HPLC法快速测定木香分气丸中α-香附酮的含量

王丽琼，吴 丽

(乐山市食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000)

木香分气丸主治宽胸消胀、理气止呕，用于肝郁气滞、脾胃不和所致胸膈痞闷、两肋胀满、胃脘疼痛、倒饱嘈杂、恶心呕吐、暖气吞酸，由木香、醋香附、陈皮、姜厚朴、枳实、醋莪术、炒山楂等十六味药材制成。木香分气丸中醋香附的使用量较大，香附为莎草科莎草属植物莎草的干燥根茎，主要成分为挥发油，其中α-香附酮是其主要有效成分之一[1-7]。《中国药典》2015年版一部中“木香分气丸”没有香附相关的鉴别和含量测定项目。参阅相关文献，梁艳[8]、陈晓明等[9]采用HPLC法同时测定木香分气丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量。孙全明等[10]采用HPLC法测定木香分气丸中丁香酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、厚朴酚与和厚朴酚的含量。汪武赞等[11]采用气相色谱法同时测定木香分气丸中厚朴酚、和厚朴酚、α-香附酮、乙酸龙脑酯、丁香酚5种挥发性成分含量。相关研究中未见HPLC法测定木香分气丸中α-香附酮含量的报道。为了有效控制木香分气丸质量，本研究采用超声直接提取，HPLC法快速测定木香分气丸中α-香附酮的含量，现报道如下。

1仪器与材料

1.1仪器

1260高效液相色谱仪，DAD检测器，OpenLAB CDS色谱工作站(美国Agilent公司)；XS205电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多，十万分之一)；CQ-100B超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)；ULPZY-250DROMB优普系列纯水设备(成都超纯科技有限公司)。

1.2试药

α-香附酮对照品(批号：110748-201513，含量：99.7%，中国食品药品检定研究院)；木香分气丸(市售，甘肃佛仁制药科技有限公司，批号分别为：181101、180304；甘肃河西制药有限责任公司，批号为：181001)；甲醇(色谱纯，分析纯)；磷酸(分析纯)；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Welch UltimateLP-C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相∶甲醇-0.05%磷酸溶液 (73∶27)；检测波长：249 nm；进样量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃。

2.2对照品溶液的制备

精密称取对照品α-香附酮23.29 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇使溶解并稀释至刻度，即得对照品贮备溶液；精密吸取对照品贮备溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取本品，粉碎，混合均匀，取约6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理60 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 空白试验

按处方比例制得不含醋香附的阴性样品，并按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液进样分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，α-香附酮与相邻峰分离度大于1.5，阴性样品溶液在对照品溶液α-香附酮峰位置无色谱峰，其他共存成分无干扰。色谱见图1。

注1.α-香附酮

2.5 线性与范围

精密吸取对照品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线性第一点溶液；分别精密吸取对照品贮备溶液0.5、1、2、4、8 mL，分别置25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得线性系列浓度溶液；照“2.1”项下色谱条件测定峰面积。以浓度C(μg·mL-1)为横坐标，相应峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=33.880C+0.619，r=1.000 0。表明α-香附酮在0.93～74.30 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6精密度试验

取“2.2”项下的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，连续6次，记录峰面积。结果，RSD为0.7% (n=6)，表明精密度符合要求。

2.7 重复性试验

取批号为181001的木香分气丸，照“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样测定。结果木香分气丸中α-香附酮的质量分数为0.181 mg·g-1，RSD(n=6)为1.2%，表明重复性良好。

2.8 加样回收率

取已知含量的批号为181101 (0.062 0 mg·g-1)的木香分气丸粉末约3 g，共6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品贮备液1 mL，按“2.3”项下方法提取，照“2.1”项下色谱条件测定6份供试品溶液中α-香附酮含量，计算加样回收率。结果平均加样回收率为99.1%，RSD1.7 %。见表1。

表1 回收率试验结果

2.9溶液的稳定性试验

精密量取“2.3”项下批号为181001的木香分气丸溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样10 μL，记录峰面积。结果木香分气丸中RSD(n=7)为0.6%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.10 含量测定

取3批木香分气丸样品，每批平行测定3份，照“2.3”项下方法制备样品溶液，照“2.1”项下色谱条件测定，采用外标法计算含量，结果见表2。

表2样品含量测定结果

3讨论

根据高效液相色谱仪二极管阵列检测器扫描的紫外光谱图，α-香附酮在249 nm波长处有最大吸收，选择249 nm波长为测定波长。

醋香附是木香分气丸的主要成分之一，其原有质量标准没有香附质量控制内容。本实验采用HPLC法测定木香分气丸中α-香附酮的含量，通过对3个批次样品进行检验，结果表明该方法专属性强，重复性好，准确度高，简单快速，可作为木香分气丸的含量测定方法。本研究涉及的3个批次木香分气丸中，α-香附酮的含量为0.037 1～0.184 9 mg·g-1，同一厂家不同批次样品中α-香附酮含量差异大，不同厂家样品间α-香附酮含量差异也较大，可考虑收集更多的样本，制定木香分气丸中α-香附酮的质量标准控制方法。