一例仔猪蓝耳病检测报告

莫云锋 李剑静 林德强

（1，广西岑溪市马路镇水产畜牧兽医站 543202；2，广西岑溪市动物疫病预防控制中心 543200）

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合症 （PRRS），是有猪繁殖与呼吸综合症病毒 （PRRSV） 引起的一种高度接触性传染性疾病[1]。PRRSV 属于套式病毒目、动脉病毒科、动脉病毒属的成员，其基因组全长为15kb 的单股正链RNA 病毒[2]。感染该病的妊娠母猪主要表现为早产、流产、死胎等症状，公猪表现为咳嗽、精神沉郁、食欲不振、呼吸急促和运动障碍等症状；肥育猪和断奶仔猪主要表现为咳嗽、厌食、呼吸困难等，哺乳期仔猪表现为精神不振、呼吸困难、气喘、耳朵发绀等症状，该病的死亡率较高。本病仅根据临床症状常不能确诊，由于PRRS 会与其他疾病 （如伪狂犬病等） 存在类似的临床症状，因此，确诊该病需要借助实验室技术。

2019 年2 月，广西某养殖户送检一份猪病料。本实验室通过对该病料进行剖检和实验室诊断，最终确定该病例是由PRRSV 引起的，具体的诊断方法和报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器和试剂

PCR 仪、凝胶成像系统，购自 Bio-rad 公司；血平板，购自北京路桥技术有限责任公司；病毒DNA/RNA 提取试剂盒、2×Taq MasterMix、DM2000、HiFi-Script cDNA 第一链合成试剂盒等，均购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.1.2 病料来源

2019 年2 月20 日，根据养殖户介绍，该养殖场工饲养90头仔猪，饲养过程已免疫猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟等疫苗。刚发现时部分病猪表现为不好动、被毛没有光泽。经过5d 的治疗没见起效，且发病仔猪和死亡数量增多，表现为精神沉郁、呼吸困难、体温高达42℃，病猪眼结膜发红、部分耳尖成蓝色。该养殖户立即拿病料送我单位进行确诊。

剖检发现，肺脏有出血点、水肿；肠系膜淋巴结肿大；脾脏肿大、质地较脆。采集其肺脏、淋巴结和脾脏组织-80℃保存备用。

1.1.3 引物设计

参考文献[3,4]，将猪繁殖与呼吸综合症病毒 （PPRSV）、伪狂犬病毒 （PRV） 的引物序列由苏州金唯智生物科技有限公司合成，引物序列信息如附表。

1.2 诊断方法

1.2.1 细菌分离和鉴定

用接种环取淋巴结、脾脏和肺脏样品，采用平板划线法，接种在血琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱中过夜培养18～24h 后观察，并进行细菌形态学观察及鉴定。

1.2.2 病原检测

1.2.2.1 病料RNA/DNA 的提取

将病死猪脾脏、肺脏、淋巴结等病料样品放入研磨器中混合研磨，加入适量的灭菌生理盐水，反复冻融 3 次，取上清液，按病毒DNA/RNA 提取试剂盒说明进行组织样品RNA/DNA提取。提取的病毒核酸-80℃ 保存备用。

1.2.2.2 RT-PCR/PCR

按照HiFi-Script cDNA 第一链合成试剂盒说明书将RNA 反转录为cDNA。分别以cDNA 和DNA 为模板进行PCR。

2 结果

2.1 细菌分离结果

血平板上未见有细菌生长。

2.2 PCR 结果

采用针对 PRRSV ORF5-F/ORF5-R 引物和 PRV N1/N2 引物对送检的病料样品进行PCR 扩增，结果PRRSV 扩增出与目的片段相符合的条带，而PRV 未扩增出目的条带，结果见附图。

3 讨论

本次所检测的病例经细菌分离和PCR 鉴定，最终确定该病例是由PRRSV 引起仔猪发病和死亡的。

20 世纪80 年代，美国首先报道了一种在猪群中发生的新灾难性疾病，主要表现为母猪严重的繁殖障碍，断奶猪普遍发生肺炎、生长迟缓和死亡率增加的症状，当时将该病称为" 神秘病"[4]。后来该病传到欧洲，因患病猪表现为耳朵青紫或蓝红色而称之为 “蓝耳病”，并被命名为猪繁殖呼吸综合症，该名称已沿用至今。我国PRRSV 的首次分离是由郭宝清等在20世纪90 年代末从PRRS 血清抗体阳性的猪群中分离到的，从而证实我国也有此病。我国将该病列为二类传染病。现蓝耳病已遍布全球，该病的流行给养猪行业带来巨大的经济损失，已成为严重威胁养猪业发展的重要传染病之一。据统计，由PRRSV导致的经济损失，育种猪约为6675 万美元，成长猪约为4.36亿美元。该病得以流行主要是与其传播特点有关。其主要感染途径为呼吸道，主要传播方式为空气传播、接触传播、精液传播和垂直传播等，传染源为病猪、带毒猪和患病母猪所产的仔猪以及被污染的环境、用具等。因此，当健康猪与病猪接触、猪场卫生条件差、气候恶劣、饲养密度大等均可促进猪繁殖与呼吸综合症的流行。

附表

该养殖场得以发生PRRS，有以下几点因素。第一，该猪场车辆和装车人员消毒不严格，引起猪发病。第二，广西连续处在阴雨天多天，致使猪舍潮湿，极易引发疾病。第三，该猪场饲养密度较大，且环境卫生条件差。因此，这个时候PRRSV极易有机会感染健康仔猪，对仔猪的健康产生严重影响。

因此，要预防该病的发生，需采取以下措施。第一，发生该病时要及时隔离和淘汰病死猪，防止各种病毒和细菌大量繁殖而引起的继发感染。第二，养猪场应采取自繁自养的模式，确实需要引种的应严格把关，引种前了解该引种地的猪病流行情况，必须对要引进的猪进行检测；引种后进行隔离饲养，病原和抗体检测为阴性后方可混群饲养。第三，制定科学的免疫程序并严格实行。目前，养猪场一般使用猪繁殖与呼吸综合症弱毒苗和面活疫苗来预防该病。为确保疫苗免疫效果，猪场应及时检测猪群的PRRSV 抗体水平，以便了解猪群保护情况。第四，加强饲养管理。猪舍环境卫生应保持清洁、饲养密度不宜过大，猪饲料应添加营养物质以提高猪群抵抗力。第五，对疫情处理要及时。若猪场出现疫情要立即隔离病猪，并上报有关部门，根据相关工作人员的指导正确处理病死猪。