前置胎盘患者血清及胎盘组织中Eph A5表达水平与妊娠结局的关系探讨

刘晓宁 宋振霞 潘晓华

前置胎盘（PP）是妊娠晚期严重并发症之一， 发病率占孕产妇总数的1%左右[1]。PP患者主要表现为无痛性反复阴道出血及产时、产后大出血，引发不良妊娠结局，对孕产妇和胎儿生命造成严重威胁。研究发现[2]，促红细胞生成素产生肝细胞受体Eph A5具有促进血管内皮生长、调节缺血缺氧相关信号通路等作用，但关于Eph A5表达水平与PP发生发展及分娩结局关系的研究尚少，需进一步探讨。为此本研究特选择2016年1月～2018年1月医院收治的98例PP患者及40例健康孕产妇为研究对象，探讨血清及胎盘组织中Eph A5的表达，以期为PP患者防治提供新的思路，详述如下。

资料与方法

1 一般资料 取2 0 1 6年1月～2 0 1 8年1月医院收治的9 8例待产P P患者为观察组，年龄2 0～3 2岁，平均（2 6.8 0±4.5 8）岁，孕周3 6～3 8周，平均（3 7.0 2±1.6 7）周，体质指数（B M I）（21.34±2.60）kg/m2，初产妇68例、经产妇30例，PP类型：完全型33例、部分型24例、边缘型41例，分别纳入A、B、C组；选取同期收住的40例待产健康孕妇为对照组，年龄20～32岁，平均（26.53±4.62）岁，孕周36～39周，平均（37.54±1.75）周，BMI（20.87±2.82）kg/m2，初产妇28例、经产妇12例，两组均为单胎妊娠，两组年龄、孕周、BMI、初产妇及经产妇构成比比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院伦理委员会审批。

2 纳入及排除标准

2.1 纳入标准：①观察组患者符合PP诊断标准[3]；②均为单胎妊娠孕产妇；③知情且同意本次研究。

2.2 排除标准：①合并子痫前期、妊娠期糖尿病、严重贫血等妊娠期合并症者；②合并严重肝肾功能不全者；③既往高血压、糖尿病及精神病史者。

3 方法

3.1 血清Eph A5水平检测：收集观察组和对照组产前空腹血样3 mL，加入肝素抗凝管中，静置后分层，3 000 r/min、10 min后，收集上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（北京安必奇生物科技有限公司），严格按照说明书操作步骤进行，应用FC型酶标仪（Thermo公司）检测570 nm波长处吸光度值，根据建立的标准曲线计算血清Eph A5浓度。

3.2 胎盘组织中Eph A5表达水平检测：收集观察组和对照组产后新鲜胎盘组织70 mg，加入蛋白裂解液（武汉博士德生物工程有限公司）0.5 mL，充分研磨，置于沸水浴中10 min，12 000 r/min、10 min后收集上清液，二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒（Thermo公司）测定蛋白总量。取50μg待测样品加入等量商鞅缓冲液，充分混匀后沸水浴3 min，12 000 r/min、10 min后收集上清液，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳分离，然后电转仪60 min转至硝酸纤维素膜NC膜，脱脂奶粉封闭液室温孵育2 h（室温），然后加入稀释兔抗人Eph

A5一抗（1∶500，Abcam公司）置于摇床孵育过夜（4℃），漂洗缓冲液洗涤后，加入山羊抗兔Eph A5二抗（1∶2 000，Abcam公司）摇床孵育1 h（室温），暗室中曝光和显影，应用Tannon1600凝胶成像仪（上海天能科技有限公司）扫描，并采用Image J软件进行灰度值分析，以Eph A5与内参β-肌动蛋白（β-actin，Abcam公司）灰度值比值表示目的蛋白相对表达量。

3.3 随访 随访统计观察组中不同类型PP患者及围生儿妊娠结局，将母体及围生儿不良妊娠结局者纳入不良组，其余纳入良好组。母体不良妊娠结局如胎盘粘连、胎盘植入、产后出血和子宫切除；围生儿不良妊娠结局如早产、低体重儿、窒息和死亡。顺产者第3产程时间≥30 min时需人工剥离胎盘，或娩出不完整胎盘，剖宫产者需人工钳取或剥离残留胎盘者则为胎盘粘连[4]；胎盘绒毛侵犯子宫肌层并与其连接紧密者则为胎盘植入[5]；分娩后24 h内出血量＞500 mL者则为产后出血；围生儿体重＜2.5 kg者则为低体重儿[6]。

4 观察指标 ①对比观察组与对照组血清及胎盘组织中Eph A5水平；②对比不同类型PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平；③观察组母体与胎儿不良妊娠结局发生情况；④对比母体妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平；⑤对比围生儿妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平。

5 统计学分析 应用SPSS26.0统计软件分析处理数据，计量资料和计数资料分别以（）、率（%）描述，并分别采用t检验和χ2检验。P＜0.05有统计学意义。

结 果

1 对比观察组与对照组血清及胎盘组织中Eph A5水平 观察组与对照组血清及胎盘组织中Eph A5水平比较，采用t检验，差异均有统计学意义（P＜0.05），观察组血清及胎盘组织中Eph A5水平低于对照组。结果见表1。

2 对比不同类型PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平 C组与A组、B组血清及胎盘组织中Eph A5水平比较，采用单因素方差分析，差异均有统计学意义（P＜0.05），C组血清及胎盘组织中Eph A5水平均高于A组和B组；A组与B组血清及胎盘组织中Eph A5水平比较，采用单因素方差分析，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。

表1 对比观察组与对照组血清及胎盘组织中Eph A5水平（）

表1 对比观察组与对照组血清及胎盘组织中Eph A5水平（）

胎盘组织Eph A5相对表达量观察组 98 2.61±0.62 0.86±0.10对照组 40 14.60±2.58 2.95±0.45 t值 43.251 43.623 P值 0.000 0.000组别 例数 血清Eph A5（pmol/L）

表2 对比不同PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平（）

表2 对比不同PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平（）

注：与A组比，aP＜0.05；与B组比，bP＜0.05

组别 例数 血清Eph A5（pmol/L）胎盘组织Eph A5相对表达量A组 33 2.43±0.31 0.58±0.09 B组 24 2.36±0.32 0.61±0.07 C组 41 2.90±0.36ab 1.23±0.24ab F值 1.746 0.123 P值 0.180 0.885

3 观察组母体与胎儿不良妊娠结局发生情况 98例前置胎盘患者中，胎盘粘连者25例、胎盘植入者22例、产后出血者6例，其中39例存在1种不良结局、13例存在2种不良结局、6例存在3种不良结局，母体不良妊娠结局发生率为59.18%（58/98）；娩出98例胎儿中，早产26例、低体重儿15例、窒息5例、死亡3例，其中33例存在1种不良结局、5例存在2种不良结局、3例存在3种不良结局，围生儿不良妊娠结局发生率为41.84%（41/98）。

4 对比母体妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平 母体妊娠结局不良组与良好组血清Eph A5水平比较，采用t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），不良组血清Eph A5水平低于良好组；母体妊娠结局不良组与良好组胎盘组织Eph A5水平比较，采用t检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表3。

表3 对比母体妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平（）

表3 对比母体妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平（）

胎盘组织Eph A5相对表达量不良组 58 1.89±0.26 0.83±0.08良好组 40 3.65±0.42 0.91±0.33 t值 25.611 1.776 P值 0.000 0.079组别 例数 血清Eph A5（pmol/L）

5 对比围生儿妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平 围生儿妊娠结局不良组与良好组胎盘组织Eph A5水平比较，采用t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），不良组胎盘组织Eph A5水平低于良好组；围生儿妊娠结局不良组与良好组母体血清Eph A5水平比较，采用t检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表4。

表4 对比围生儿妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平（）

表4 对比围生儿妊娠结局与血清和胎盘组织中Eph A5水平（）

胎盘组织Eph A5相对表达量不良组 41 2.48±0.46 0.50±0.06良好组 57 2.70±0.63 1.12±0.25 t值 1.900 15.540 P值 0.060 0.000组别 例数 血清Eph A5（pmol/L）

讨 论

PP是妊娠晚期严重的并发症之一，其发病原因及机制十分复杂，目前尚未完全明了。有学者认为[7]，子宫内膜损伤、瘢痕形成、母体对滋养细胞生长的异常反应、炎症等因素均可导致PP形成。在PP形成过程中，胎盘血供差，机体存在慢性缺血缺氧状态，导致母体及胎儿血供不足，进而引起不良妊娠结局。

Eph A5是广泛表达于多种器官、组织和细胞中的酪氨酸激酶受体，参与机体多种生长因子、细胞因子信号通路。Peuckert C等人通过敲除小鼠Eph A5基因，小鼠表现为血管生成缓慢，并伴随发育迟缓和认知功能障碍等情况[8]。刘田田等人关于Eph A5及其配体ephrin A5在癫痫模型大鼠脑组织海马区表达的研究发现，Eph A5及其配体表达量均下调，参与癫痫发作[9]。以上研究均提示Eph A5磷酸化被抑制可能导致缺血缺氧调控通路阻断，进而引起血管新生能力下降和相应组织或器官损害。本研究检测健康孕产妇及PP患者血清和胎盘组织中Eph A5的表达状况，结果表明，观察组血清及胎盘组织中Eph A5水平低于对照组（P＜0.05），A组和B组血清及胎盘组织中Eph A5水平低于C组（P＜0.05），提示PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平异常低，其中完全型和部分型PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平低尤其显著。

本研究中不良妊娠结局统计资料表明，母体不良妊娠结局发生率为59.18%，围生儿不良妊娠结局发生率为41.84%（41/98），母体妊娠结局不良组血清Eph A5水平低于良好组（P＜0.05），围生儿妊娠结局不良组胎盘组织Eph A5水平低于良好组（P＜0.05）。在PP妊娠晚期，促进血管新生的关键因子Eph A5表达量显著下降，可引起血管功能受限，继而影响母体各项功能，增加不良妊娠结局发生。当外界刺激信号激活Eph A5，其磷酸化激活后，可将信号传递至细胞核，进而参与细胞增殖、生长及胎盘发育过程[10]。相反，下调的Eph A5引起的血管新生功能下降，可直接加重胎儿缺血缺氧环境，增加围生儿不良妊娠结局风险[11]。本研究中围生儿妊娠结局不良组胎盘组织中Eph A5表达水平与良好组相比较低，其胚胎发育调控作用降低，进而增加不良妊娠结局风险。由此，血清、胎盘组织中Eph A5表达水平与母体和围生儿不良妊娠结局关系密切，进而提示Eph A5作为预测妊娠结局的潜在标志物之一。

综上所述，PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平较低，其中完全型和部分型PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平异常低。血清Eph A5水平异常低可能与母体不良妊娠结局有关，而胎盘组织中Eph A5水平异常低可能与胎儿不良妊娠结局有关，提示临床中应密切关注PP患者血清及胎盘组织中Eph A5水平变化，提前预测妊娠结局，但Eph A5参与PP病情的发生和发展机制仍需进一步探讨。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突