药用胶塞中正己烷的含量测定及迁移研究*

吴红洋，杨大成，胡庆华，李 莎，彭 兰

（1. 重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2. 西南大学，重庆 400715； 3. 中国药科大学，江苏南京 211198； 4. 重庆医药高等专科学校，重庆 401331）

丁基胶塞因稳定性好、耐热性强、硫化速度快等优点，广泛应用于药品包装材料（以下简称“药包材”），常用于玻璃输液瓶和西林瓶的密封[1－2]。由于胶塞组分复杂，加工助剂多，挥发性和极性不同，在药品贮存过程中直接与药品接触，会使胶塞的部分挥发性组分或其降解物向药品中迁移[3]。《化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则（试行）》确定，密封件可提取物的种类主要包括硬脂酸和软脂酸、正己烷、酚类抗氧化剂、硫、氯化物和溴化物、亚硝胺及亚硝胺类化合物、2－巯基苯并噻唑、多环芳香烃等。目前已有研究考察了胶塞中一些潜在的迁移成分，如抗氧剂[4－5]、硫化剂[6－7]、增塑剂[8]、亚硝胺[9]、多环芳烃[10－11]、2－巯基苯并噻唑[12]等。但关于胶塞中正己烷的含量测定及迁移情况国内外鲜见报道。本研究中采用气相色谱法测定正己烷在氯化丁基胶塞中的含量及在药品中的迁移情况，为药包材中正己烷的检测提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

GC－2010plus型气相色谱仪（Shimadzu公司）；XPE205型电子天平（MettlerToledo 公司，精度为0.01mg）；KQ－500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，频率40kHz，功率500W）；MultifugeX1R 型高速冷冻离心机（Thermo公司）。

1.2 试药

正己烷（CAS 号110－54－3，CATO 公司，批号为CCEM500640－1601，纯度为99.6 %）；乙酸乙酯（色谱纯，Tedia 公司，批号为16040302）；注射用无菌粉末用氯化丁基橡胶塞（湖北华强科技有限责任公司，批号为L2017，以下简称“胶塞”）；注射用克林霉素磷酸酯[国药集团国瑞药业有限公司，批号分别为K001，K002，K003，加速0，3，6 个月，加速条件包括温度（40±2）℃，湿度（75±5）%，以下简称“迁移样品”]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB－624 毛细管柱（30 m×0.320 mm，1.80 μm）；FID 检测器，温度为280 ℃；载气：N2；柱流量：2.0 mL／min；柱温采用程序升温，45 ℃保持7 min，8 ℃／min 升至110 ℃保持7 min，60 ℃／min 升至250 ℃保持3 min；进样口温度：280 ℃；分流比：20 ∶1；进样量：1 μL。外标法定量。

2.2 溶液制备

对照品溶液：取正己烷对照品25 mg，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备溶液。精密移取10 mL，置100 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为对照品中间贮备溶液。

胶塞提取液：取胶塞约10.022 3 g，剪碎，精密称定，加入适量乙酸乙酯，于超声波清洗器中超声[温度（25±2）℃]提取1 h，冷却至室温，以4 000 r／min 的速率离心10 min，将上清液转移至容量瓶中，用乙酸乙酯反复洗涤3 次，合并上清液并定容至25 mL，即得。

迁移样品液：取迁移样品1 瓶，加适量乙酸乙酯，超声提取30 min，以4 000 r／min 的速率离心10 min，将上清液转移至容量瓶中，用乙酸乙酯反复洗涤、沉淀3 次，合并上清液并定容至10 mL，即得。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2 项下3 种溶液及溶剂乙酸乙酯，按拟订色谱条件进样分析，色谱图见图1。在此谱条件下，空白溶剂和样品基质对正己烷的测定均无干扰，正己烷在5.039 min 能得到较好分离，表明专属性较好。

线性关系考察：精密移取对照品中间贮备溶液适量，加乙酸乙酯配制成每1 mL 含对照品分别约为0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，25.0，50.0 μg 的系列对照品溶液。按拟订色谱条件进样分析，以质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝1 053.94X＋13.294 8，R2＝1（n＝7）。结果表明，正己烷质量浓度在0.5 ～50 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取质量浓度约10 μg／mL 的对照品溶液，分别连续进样6 次。结果的RSD为0.4% （n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取质量浓度为10 μg／mL 的对照品溶液，分别于0，19 h 时进样。变化率的结果为1.9%，表明正己烷在19 h 内稳定性较好。

加样回收试验：取迁移样品（批号为K001）共11 份，每份1 瓶，其中2 份作为样品本底，其余9 份分别加入对照品中间贮备液1.0，2.0，5.0 mL，平行3 份，按2.2项下迁移样品液制备方法处理，得低、中、高3 个水平的样品加标溶液，按拟订色谱条件进样分析，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n ＝9）

检测限与定量限确定：将正己烷的对照品溶液逐级稀释并进样测定，当待测物信号与基线噪音之比（S／ N） ＝3时为检测限，S／ N＝10 时为定量限。经试验，该方法的检测限为0.22 μg／mL，定量限为0.74 μg／mL。

图1 气相色谱图

2.4 样品含量测定

取2.2 项下胶塞提取液与迁移样品液，分别进样分析，计算正己烷含量，以外标法定量。含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n ＝3）

3 讨论

3.1 溶剂选择

根据相似相容原理，选择二氯甲烷和乙酸乙酯为溶剂。研究表明，二氯甲烷中存在正己烷的干扰峰，而乙酸乙酯与正己烷能达到分离度要求，故最终选择乙酸乙酯作为提取溶剂。

3.2 样品前处理

样品前处理对检测结果的准确性至关重要。目前主要有索氏回流、超声提取、微波萃取等前处理方法。预试验发现，索氏回流提取回收率低，微波萃取提取率较低，而超声提取法具有操作简单、回收率较高等优点，故用于本研究中正己烷的提取。

3.3 色谱条件优化

色谱条件优化包括选择色谱柱型号、程序升温、流速和分流比。在条件优化过程中，主要通过调节程序升温梯度、流速和分流比来达到最佳分离效果，在优化后的色谱条件下，正己烷在5.039 min 能满足系统适用性试验的要求，测定结果准确。

3.4 干扰物分析

卤化丁基胶塞在其生产和使用过程中，其橡胶本身或添加剂由于高温高压的作用会产生一些小分子物质。霍东风等[13]用气相色谱－质谱法测定溴化丁基橡胶塞中存在的小分子物质有甲基环戊烷、环己烷等。在提取胶塞中正己烷的同时，可能会产生一些正己烷的同分异构体，如2－甲基戊烷、3－甲基戊烷等。故在以后的研究中，可将结合气相色谱法与气相色谱－质谱联用法，准确定量胶塞中的正己烷含量。

3.5 安全性评价

根据2015年版《中国药典（四部）》药品中常见残留溶剂及限度可知，正己烷的限度为0.029%[14]。试验结果表明，该氯化丁基胶塞的正己烷含量为0.000 15%，远低于限度。经过6 个月的加速试验后，均未检出迁移进入药品中的正己烷。

综上所述，该方法灵敏度高，线性关系、稳定性和回收率均较好，操作方法简单，可用于药用胶塞中正己烷的含量测定及在药品中的迁移量分析。