长春地区939例性病门诊患者HPV感染特征分析

温 泉，李 晓，何佳雪，田亚萍，刘鹤松，张永凯

(1.吉林大学第一医院 a.皮肤性病科;b.基因诊断中心;c.药剂科，吉林 长春130021；2.德州市人民医院，山东 德州253000)

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种双链、环状DNA病毒，属于乳多空病毒家族。临床上根据其致病性分为两大类，即高危型HPV(High risk-Human papillomavirus，HR-HPV)和低危型HPV(Low risk-Human papillomavirus，LR-HPV)。近年来，随着HPV感染率的增加，尖锐湿疣患者发病率达15%-20%，跃居性病门诊的第二位[1]。HPV在不同地区的流行程度和基因分布有很大差异，了解不同地区的HPV流行特点具有重要意义。目前，对长春地区性病门诊患者HPV基因型较全的流行病学调查鲜有报道，本研究通过对吉林大学第一医院性病门诊939例标本进行HPV DNA检测，探讨长春地区HPV感染率及基因型的流行病学特征，为HPV的防治提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2018年10月至2019年3月于吉林大学第一医院皮肤性病门诊就诊的939例患者，其中男性306例，女性633例，年龄15-71岁。纳入标准：①明确诊断尖锐湿疣或有疣状赘生物；②有不洁性行为或性伴侣有HPV感染；③既往有HPV感染史；④纳入对象均自愿接受HPV检测，并签署知情同意。排除标准：①检查前2天内有性生活，检查前3天内有阴道冲洗、阴道内用药；②妊娠期、月经期；③标本采集前行碘试验或醋酸试验；④有癌症史，放、化疗和子宫切术史；本研究已获得吉林大学第一医院伦理委员会批准。

1.2 标本采集

严格遵循说明书，男性无症状就诊者，取尿道口标本，采集标本前2 h禁小便，用无菌棉拭子伸入尿道约2-3 cm取分泌物；女性无症状就诊者，取宫颈管3-4 cm分泌物；尖锐湿疣患者：用一次性注射器把疣体刺破后再用棉拭子反复擦拭以取得脱落细胞；标本采集后置入无菌管中，密闭送检；如若不能马上检测，将样本置于冰箱4℃存放，并在2周内检测。

1.3 试剂与仪器

HPV分型检测试剂盒，由潮州凯普生物化学有限公司生产，可检测21种HPV基因型，包括15种高危型别：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53；6种低危型别：HPV6、11、42、43、44、CP8304(81)。仪器：荧光PCR扩增仪；Hybri Max医用核酸分子快速杂交仪，潮州凯普生物科技股份有限公司生产。

1.4 检测方法

严格按照凯普试剂盒说明进行临床取样和样本处理后，取800 μl临床样本，加入离心管中，14 000 rpm离心1 min，去上清；加入400 μl溶液裂解细胞，释放DNA，混匀；100℃裂解15 min；加入400 μl溶液溶解蛋白质等杂质、沉淀DNA，混匀，放置2 min；14 000 rpm离心5 min，去上清；14 000 rpm离心1 min，再次去上清；加入60 μl溶液充分溶解DNA，-20℃保存；按操作说明书进行PCR 扩增反应、导流杂交。

1.5 统计方法

使用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。计数资料采用频数(百分比)，组间比较采用卡方检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV DNA检测结果

939例患者标本共检出HPV阳性者447例，总阳性率为47.60%(447/939)，其中女性患者标本的阳性率为57.0%(361/633)，男性患者标本的阳性率为28.1%(86/306)，见表1。女性HPV阳性率明显高于男性,两者差异有统计学意义(χ2=69.196,P<0.05)。

表1 HPV DNA检测结果(n,%)

*P<0.05与男性组比较

2.2 HPV DNA基因型分布

本研究中所检测的21种基因型均有出现，LR-HPV感染率最高的是HPV6型，感染率为12.99%，其次是HPV11型，感染率为10.22%，感染率最低的是HPV44型，感染率为0.75%。HR-HPV感染率前4位的型别依次为HPV16(8.31%)，HPV52(6.92%)、HPV51(5.75%)、HPV58(5.54%)，见图1。

图1 HPV各基因型感染率

2.3 HPV单一型感染与多重感染情况

患者同时感染两种及以上HPV基因型即为多重感染。在447例HPV DNA阳性标本中，单一感染250例，占总感染例数的55.93%(250/447)；多重感染共197例，占总例数44.07%(197/447)。其中多重感染以二重感染为主，占多重感染例数的52.79%(104/197),见表2。

表2 HPV单一型感染和多重感染分布情况

2.4 HPV感染的年龄分布情况

将研究对象按年龄段分为5组，各年龄组HPV的感染情况如表3所示，其中以<20岁和≥50岁年龄组HPV感染率最高，30-39岁组感染率最低；经统计学两两比较分析，<20岁年龄组HPV感染率分别与20-29岁组、30-39岁组以及40-49岁组感染率差异有统计学意义(χ2=5.021，5.457，4.442，P<0.05)，其余各组两两比较差异无统计学意义(图2)。

表3 不同年龄组HPV感染情况

*P<0.05与20-29、30-39、40-49 各组比较

图2 不同年龄段HPV感染率分布情况

3 讨论

迄今已有200多种HPV基因型被鉴定出来，其中40余种感染生殖道黏膜，并诱发多种良恶性疾病[2]。HR-HPV主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82等，长期持续感染可导致宫颈癌等恶性病变，2012年WHO统计数据显示，全球由HPV感染导致的癌症病例达到527，624例，病死率为50.3%[3]；常见的LR-HPV有HPV6、11、40、42、43、44、81等，引起尖锐湿疣等良性病变，其中HPV11，6在尖锐湿疣患者中的检出率可高达95%[4]。据统计，约75%-80%性活跃个体的一生中会有HPV感染，且超过80%的HPV感染发生在20-49岁之间[5]，但多数只是一种“一过性”的携带状态，最终可被自身的免疫系统清除，只有1%可进展为浸润性癌症[6]。因此了解HPV的感染分布情况，对疾病的筛查、预防、早期诊断、治疗以及预后评估有重要的意义。

本研究中，长春地区939例性病门诊患者共检出HPV DNA阳性者447例，总阳性率为47.60%，与周美钦等人[7]报道的福州地区性病门诊HPV感染率48.89%基本一致，但低于大连地区[8]性病门诊HPV感染率，高于湖南地区[9]。其中，女性HPV感染率明显高于男性，与刘义刚[10]报道的结果一致。有研究显示，20%-50%的HPV感染者中存在多种基因亚型[4,11]，可能与不同病毒亚型外壳蛋白编码基因差异较大、每种基因型提供的交叉保护有限有关[12]。本次研究显示，HPV以单一亚型感染为主，占55.93%；而多重感染占44.07%，其中以二重感染为主，符合多个地区性病门诊报道的感染规律[7,8,10]。

查阅国内外文献，我们发现不同地区HPV基因型分布也存在差异，特别是HR-HPV，其中HPV16和HPV18在全球范围内最常见，而非洲以HPV45和HPV33常见，欧洲以HPV33和HPV31常见[13]，HPV52和HPV58在东亚地区更为常见[14]。本研究显示LR-HPV以6和11为主，HR-HPV检出率在前4位的依次是HPV16、HPV52、HPV51、HPV58。该结果与大连[8]、上海[15]性病门诊常见亚型基本一致；与西安[16]、广东[17]、深圳[18]性病门诊常见亚型有所不同，该差异可能与地理位置、经济水平、调查人群的选择、取材方法、HPV检测方法等不同有关。虽然不同地区HPV亚型感染的顺序稍有差异，但总体分布趋于一致，即低危型以HPV6、11常见，高危型以HPV16、52、58型常见。

HPV感染有比较明显的年龄分布特点，有报道显示，HPV感染率随着年龄的升高而逐渐下降，或者呈“U”形分布规律[19]，或者在各个年龄段均处于较高的感染水平[20]。本研究显示，长春地区性病门诊患者HPV感染率随着年龄的变化成“U”形曲线分布，<20岁年龄段感染率最高，统计学分析表明，小于20岁组HPV感染率与≥50岁组没有差异，与其它年龄组感染率有明显差异，可能与此年龄段性生活活跃、健康意识缺乏有关；而在≥50岁人群中出现感染高峰，可能与免疫功能较弱，机体潜伏感染的HPV重新激活有关。因此在性病门诊工作中，针对性的对不同年龄段进行健康宣教及筛查有重要意义。

综上所述，长春地区女性HPV检出率明显高于男性，主要以单一型及高危型感染为主，多重感染中以二重感染为主，且主要为高低危混合型感染；常见的低危型为HPV6和HPV11，高危型为HPV16、HPV52、HPV51、HPV58；在<20岁年龄段感染率最高。本研究结果对长春地区HPV的筛查、检测及防治，对减少和消除HPV感染有重要的临床意义。