含量显著高于FEP；而FEP中含有更高的多糖类物质。已有研究显示多酚[8,22]和多糖[23-24]对炎症性肠病均有良好的防治效果。在DSS造模前15 d通过饮水摄入方式对小鼠进行预处理，进而考察不同茯砖茶提取物对DSS诱导的炎症性肠病预防效果，探究不同茯砖茶提取物的功效差异。小鼠经过DSS诱导后，小鼠体重逐渐下降，肠道长度缩短，结构受到破损，隐窝和杯状细胞损伤，且有炎症细胞浸润。虽然茯砖茶提取物处理无法直接阻止IBD的发生，但是能不同程度减轻相关损伤，且预防效果为FWE＞FES＞FEP。

正常的机体中，促炎和抗炎的细胞因子处于平衡状态，但IBD机体中，肠道的细胞因子平衡状态被打破，促炎因子表达量增加，从而引起炎症反应，造成肠道损伤[25-26]。NF-κB在肠道炎症的研究中具有重要作用。正常状态下，NF-κB与IκB以二聚体的形式形成复合物，此时其还未有活性。在炎症机体内，IκB蛋白激酶IKK发生活化，使IκB磷酸化并降解，IκB与NF-κB解离后，激活NF-κB使其进入细胞核调控基因转录。NF-κB活性增加，则调控炎症因子的反应，如IL-6、TNF-α[27]。在本试验中，可以看到在DSS诱导Control组小鼠的血清和肠道组织上清液中，IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平较高，而3种茯砖茶提取物处理都降低了细胞因子的含量，表明茯茶提取物能有效缓解炎症性肠炎的机体炎症水平。在通路信号蛋白表达水平中，FWE组小鼠肠道组织的NF-κB p65蛋白水平有所降低，而FES和FEP组没有明显变化，而与NF-κB p65蛋白相结合并抑制NF-κB p65蛋白活化的IκBα蛋白水平在FWE组和FES组中有所增加，说明FWE和FES能使肠道组织中的NF-κB与IκB的结合更加稳定。

Nrf2是一个重要的信号转录因子，关联到SOD和HO-1等酶的表达水平。Nrf2的激活可以抑制IκK/IκB的磷酸化及NF-κB p65的核转录，由此钝化NF-κB信号通路。在炎症损伤中，Nrf2对于炎症信号激活和氧化应激都具有调控作用，增加HO-1和Nrf2的蛋白意味着减少了促炎因子和氧化应激水平[28-30]。在本试验中，茯砖茶提取物可以显著提高肠炎小鼠血清和肠道组织中的SOD、CAT、GSH等酶蛋白水平，其中FWE效果最佳，而富含多糖的FEP效果最差。在氧化应激相关蛋白通路表达水平中，Nrf2和HO-1的蛋白水平在FWE组和FES组有所增加，说明FWE和FES能够增加小鼠肠道的抗氧化应激能力。综上，茯砖茶提取物可能通过活化了Nrf-2/HO-1通路，抑制NF-κB的表达来减缓DSS对小鼠肠道所带来的损伤。

已有研究表明，儿茶素能够缓解肠道的氧化损伤，调节与炎症相关的氧化应激信号通路。2017年，Gerges等[31]发现儿茶素能够改善UC症状，稳定肥大细胞。2018年，Rahman等[32]发现儿茶素能够调控TLR4的表达来阻断NF-κB的活化以及调控其上游IKK复合物，从而抑制炎症因子TNF-α的表达。此外，茶黄素和EGCG能够缓解IBD的炎症水平，减少肠癌细胞的增殖[33]。然而，也有研究发现摄入EGCG会进一步加剧患肠炎小鼠体重的降低[9]，EGCG能够减少能量和营养的吸收[34]，可以起到减轻肥胖者体重的效果。然而，对于营养不良的个体，包括IBD患者，这种作用可能是有害的。在茯砖茶发酵过程中，茶叶中多酚类物质逐渐被聚合氧化，形成的茶黄素、茶红素及其中间产物的刺激性会有所减小[35-36]。本研究也发现茯砖茶水提物组小鼠的体重减轻也较茯砖茶多酚组少，且小鼠肠道组织的修复也有所改善。

综上所述，本研究发现茯砖茶对DSS诱导炎症性肠炎具有一定的预防保护作用，其中FWE效果最佳，FES次之，而FEP的功效不太明显，表明茯砖茶对炎症性肠病的功效可能是诸多功效成分的协同作用。同时，本研究中茯砖茶多糖类物质的富集降低了茯砖茶提取物对于炎症性肠病的功效。这些结果提示将茯砖茶在肠道健康方面应用时需要考虑其中不同的成分组成。此外，我们研究发现茯砖茶提取物能够通过抗氧化和抗炎等机制来缓解DSS诱导的肠病，但是其中更深入的作用机制还需更进一步研究。

[1] Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies [J]. The Lancet, 2017, 390(10114): 2769-2778.

[2] Danese S, Fiocchi C. Ulcerative colitis [J]. New England Journal of Medicine, 2011, 365(18): 1713-1725.

[3] Ghosh S, Mitchell R. Impact of inflammatory bowel disease on quality of life: Results of the European Federation of Crohn's and Ulcerative Colitis Associations (EFCCA) patient survey [J]. Journal of Crohns & Colitis, 2007, 1(1): 10-20.

[4] Hashimoto K, Oshima T, Tomita T, et al. Oxidative stress induces gastric epithelial permeability through claudin-3 [J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008, 376(1): 154-157.

[5] Neurath MF. Cytokines in inflammatory bowel disease [J]. Nature Reviews Immunology, 2014, 14(5): 329-342.

[6] Ng SC, Tang W, Leong RW, et al. Environmental risk factors in inflammatory bowel disease: a population-based case-control study in Asia-Pacific [J]. Gut, 2015, 64(7): 1063-1071.

[7] Wang YF, Qin OY, Xia B, et al. Multicenter case-control study of the risk factors for ulcerative colitis in China [J]. World Journal of Gastroenterology, 2013, 19(11): 1827-1833.

[8] Kim M, Murakami A, Miyamoto S, et al. The modifying effects of green tea polyphenols on acute colitis and inflammation-associated colon carcinogenesis in male ICR mice [J]. Biofactors, 2010, 36(1): 43-51.

[9] Bitzer ZT, Elias RJ, Matam VK, et al. (-)-Epigallocatechin-3-gallate decreases colonic inflammation and permeability in a mouse model of colitis, but reduces macronutrient digestion and exacerbates weight loss [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2016, 60(10): 2267-2274.

[10] Chen G, Xie M, Dai Z, et al. Kudingcha and fuzhuan brick tea prevent obesity and modulate gut microbiota in high-fat diet fed mice [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2018, 62(6): e1700485. DOI: 10.1002/mnfr.201700485.

[11] Chen G, Xie M, Wan P, et al. Fuzhuan brick tea polysaccharides attenuate metabolic syndrome in high-fat diet induced mice in association with modulation in the gut microbiota [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2018, 66(11): 2783-2795.

[12] Foster MT, Gentile CL, Kimberly CY, et al. Fuzhuan tea consumption imparts hepatoprotective effects and alters intestinal microbiota in high saturated fat diet-fed rats [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2016, 60(5): 1213-1220.

[13] Li Q, Liu Z, Huang J, et al. Anti-obesity and hypolipidemic effects of Fuzhuan brick tea water extract in high-fat diet-induced obese rats [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2013, 93(6): 1310-1316.

[14] Chen G, Wang M, Xie M, et al. Evaluation of chemical property, cytotoxicity and antioxidant activityandof polysaccharides from Fuzhuan brick teas [J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2018, 116: 120-127.

[15] Liu Z, Lin Y, Zhang S, et al. Comparative proteomic analysis using 2DE-LC-MS/MS reveals the mechanism of Fuzhuan brick tea extract against hepatic fat accumulation in rats with nonalcoholic fatty liver disease [J]. Electrophoresis, 2015, 36(17): 2002-2016.

[16] 余智勇, 黄建安, 杨明臻, 等. 茯砖茶抗腹泻效果研究[J]. 茶叶科学, 2009, 29(6): 465-469.

[17] Liu B, Yang T, Zeng LN, et al. Crude extract of Fuzhuan brick tea ameliorates DSS-induced colitis in mice [J]. International Journal of Food Science and Technology, 2016, 51(12): 2574-2582.

[18] Xu YQ, Liu PP, Shi J, et al. Quality development and main chemical components of Tieguanyin oolong teas processed from different parts of fresh shoots [J]. Food Chemistry, 2018, 249: 176-183.

[19] 张勇. 铁皮石斛茎、叶、花多糖理化性质及抗氧化、免疫调节活性研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2016.

[20] 何佳. E3泛素酶FBXW7正向调控小鼠炎症性肠病和CX3CR1(int)炎性巨噬细胞的聚集[D]. 杭州: 浙江大学, 2016.

[21] 张遴, 方悦. 茯茶功效研究进展[J]. 食品研究与开发, 2018, 39(9): 208-212.

[22] Boussenna A, Cholet J, GoncalvesMN, et al. Polyphenol-rich grape pomace extracts protect against dextran sulfate sodium-induced colitis in rats [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2016, 96(4): 1260-1268.

[23] Sabri S, Hsu YH, He JL, et al. Dietary polysaccharide-rich extract from Eucheuma cottonii modulates the inflammatory response and suppresses colonic injury on dextran sulfate sodium-induced colitis in mice [J]. PLoS ONE, 2018, 13(10): e0205252. DOI: 10.1371/JOURNAL.PONE.0205252.

[24] Ramberg JE, Nelson ED, Jacoby HI, et al. Plant polysaccharide supplements reduce the expression of pro-inflammatory genes in colonic tissue of mice with dextran sulfate sodium-induced colitis [J]. International Journal of Probiotics and Prebiotics, 2010, 5(4): 229-236.

[25] Thiele K, Bierhaus A, Autschbach F, et al. Cell specific effects of glucocorticoid treatment on the NF-kappa Bp65/I kappa B alpha system in patients with Crohn's disease [J]. Gut, 1999, 45(5): 693-704.

[26] Atreya I, Atreya R, Neurath MF. NF-kappa B in inflammatory bowel disease [J]. Journal of Internal Medicine, 2008, 263(6): 591-596.

[27] Tak PP, Firestein GS. NF-kappa B: a key role in inflammatory diseases [J]. Journal of Clinical Investigation, 2001, 107(1): 7-11.

[28] Saber S, Khalil RM, Abdo WS, et al. Olmesartan ameliorates chemically-induced ulcerative colitis in rats via modulating NF-kappaB and Nrf-2/HO-1 signaling crosstalk [J]. Toxicol Appl Pharmacol, 2019, 364: 120-132.

[29] Akiyama S, Nesumi A, Mari MY, et al. Effects of anthocyanin-rich tea "Sunrouge" on dextran sodium sulfate-induced colitis in mice [J]. Biofactors, 2012, 38(3): 226-233.

[30] Li W, Khor TO, Xu C, et al. Activation of Nrf2-antioxidant signaling attenuates NF-kappaBinflammatory response and elicits apoptosis [J]. Biochem Pharmacol, 2008, 76(11): 1485-1489.

[31] Gerges GA, Rizzo M, Eid A, et al. Tea catechins induce crosstalk between signaling pathways and stabilize mast cells in ulcerative colitis [J]. Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents, 2017, 31(4): 865-877.

[32] Rahman SU, Li Y, Huang Y, et al. Treatment of inflammatory bowel disease via green tea polyphenols: possible application and protective approaches [J]. Inflammopharmacology, 2018, 26(2): 319-330.

[33] Carini F, Tomasello G, Jurjus A, et al. Colorectal cancer and inflammatory bowel diseases: effects of diet and antioxidants [J]. Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents, 2017, 31(3): 791-795.

[34] Grove KA, Sudathip ST, Kennett MJ, et al. (-)-Epigallocatechin-3-gallate inhibits pancreatic lipase and reduces body weight gain in high fat-fed obese mice [J]. Obesity, 2012, 20(11): 2311-2313.

[35] 王增盛, 施兆鹏, 刘仲华, 等. 论茯砖茶品质风味形成机理[J]. 茶叶科学, 1991(S1): 49-55.

[36] 刘玉倩, 杨家干. 茯砖茶发花过程菌落及主要内含物质变化[J]. 蚕桑茶叶通讯, 2017(5): 30-33.

Protective Effects of Fu Brick Tea Extracts on Inflammatory Bowel Disease Induced by Dextran Sulfate Sodium in Mice

HU Ankai1, YAO Liyun2, ZHAO Yueling2, LIU Chang1, WANG Yuefei2, XU Ping2*

1. Department of dairyengineering, Northeast Agricultural University, Haerbin 150030, China; 2. Tea Research Institute, Zhejiang Univerisity, Hangzhou 310058, China

Fu brick tea is a special dark tea in China. In the present work, three extracts, including Fu brick tea water extract (FWE), Fu brick tea ethanol soluble fraction (FES) and Fu brick tea ethanol precipitation fraction(FEP), were prepared and used to further explore their protective effects on inflammatory bowel disease in mice. Researches show that all the Fu brick tea extracts could alleviate the intestinal structure damage of IBD mice. Moreover, the extracts increased the activities of SOD, CAT and the levels of GSH and reduced the levels of IL-6, IL-1β, TNF-α in serum and colon tissue supernatant of mice. Furthermore, the protein level of NF-κB p65 in the colon tissues in the FWE group was decreased compared to the model group. The protein level of IκBα was increased in the FWE group and FES group. Levels of Nrf2 and HO-1 were also increased in the FWE and FES groups. In conclusion, Fu brick tea extracts had a protective effect on IBD mice induced by DSS.

Fu brick tea, inflammatory bowel disease, inflammation, oxidative stress

S571.1；R574

A

1000-369X(2019)06-641-11

2019-07-19

2019-08-25

胡安恺，男，本科，主要从事茶叶营养方面的研究。

zdxp@zju.edu.cn