两种检测猪伪狂犬病gB抗体方法比较

张晓亭

（河南省许昌市建安区动物疫病预防控制中心 461000）

猪伪狂犬病 （Pseudorabies） 是由猪伪狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV） 引起的可致妊娠母猪流产、种公猪不育、育肥猪生长停滞、仔猪死亡的一种急性传染病[1]。一旦猪场发生该病，将给养殖户带来巨大的经济损失。目前还没有有效的方法治疗该病，疫苗免疫接种是预防与控制该病的根本措施。而血清抗体水平检测可以反映出猪群的免疫抗体水平，对猪场免疫程序的制订具有一定指导意义[2]。目前，国标上推荐的方法依然是ELISA，ELISA 方法具有快速、简便、特异性好等优点，是当前常用的适合大规模应用的抗体检测方法。化学发光免疫分析法结合了抗体免疫方法与化学发光技术，其灵敏度更高，已广泛应用于医学、环境监测、食品检测等方面。为了解化学发光免疫分析法在检测猪伪狂犬病gB 抗体方面的应用价值，本实验将某国产猪伪狂犬病病毒gB 化学发光抗体检测试剂盒 （化学发光免疫分析法） 与美国IDEXX 公司生产的猪伪狂犬病病毒gB 抗体ELISA 检测试剂盒进行比较分析，以期为临床猪血清样品猪伪狂犬病gB 抗体的检测寻找更为简便、快速且准确的检测方法。

1 材料与方法

1.1 样品来源

河南省某几个规模化养殖场的猪血清样品，共计110 份。

1.2 检测试剂

猪伪狂犬病病毒 gB 抗体检测试剂盒 （ELISA 法，美国IDEXX）；猪伪狂犬病病毒gB 化学发光抗体检测试剂盒 （化学发光免疫分析法，国产）。

1.3 仪器设备

酶标仪：美国伯腾仪器有限公司；化学发光免疫分析仪：安图生物；洗板机：；美国伯腾仪器有限公司；培养箱：德国爱安姆 （北京） 科技有限公司；100 ul 微量移液枪、100 ul 多道移液枪：Eppendorf。

1.4 实验方法

1.4.1 样品预筛

用美国产猪伪狂犬病病毒gB 抗体检测试剂盒 （ELISA 法）预筛选本实验室所收集的猪血清样品，根据实验检测结果筛选出阳性样品 58 份，阴性样品 52 份，共计 110 份。

1.4.2 化学发光方法检测

对预筛选出的110 份猪血清用猪伪狂犬病病毒gB 化学发光抗体检测试剂盒 （化学发光免疫分析法） 进行检测。检测操作及结果判定均按照试剂盒说明书进行操作与判定。

1.5 数据分析

将化学发光免疫分析法的检测结果与ELISA 法的检测结果进行比对分析。（1） 以 ELISA 法的检测结果作为标准，计算化学发光免疫分析法的特异性、灵敏性、符合率；（2） 应用Kappa 检验判定两个实验方法结果的一致性。Kappa>0.8，表明一致性极高；0.60

2 结果

2.1 检测结果

附表 ELISA 法与化学发光免疫分析法检测猪伪狂犬病gB 抗体的检测结果

2.2 方法效能评价

以ELISA 法为标准，根据附表的结果计算得出化学发光免疫分析法的灵敏度为 98.31%、特异性为 100%、符合率为99.10%。

2.3 一致性结果

以ELISA 法作为标准，将化学发光免疫分析法的检测结果与之进行Kappa 检验，得出化学发光免疫分析法的 Kappa 为0.96，表明两种实验方法的检测结果高度一致。

3 讨论

国外对化学发光的大量研究始于20 世纪初，至20 世纪60年代，随着现代电子技术与高灵敏度光传感器的发展，其作为一种分析方法得到迅速发展。我国化学发光方法的研究始于20世纪80 年代初期，目前该项技术已广泛应用于有机、冶金、药物、临床医学检验、食品检验、生命科学、材料科学、环境监测等各个领域。但却少有化学发光技术在动物疫病防控中关于临床血清样品抗体检测的报道。

本文检测猪伪狂犬病gB 抗体的化学发光免疫分析法是一种采用竞争反应原理，包被重组蛋白，通过检测发光信号值，校准曲线拟合计算，得出待检血清样品抗体量的方法。相比于传统ELISA 方法检测猪伪狂犬病gB 抗体，化学发光免疫分析法用时更短，操作更加简便。本试验结果表明，在检测猪伪狂犬病gB 抗体方面，与ELISA 方法相比，化学发光免疫分析法的敏感性、特异性、符合率均较高。以ELISA 法为标准计算的化学发光免疫分析法的Kappa 为0.96，说明两种实验方法的检测结果高度一致。这说明，可将化学发光免疫分析法应用于临床血清样品猪伪狂犬病gB 抗体的检测。