藏药甘青虎耳草总黄酮对小鼠抗炎作用的研究

崔 玮，曾巧英

(1.甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070；2.河西学院 生命科学与工程学院，甘肃 张掖 734000)

炎症反应是机体最基本的抗损伤反应，但给机体也带来很多伤害，如引起关节炎、哮喘以及机体失调，因此抗炎药应运而生。但临床应用的抗炎药物存在很多问题，如引起胃部不适、增加心脏病发作的危险率等[1]。黄酮类化合物是许多中草药的有效成分,具有许多生物活性[2]，近年来有关其在抗炎、调节免疫、抗衰老作用方面的研究较多[3,4]。

甘青虎耳草（Saxifraga tangutica Engl.）为虎耳草科植物。生于海拔2 600～4 900 m的青藏高原－喜马拉雅地区。藏族人民常用它们治疗肝胆类疾病，并称之为 “松蒂，其味苦性寒，具有清肝胆湿热，排脓敛疮之功效，临床上多用于肝炎、胆囊炎、感冒发热及热毒疮痈等的治疗[5]。据有关资料表明甘青虎耳草中黄酮类生物活性物质较丰富。但有关甘青虎耳草极其黄酮抗炎的研究未见报道。本实验提取甘青虎耳草中的黄酮类化合物，通过小鼠耳肿胀试验、小鼠腹腔毛细血管通透性试验以及小鼠棉球肉芽肿试验探究甘青虎耳草黄酮对小鼠的抗炎作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要药品与试剂 甘青虎耳草购于青海西宁，生理盐水，95%酒精，氨苄青霉素钠（80万单位），0.7%冰醋酸，0.1%伊文思兰，地塞米松（1ml/5mg）。

1.1.2 实验动物 健康昆明种小鼠，8～10周龄，体重在20～21g，由兰州大学医学部实验动物中心提供。动物合格证号为：甘医动字第14—006。

1.2 方法

1.2.1甘青虎耳草黄酮的制备 甘青虎耳草（Saxifraga taugutica Engl.）全株购自青海塔尔寺藏医院。将甘青虎耳草烘干、粉碎，石油醚浸泡除脂后用70%乙醇超声破壁，减压浓缩后加乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩后冻干。冻干粉用蒸馏水溶解、AB-8大孔树脂吸附，先用去离子水洗脱除杂，再用 90% 乙醇洗脱，洗脱液浓缩后异丙醇洗 2 次，过滤并浓缩，加入甲醇除杂，最后得棕黄色的甘青虎耳草黄酮。以芦丁作对照，硝酸铝法测得提取物中黄酮的纯度为 82.07%。

1.2.2 实验动物的分组及用药 昆明种小鼠分为甘青虎耳草黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组（分别灌胃50 mg/kg、100 mg /kg、200 mg /kg的甘青虎耳草黄酮），地塞米松组（灌胃10mg /kg的地塞米松）和空白对照组（灌胃生理盐水）。

1.2.3 小鼠皮下棉球肉芽肿试验 小鼠随机分为五组，每组六只，分别为虎耳草总黄酮溶液低剂量组（50 mg/kg）、中剂量组（100 mg /kg）、高剂量组（200 mg /kg）、地塞米松组（10mg /kg）、空白对照组，分开饲养。而后用氨基甲酸乙酯20% 腹腔注射0.02 ml进行麻醉 ,在腹部剪毛消毒切一个小口向两侧腹股沟下各植入一个5.0 mg重的灭菌棉球,从手术次日连续给药7 d ,给药方式及剂量按表1所示。第8 d 拉颈处死小鼠,切开腹部皮肤,将棉球连同周围的肉芽组织一起取出,剔除脂肪组织,放在已写好编号的培养皿里的滤纸上,置于60 ℃干燥箱烘干24 h ,精确称取重量,减去棉球重量即为肉芽组织增生的重量。按照以下公式计算肉芽组织重量。

1.2.4 伊文斯蓝法测定小鼠腹腔毛细血管通透性试验 小鼠分组处理同表1。最后一次给药1 h后在每只老鼠尾静脉注射伊文思蓝0.01ml/g，随即腹腔注射0.7%冰醋酸0.1 ml/10g。20 min后拉颈处死小鼠剪开腹部，暴露腹膜，用10 ml生理盐水充分冲洗腹腔，收集腹腔液，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，在紫外分光光度计590 nm波长处测得OD值，以OD值表示腹腔液中的伊文思蓝含量。

1.2.5 二甲苯致小鼠耳肿胀试验 小鼠分组处理同表1。最后一次给药20 min后在每只老鼠的左耳上涂上0.02 ml二甲苯致炎，致炎后拉颈处死小鼠，剪下小鼠的左右耳，并用打孔器在两耳的相同部位打下同样大小的耳片，精确称重按照以下公式计算鼠耳肿胀率、耳肿胀度以及肿胀抑制率。

2 结果与分析

2.1 甘青虎耳草总黄酮对小鼠棉球肉芽肿的影响[6]

由图1可知，与空白组比较，甘青虎耳草总黄酮中、高剂量组和地塞米松组均有显著性差异；与地塞米松相比，虎耳草总黄酮低、中剂量组有显著性差异，而高剂量组无显著性差异。说明中、高剂量组均可以明显抑制小鼠棉球肉芽肿的发生，但高剂量的效果好于中剂量，而低剂量不能抑制小鼠棉球肉芽肿。综上所述，表明虎耳草总黄酮的高剂量组和中剂量组能显著抑制小鼠棉球肉芽肿。

图1 甘青虎耳草总黄酮对小鼠棉球肉芽肿的影响

2.2 甘青虎耳草总黄酮对毛细血管通透性的影响[6]

由图2可知，甘青虎耳草总黄酮高剂量组和空白组比较差异显著，与地塞米松组比较差异不显著，说明高剂量组和地塞米松能明显抑制小鼠毛细血管通透性增加。中剂量组和空白组相比较差异较显著，与地塞米松组比较差异也显著，说明中剂量组可以抑制小鼠毛细血管通透性增加，但效果没有地塞米松明显。低剂量组和空白组相比较差异不显著，与地塞米松差异显著，说明低剂量组不能抑制小鼠毛细血管通透性增加。

图2 虎耳草总黄酮对毛细血管通透性的影响

2.3 甘青虎耳草总黄酮对小鼠耳肿胀的影响[7]

由表1可知，甘青虎耳草总黄酮中、高剂量组和空白组比较差异较显著，空白组和地塞米松相比较差异不显著，表明中、高剂量组和地塞米松组都明显减轻二甲苯所致小鼠的耳朵肿胀，肿胀抑制率达到65.29%和75.29%。甘青虎耳草总黄酮低剂量组与空白组相比较差异显著，与地塞米松组相比较差异也显著，说明低剂量给药也能显著减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀，但效果明显比地塞米松效果差，肿胀抑制率仅为21.76%。可见甘青虎耳草总黄酮中、高剂量可以显著抑制二甲苯所致小鼠耳朵肿胀。

3 讨论

炎症是一种极为常见而又十分重要的病理过程, 是人类赖以生存的防御性和保护性反应.其基本病理变化表现为局部微血管反应和血液成分的渗出, 组织和细胞的变形, 坏死以及增生和修复[8]。

二甲苯是一个无色透明液体物质，毒性比较大，其作用机理是因为它可增加毛细血管的通透性，根据毛细血管和组织间存在的静态平衡关系来分析，因为毛细血管通透性增高，那么渗入组织的液体就增多，也就是肉眼看到的红肿现象[9]。在小鼠的左耳上涂上二甲苯所有小鼠的耳朵都不同程度的出现红肿，空白组的最明显。通过称重分析表明虎耳草总黄酮中剂量组（100 mg /kg）和高剂量（200 mg /kg）可以明显抑制二甲苯所致小鼠耳朵肿胀。

醋酸促进小鼠毛细血管通透性增加，尾静脉注射伊文思蓝，腹腔注射醋酸后，小鼠腹腔伊文斯蓝的渗出增多，实验结果显示甘青虎耳草黄酮高剂量组（200 mg /kg）伊文思蓝的渗出量明显减少。

棉球作为异物植入小鼠皮下后，会刺激机体产生与临床某些炎症后期相似的病理变化，即形成肉芽组织[9]。本试验结果显示高剂量组（200 mg /kg）可以明显抑制小鼠棉球肉芽肿的产生。

综上所述，甘青虎耳草黄酮具有一定的抗急、慢性炎症作用，但其抗炎机理还需进一步深入研究。

表1 甘青虎耳草黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响