血三七正丁醇部位化学成分的研究

赵 凡 ，戴 湾，李翎熙，李 漓，蔡 佳，肖玉琴，许光明*，周小江*

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.岳阳市中医院，湖南 岳阳 414000）

血三七，别名红三七，为蓼科蓼属植物中华抱茎蓼Polygonum amplexicauleD.Don var.SinenseForbes et Hemsl 的干燥根茎。分布于贵州各地苗乡，湖北、湖南、广西、云南、四川等省，是鄂西地区土家族常用的民族药［1］。血三七具有清热解毒、活血化瘀止痛的功效，用于胃痛、跌打损伤、骨折、劳伤腰痛、风湿疼痛等症状，其主要作用是散瘀止血、消肿止痛。因此，本实验选用资源丰富、活血化瘀效果良好的血三七为研究对象，研究表明其水煎液能防治血栓，具有抗动脉粥样硬化［2］、抗血栓［3］、抗炎［4］、抗真菌［5］、抗氧化［6］等药理作用。为了探究其物质基础，本实验对血三七进行化学成分研究，从其正丁醇部位分离得到11 个化合物，其中化合物6～11 均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

WFH-203B 型三用紫外光谱仪（上海精科实业有限公司）；BrukerAM-600 核磁共振仪（德国Bruker 公司）；Agilent 质谱仪、Agilent 1200 series高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；KQ-500B 型超声波清洗仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；RE-52AA 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；BSZ-100 型自动部分收集器（上海青浦沪西仪器厂）；柱层析硅胶（100～200 目、200～300 目）、硅胶GF254和硅胶H（青岛海洋化工厂）。石油醚、乙酸乙酯、甲醇、环己烷（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）；三氯甲烷、丙酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。

血三七药材采自安徽亳州，经湖南中医药大学药学院周小江教授鉴定为蓼科蓼属植物中华抱茎蓼Polygonum amplexicauleD.Don var.sinenseForbes et Hemsl 的干燥根茎。

2 提取与分离

50 kg 血三七干燥药材粉碎后，用70%乙醇回流提取2 次（第1 次提取2 h，8 倍量溶剂；第2次提取1.5 h，6 倍量溶剂），弃药渣。合并提取液，经浓缩至无醇味，得到浸膏湿重9 kg，将浸膏加水分散，用石油醚萃取10 次，乙酸乙酯萃取12次，正丁醇萃取12 次后，减压回收溶剂，得到石油醚部位（200 g）、乙酸乙酯部位（2.4 kg）、正丁醇部位（4 kg）。

取正丁醇部位4 kg，使用大孔吸附树脂，分别用水，30%、50%、70%、100% 乙醇洗脱，合并70%、100%乙醇洗脱部位为分段1（760 g），50%洗脱部位为分段2（1 400 g），30%乙醇洗脱部位为分段3（1 500 g）。

分段1 经正相硅胶，石油醚-乙酸乙酯20∶1～1∶20 洗脱，再用甲醇-乙酸乙酯1∶50～1∶1 洗脱，最后使用甲醇洗脱，得到10 个部分，分别为部分A～J。

部分D 经正相硅胶，石油醚-乙酸乙酯20∶1～1∶10 洗脱，使用薄层色谱检测并指导合并，最后大合并得到6 个组分（a～f），将组分b、c 分别经正相硅胶、制备薄层、Sephadex LH-20 层析等进行分离纯化，得化合物1（8 mg）、6（3.5 mg）；将组分e、f 分别经正向硅胶、制备薄层、Sephadex LH-20 层析和半制备HPLC 等进行分离纯化，得到化合物2（3.6 mg）、3（3.9 mg）、4（4.5 mg）。

部分E 在正相硅胶柱上用二氯甲烷-乙酸乙酯100∶1～1∶6 洗脱，得到7 个组分，分别为组分1～7。其中组分5 经减压正相硅胶、Sephadex LH-20、HPLC 纯化后，得化合物8（3.9 mg）。

部分G 经正相硅胶，石油醚-乙酸乙酯12∶1～1∶12 洗脱后，用乙酸乙酯洗脱，得到7 个组分，分别为组分1～7。组分6 经减压正相硅胶，石油醚-乙酸乙酯-甲醇7∶3∶0.3～7∶3∶1.1 洗脱后，得到8 个馏分，分别为馏分Ⅰ～Ⅷ。馏分Ⅵ经反相硅胶，甲醇15%～55% 洗脱，得到11 个次馏分，分别为a～k；其中次馏分a 经Sephadex LH-20、HPLC 纯化，得化合物7（3.1 mg）；次馏分b 经Sephadex LH-20、HPLC 纯化，得化合物 9（21 mg）、10（65 mg）、11（70 mg）；次馏分k 经反复Sephadex LH-20，得化合物5（198 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：橙黄色粉末，分子式C15H10O5。ESI-MSm/z：269.048 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.40（1H，s，H-5），7.08（1H，s，H-4），7.05（1H，s，H-7），6.54（1H，s，H-2），2.36（3H，s，H-5），12.01（1H，m，1-OH），11.93（1H，m，8-OH），11.36（1H，s，3-OH）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：190.1（C-9），181.7（C-10），166.0（C-3），165.0（C-1），162.0（C-8），148.7（C-6），135.5（C-14），133.2（C-12），124.5（C-7），120.9（C-5），113.7（C-11），109.4（C-13），109.2（C-4），108.3（C-2），22.0（C-15）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为大黄素。

化合物2：黄色粉末，分子式C15H10O7。ESIMSm/z：301.044 4［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.73（1H，d，J＝8.5 Hz，H-2′），7.63（1H，d，J＝8.5，2.2 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.39（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.18（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：175.9（C-4），164.2（C-7），161.1（C-9），156.8（C-5），147.4（C-4′），146.6（C-2），144.8（C-3′），135.8（C-3），122.7（C-1′），120.3（C-6′），114.8（C-5′），114.6（C-2′），103.1（C-10），93.8（C-8），93.0（C-6）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为槲皮素。

化合物3：白色粉末，分子式C10H10O4。ESIMSm/z：193.057 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.60（1H，d，J＝15.9 Hz，H-7），7.18（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.07（1H，d，J＝8.2，1.9 Hz，H-6），6.81（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），6.31（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8），3.90（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：169.6（C-9），149.1（C-3），148.0（C-4），145.5（C-7），126.4（C-1），122.6（C-2），115.1（C-6），114.5（C-8），110.3（C-5），55.0（C-10）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为阿魏酸。

化合物4：白色粉末，分子式C8H10O2。1HNMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.03（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，6），6.70（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，5），3.69（2H，t，J＝7.2 Hz，H-8），2.72（2H，t，J＝ 7.2 Hz，H-7）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：155.4（C-4），129.6（C-1），129.5（C-2，6），114.7（C-3，5），63.2（C-8），38.01（C-7）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为对羟基苯乙醇。

化合物5：白色粉末，分子式C35H60O6。ESIMSm/z：575.433 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：5.32（1H，d，J＝5.0 Hz，H-6），4.89（1H，d，J＝4.7 Hz，OH-3′），4.86（1H，t，J＝4.2 Hz，OH-2′，OH-4′），4.42（1H，t，J＝5.8 Hz，OH-6′），4.21（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.64（1H，m，H-6′），3.46（1H，m，H-3），3.39（1H，dd，J＝11.7，5.9 Hz，H-6′），3.11（1H，dd，J＝8.8，4.6 Hz，H-3′），3.06（1H，dd，J＝7.9，5.9 Hz，H-5′），3.01（1H，td，J＝9.1，5.1 Hz，H-4′），2.89（1H，td，J＝8.5，4.8 Hz，H-2′），2.36（1H，m，H-4），2.12（1H，m，H-4），1.96（1H，m，H-7），1.36（1H，m，H-7），1.93（1H，m，H-12），1.15（1H，m，H-12），1.91（1H，m，H-2），1.48（1H，m，H-2），1.81（2H，m，H-16），1.77（1H，m，H-1），1.01（1H，m，H-1），1.62（1H，m，H-25），1.54（1H，m，H-15），1.02（1H，m，H-15），1.48（1H，m，H-11），1.41（1H，m，H-11），1.37（1H，d，J＝4.6 Hz，H-8），1.33（1H，m，H-20），1.28（1H，m，H-28），1.22（1H，m，H-28），1.25（1H，m，H-22），1.15（2H，m，H-23），1.02（1H，m，H-22），1.07（1H，dd，J＝17.7，7.9 Hz，H-17），0.98（1H，m，H-14），0.95（3H，s，H-19），0.92（1H，m，H-24），0.90（3H，d，J＝6.5 Hz，H-21），0.86（1H，m，H-9），0.82（3H，t，J＝7.1 Hz，H-29），0.82（3H，t，J＝7.1 Hz，H-27），0.79（3H，d，J＝6.8 Hz，H-26），0.65（3H，s，H-18）；13C-NMR（150 MHz，DMSOd6）δ：141.7（C-5），122.5（C-6），102.0（C-1′），78.2（C-3），78.0（C-3′），74.7（C-5′），73.5（C-2′），71.4（C-4′），62.4（C-6′），57.6（C-14），55.8（C-17），51.2（C-9），46.4（C-24），43.1（C-13），40.5（C-12），39.6（C-4），38.1（C-1），37.5（C-10），36.8（C-20），34.6（C-22），32.7（C-8），32.6（C-7），30.5（C-2），30.0（C-25），29.1（C-16），26.7（C-23），25.1（C-15），23.9（C-28），21.9（C-11），21.0（C-27），20.4（C-19），20.2（C-26），19.9（C-21），13.1（C-29），13.0（C-18）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为胡萝卜苷。

化合物6：白色粉末，分子式C14H12O3。ESIMSm/z：229.079 4［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.35（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′），6.96（1H，d，J＝16.2 Hz，H-a），6.80（1H，d，J＝16.2 Hz，H-b），6.77（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3′，5′），6.45（2H，d，J＝2.2 Hz，H-2，6），6.16（1H，t，J＝2.2 Hz，H-4）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：158.3（C-3，C-5），157（C-4′），139.9（C-1），129.0（C-1′），128.0（C-a），127.4（C-2′，6′），125.6（C-b），115.1（C-3′，5′），104.4（C-2，C-6），101.2（C-4）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为白藜芦醇。

化合物7：无色透明晶体，分子式C13H18O6。ESI-MSm/z：269.102 1［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），显示分子中存在1 个苯环的结构δ：7.43（3H，d，J＝8.8 Hz，H-3，H-5，H-7），7.34（1H，t，J＝7.4 Hz，H-6），7.28（1H，t，J＝7.3 Hz，H-4），4.94（1H，d，J＝11.8 Hz，H-1a），4.68（1H，d，J＝11.8 Hz，H-1b），4.36（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.91（1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz，H-6′a），3.70（1H，dd，J＝11.9，5.7 Hz，H-6′ b），3.35（1H，m，H-3′），3.32（1H，d，J＝1.7 Hz，H-5′），3.31（1H，d，J＝1.7 Hz，H-4′），3.27（1H，m，H-2′）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：137.7（C-2），127.9（C-3，C-7），127.8（C-4，C-6），127.3（C-5），101.9（C-1′），76.7（C-5′），76.6（C-3′），73.7（C-2′），70.3（C-4′），70.3（C-1），61.4（C-6′）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8：淡黄色粉末，分子式C8H10O。1HNMR（600 MHz，Methanol-d4），显示分子中存在1个对位取代苯环的结构δ：7.12（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5），6.86（2H，d，J＝8.8，H-2，6），3.38（3H，s，-OCH3），1.61（3H，s，H-7）；13CNMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：156.8（C-1），143.3（C-4），127.4（C-3，C-5），113.6（C-2，C-6），58.0（-OCH3），30.1（C-7）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为对甲氧基甲苯。

化合物9：白色粉末，分子式C16H30O8。ESIMSm/z：367.152 3［M+OH］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：5.09（2H，d，J＝9.9 Hz，H-1′），4.42（1H，m，H-2），4.35（2H，d，J＝7.8 Hz，H-6′），4.31（1H，dd，J＝7.8，3.8 Hz，H-3′），4.24（1H，t，J＝8.1 Hz，H-4′），3.89（1H，m，H-2′），3.81（1H，m，H-5′），2.55（1H，m，H-3），2.34（1H，m，H-3），2.44（1H，dtd，J＝13.1，H-4），2.09（2H，m，H-6），1.97（2H，m，H-5），1.29（3H，s，H-7），1.19（3H，s，H-9），1.11（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：101.5（C-1′），78.2（C-3′），77.9（C-1），76.2（C-5′），75.2（C-2′），75.0（C-2），73.5（C-4′），71.8（C-8），62.9（C-6′），35.2（C-4），32.3（C-6），29.1（C-3），28.9（C-9），26.8（C-10），24.8（C-7），22.8（C-5）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为（1R，2R，4S）-p-menthane-1，2，8-triol 1-O-β-D-glucopyranoside。

化合物10：白色粉末，分子式C21H20O11。ESI-MSm/z：449.109 1［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），显示分子中存在2 个苯环的结构，其中1 个苯环为对位取代δ：7.93（2H，d，J＝7.9 Hz，H-2′，6′），7.08（1H，d，J＝2 Hz，H-7），6.83（2H，d，J＝7.9 Hz，H-3′，5′），5.03（1H，d，J＝10.4 Hz，H-10b），4.90（1H，d，J＝12.5 Hz，H-11β），4.37（1H，dd，J＝12.5，7.2 Hz，H-11α），4.10（1H，t，J＝9.9 Hz，H-4a），3.97（1H，m，H-2），3.88（3H，s，9-OCH3），3.85（1H，t，J＝9.1 Hz，H-4），3.54（1H，t，J＝9.2 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：166.5（C-7′），164.3（C-6），162.7（C-8），151.1（C-10），147.9（C-9），140.9（C-4′），131.6（C-2′，C-6′），120.2（C-1′），118.0（C-6a），115.5（C-10a），114.9（C-3′，C-5′），109.8（C-7），79.9（C-4a），79.3（C-2），74.1（C-4），73.0（C-10b），70.6（C-3），63.4（C-11），59.5（9-OCH3）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为bergenin 11-O-p-hydroxybenzoate。

化合物11：白色粉末，分子式C22H22O13。ESI-MSm/z：495.113 4［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），显示分子中存在2 个苯环的结构δ：7.05（2H，s，H-2′，6′），7.04（1H，m，H-7），4.96（1H，d，J＝10.5 Hz，H-10b），4.82（1H，dd，J＝12.2，2.2 Hz，H-11β），4.36（1H，dd，J＝12.2，6.8 Hz，H-11α），3.92（1H，ddd，J＝9.9，6.8 Hz，H-2），3.85（3H，s，4′-OCH3），3.82（3H，s，9-OCH3），3.52（1H，dd，J＝10.0，8.6 Hz，H-4），3.27（1H，p，J＝1.7 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：166.3（C-7′），164.3（C-6），150.9（C-8），150.4（C-3′，C-5′），147.8（C-10），140.9（C-9），140.0（C-4′），124.7（C-1′），118.0（C-6a），115.5（C-10a），109.9（C-7），109.0（C-2′，C-6′），79.8（C-4a），79.2（C-2），74.0（C-4），73.0（C-10b），70.4（C-3），63.6（C-11），59.6（4′-OCH3），59.4（9-OCH3）。以上数据与文献［17］基本一致，故鉴定为11-O-（4′-O-methylgalloyl）-bergenin。

4 讨论

本研究从血三七正丁醇部位中分离得到11 个化合物，化合物6～11 均为首次从该植物中分离出来，在血三七正丁醇部位分离的化合物中，化合物9～11 极性偏大，在分离上有一定难度，因此在分离过程中，为了避免损失，减少使用正相硅胶柱，多采用凝胶柱及反相色谱柱。

根据文献报道化合物11 具有抗血小板的活性［18］；同时，该化合物可以通过抗氧化、抗炎的机制，对类风湿性关节炎有较好的治疗作用［19］；对丙型肝炎丝氨酸蛋白酶具有抑制活性［20］；文献报道化合物10 具有显著的抗氧化作用，并且与尿素酶抑制作用有关［21］；但是化合物9 无相关生物活性的报道，有待进一步探索。