梅毒抗体筛检不合格献血者的梅毒确认及梅毒感染状况分析*

胡晓玉 吴学忠 程卫芳 金惠新 鲁晋 吴君胜 尹萍 郭晓婕 魏家余 张恒萍

梅毒是由苍白密螺旋体（TP）感染引起的一种慢性、系统性性传播疾病，除经性传播、母婴垂直转播外，可经血液传播。梅毒自然疾病过程中部分TP感染者通常存在潜伏期，梅毒血清学检测是梅毒诊断（尤其是无明显临床表现的潜伏梅毒、隐性梅毒）的重要实验室手段。梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是目前公认的梅毒确诊的首选检测方法，可适用于对TP-ELISA检测阳性的标本进行验证[1]。为了保证血液安全，血站血液检测实验室可能会在TPELISA筛查结果判读时设置灰区（设定值≤S/CO.值≤1），虽降低了漏检风险，但同时增加了血液报废率和血源流失。本文通过对梅毒抗体筛查不合格献血者梅毒确认检测及梅毒感染状况分析，为献血者告知及献血者屏蔽提供参考建议。现报告如下。

材料与方法

1 标本来源 收集合肥市中心血站2016年3月24日～2016年10月2日期间经梅毒抗体ELISA试剂一和试剂二同时检测结果为梅毒抗体筛查不合格（双试剂S/CO值≥1、0.5≤双试剂S/CO值＜1、单试剂S/CO值≥1）献血者血液290份，筛查不合格献血者年龄范围在18～59岁，平均年龄为34.6岁。

2 仪器与试剂 STAR全自动加样仪（HAMILTON，瑞士），FAME全自动酶免分析仪（HAMILTON，瑞士），Procleix TIGRIS全自动核酸检测系统（诺华公司，瑞士），ChiTaS BSS1200血液核酸检测系统（浩源公司，中国），ROTOFIX32A离心机（Hettich Zentrifugen公司，德国），移液器（BIOHIT公司，芬兰），数显混匀器（WZRH5000，北京卓川电子科技有限公司）、生物安全柜（Haier HR40-ⅡA2，青岛海尔股份有限公司）。

梅毒螺旋体抗体ELISA诊断试剂一，梅毒螺旋体抗体ELISA诊断试剂二，梅毒螺旋体抗体检测试剂盒（TPPA，珠海丽珠试剂股份有限公司，批号/有效期：VN70314/20180323），甲苯胺红不加热血清试验（TRUST，上海荣盛生物药业有限公司，批号/有效期：20170404204/20180410），0.9%NaCl溶液（蚌埠丰原涂山制药有限公司，批号/效期：170116-01/20190115）,纯水（由英国ELGA公司生产的PURELAB纯水仪制备）。

3 检测方法 梅毒抗体筛查试验采用双试剂ELISA法进行检测，梅毒实验室确认试验采用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）检测，梅毒TPPA阳性标本非特异性凝集滴度采用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）检测。上述试验检测严格按照试剂盒说明书操作，且试剂均在有效期内使用。

4 统计学处理 应用SPSS 11.5软件，统计分析采用χ2检验行×列表资料多个样本率的比较，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 梅毒抗体筛查不合格献血者梅毒确认和TRUST检测 梅毒抗体筛查不合格290份标本经TPPA确认检测，结果有166份TPPA阳性和124份TPPA阴性（单试剂或双试剂灰区），166份TPPA阳性标本有98份男性和68份女性。166份TPPA阳性标本进一步经TRUST检测，结果有50份TRUST阳性，其标本凝集滴度见表1。

2 梅毒抗体ELISA筛检S/CO值与TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者经TPPA确认检测结果为，双试剂S/CO值≥1.0时TPPA阳性率为90.71%，单试剂S/CO值≥1.0时TPPA阳性率为0%，0.5≤双试剂S/CO值＜1（称为“灰区”）时TPPA阳性率为0%，见表2。

3 梅毒抗体ELISA筛检试剂的特异性、灵敏度、阳性检出率比较 TPPA作为金标准设定为对照，单试剂、双试剂血清学检测结果为试剂一、试剂二、双试剂的梅毒抗体筛查不合格献血者的TPPA阳性均为166份，见表3；梅毒抗体ELISA试剂一、试剂二、双试剂的敏感性分别为100%、100%、100%，特异性分别为72.58%、58.77%、48.39%，阳性预测值分别为83.00%、77.93%、72.17%，阴性预测值分别为100%、100%、100%，见表4。梅毒抗体ELISA试剂一、试剂二的阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05），见表5。

表1 50份TRUST阳性标本凝集滴度

表2 梅毒抗体ELISA筛检S/CO值与TPPA阳性率比较

表3 单、双试剂血清学筛查/确认结果

表4 单/双试剂的敏感性/特异性/阴阳预测值比较（%）

4 梅毒抗体筛查不合格献血者性别构成的TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者中男性171份和女性119份，经TPPA确认检测结果为，男性TPPA阳性98份，男性TPPA阳性率57.31%（98/171）；女性TPPA阳性68份，阳性率57.14%（68/119）。见表6和表7。

表5 试剂一、试剂二的阳性检出率比较

表6 梅毒抗体筛查不合格献血者性别构成（n，%）

表7 不同性别梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

5 不同婚姻状况梅毒抗体筛检不合格献血者TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者中已婚者189份和未婚者101份，经TPPA确认检测结果为，已婚者TPPA阳性130份、未婚者TPPA阳性36份，已婚梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率68.78%（130/189），未婚者TPPA阳性率35.64%（36/101），见表8。

290份梅毒抗体筛查不合格献血者中男性171份和女性119份。男性171份梅毒抗体筛查不合格献血者中已婚者114份、未婚者57份，经TPPA确认检测结果为，已婚男性梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率70.18%（80/114），未婚男性TPPA阳性率31.58%（18/57），见表9；女性119份梅毒抗体筛查不合格献血者中已婚者75份、未婚者44份，已婚女性梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率66.67%（50/75），未婚女性TPPA阳性率40.91%（18/44），见表10。

6 不同献血次数梅毒抗体筛检不合格献血者TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者标本中一次献血者262份、二次及以上献血者28份，经TPPA确认检测结果为，一次献血者TPPA阳性率61.07%（160/262），二次及以上献血者TPPA阳性率21.43%（6/28），见表11。

7 不同教育背景梅毒抗体筛检不合格献血者TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者标本经TPPA确认检测结果为，初中及其它、高中、中专、大专、本科、研究生的TPPA阳性率分别为76.19%、64.36%、58.97%、64.00%、53.85%、25.64%。见表12。

表8 不同婚姻状况梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

表9 男性不同婚姻状况梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

表10 女性不同婚姻状况梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

表11 不同献血次数梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

表12 不同教育背景梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

8 不同ABO血型梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较 290份梅毒抗体筛查不合格献血者标本经TPPA确认检测结果为，A型、B型、O型和AB型的TPPA阳性率分别为45.98%、57.50%、65.59%和60.00%。见表13。

表13 不同ABO血型梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率比较

讨 论

梅毒螺旋体血清学试验多用作证实试验，特别是隐性梅毒及一些非螺旋体抗原血清学试验阴性而又怀疑为梅毒的患者[2]。TRUST可用于梅毒疗效观察、判愈、判定复发或再感染[2]。本研究梅毒抗体筛查不合格献血者血液标本中TPPA阳性率为57.24%，与王艳彬等[3]报道的无偿献血者梅毒ELISA不合格结果的TPPA确证阳性率（56.43%）基本一致；本研究TPPA阳性者中TRUST阳性率30.12%且凝集滴度均≥1∶2，排除梅毒治疗后的血清学固定现象，极有可能为梅毒再染、早期或晚期隐性梅毒。因此，针对血站梅毒抗体筛查不合格献血者血液标本进一步开展TPPA确证、TRUST滴度检测，对献血者梅毒抗体检测结果告知以及献血者是否屏蔽提供理论依据，对于梅毒再染、隐性梅毒感染者做到早告知，能够及时得到临床治疗，控制病情，防止传播并感染他人，血站作为公益性卫生机构，开展梅毒抗体筛查不合格献血者延伸性服务势在必行。

梅毒螺旋体ELISA（TP-ELISA）是用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体，或经纯化的梅毒螺旋体重组蛋白作为抗原包被固相板条，并采用双抗原夹心法检测血清中梅毒螺旋体IgG或IgM抗体。血站梅毒螺旋体感染标志物为梅毒螺旋体特异性抗体（梅毒），梅毒螺旋体感染标志物采用2个不同生产厂家的血清学检测试剂进行检测，酶联免疫吸附试验（ELISA）是血源梅毒筛查体外诊断试剂的血清学检测方法[4]。梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用梅毒螺旋体提取物致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合产生可见的凝集反应。TPPA多用作梅毒确证试验，特异度和灵敏度都较高，不易出现假阳性反应[5]。李仕娟[6]报道ELISA法与TPPA法的阳性符合率为99.12%，TPELISA法适用于大批量标本检测血清梅毒抗体。因为TP-ELISA试剂的特异性与灵敏度呈反比，所以其特异性降低，假阳性也是不可避免的[7]。本研究结果显示，TP-ELISA试剂一、试剂二的阳性检出率无显著性差异（P＞0.05），但试剂一的特异性（72.58%）、阳性预测值（83.00%）高于试剂二的特异性（58.77%）、阳性预测值（77.93%）。王艳彬等[3]报道在无偿献血者梅毒ELISA检测中单试剂反应性和灰区标本经TPPA确证阳率为7.44%，但本研究中单试剂S/CO≥1.0和双试剂1＞S/CO≥0.5（灰区）的血液标本中未检出TPPA阳性标本。本研究中双试剂S/CO值≥1.0时，TP-ELISA检测不合格与TPPA阳性符合率为90.71%，略低于王艳彬等[8]报道的献血者TP-ELISA检测结果S/CO≥1.0时TPPA阳性符合率（93.82%）。因此，选择灵敏度高、特异性好的TPELISA试剂，科学合理地设置灰区，可减少阳性标本漏检和血液浪费。

为了解无偿献血者梅毒感染分布状况，近年来，国内部分血站调查并报道了无偿献血者在性别、婚姻、教育背景、献血次数、ABO血型等不同因素下梅毒感染分布情况。李永福和赵红娜等[9,10]均报道了无偿献血人群中女性梅毒感染率高于男性，但本研究结果显示，男性梅毒抗体筛查不合格献血者梅毒阳性率（57.31%）与女性梅毒抗体筛查不合格献血者梅毒阳性率（57.14%）之间差异无统计学意义（P＞0.05），与徐畅、徐进春、陈红和孙蕊娟等[11-14]报道一致，说明梅毒阳性率与性别没有明显关系。ABO血型系统中不同血型梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率（A型45.98%、B型57.50%、O型65.59%、AB型60.00%）之间差异无统计学意义（P＞0.05），与李永福等[9]报道一致，说明了梅毒感染与ABO血型之间尚不存在关联。本研究结果分析，已婚梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率（68.78%）高于未婚者TPPA阳性率（35.64%）（P＞0.05），男性已婚梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率（70.18%）明显高于未婚者TPPA阳性率（31.58%）（P＜0.05），女性已婚梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率（66.67%）高于未婚者TPPA阳性率（40.91%）（P＜0.01），孙蕊娟等[14]研究的已婚人群梅毒感染率高于未婚人群的报道一致，已婚人群感染率高的原因可能与性活跃程度密切相关。献血1次者TPPA阳性率（61.07%）高于献血2次及以上者TPPA阳性率（21.43%）（P＜0.05），与李永福等、孙蕊娟等[9,14]报道一致，首次献血人群梅毒感染率明显高于2次及上献血人群，提示无偿献血工作中建立固定献血队伍是保障血液安全的基础。徐畅等[11]报道献血者的文化程度高低与梅毒感染阳性率成反比关系，尤其初中及以下低学历献血者梅毒阳性率较高。本研究结果为，不同教育背景梅毒抗体筛查不合格献血者TPPA阳性率（初中及其它76.19%、高中64.36%、中专58.97%、大专64.00%、本科53.85%、研究生25.64%）之间差异有统计学意义（P＜0.05），低学历献血者TPPA阳性率较高，进一步证实了李永福、陈红、孙蕊娟和赵红娜等[9,10,13,14]等报道，至于低教育背景人群阳性率较高可能与预防性传播知识淡薄有关。

根据本研究结果分析，现针对梅毒抗体筛查不合格献血者的血液报废、结果告知和屏蔽提出如下建议：①梅毒抗体筛查不合格献血者所献的血液及其制品报废。②梅毒抗体筛查不合格、梅毒确认阳性的献血者屏蔽，参照确认结果进行献血者告知。③梅毒抗体筛查不合格、梅毒确认阴性的献血者不屏蔽，参照确认结果进行献血者告知；待再次献血前进行血液筛检，筛检结果合格者告知其可以再次献血，筛检结果不合格者屏蔽并告知。

综上所述，为了保障血液安全，针对TP-ELISA筛查试剂在结果判读标准中未设置灰区的，应对筛查试剂性能进行监控、评估，科学合理地设置灰区，以减少不必要的血液浪费。为了避免因假阳性结果回告给献血者造成精神压力，减少纠纷，增加献血者对血站的信任感，对梅毒抗体筛查不合格献血者血液标本进行梅毒确证试验，参照确证结果进行献血者告知，更好的为献血者服务。参照梅毒确证结果进行科学合理地屏蔽献血者，减少血源浪费和献血者归队工作量。作为血站的无偿献血招募工作人员，除了宣传无偿献血知识外，还应开展与输血相关的性传播知识宣传，加强献血者咨询，劝阻高危行为者自动放弃献血或保密性弃血，建立低危固定献血者队伍，保障血液安全。