气相色谱法测定恩替卡韦中间体的有机溶剂残留量

陈冬

（南京正科医药股份有限公司，江苏 南京211100）

恩替卡韦是一种用于治疗乙肝病毒感染的新一代鸟嘌呤核苷类似物口服药，主要用于治疗成人伴有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最强、变异几率最低的核苷类似物。[1]由于生产过程中使用了甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺等有机溶剂，故有可能会残留在产品中，用本文建立了气相色谱法检测，结果表明本法分离度高、灵敏、准确且简便。

1 仪器与试药

Agilent7890A 气相色谱仪，梅特勒AB135-S 电子分析天平，甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺均为分析纯，二甲基亚砜为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱（30m×0.32mm×1.8μm），进样口温度220℃，检测器温度250℃，FID 检测器；起始温度为60℃，维持5min，以10℃/min 的速率升至100℃，再以20℃/min 的速率升至220℃，维持5min。载气为氮气，流速为4.0ml/min；分流比20:1。

2.2 专属性试验

空白溶剂：二甲基亚砜。

甲醇定位溶液：精密称取甲醇150mg 置装有少量二甲基亚砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

二氯甲烷定位溶液：精密称取二氯甲烷30mg 置装有少量二甲基亚砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

乙酸乙酯定位溶液：精密称取乙酸乙酯250mg 置装有少量二甲基亚砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

甲苯定位溶液：精密称取甲苯44.5mg 置装有少量二甲基亚砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

N，N- 二甲基甲酰胺定位溶液：精密称取N，N- 二甲基甲酰胺44mg 置装有少量二甲基亚砜溶液的100ml 量瓶中，再用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

系统适用性溶液：精密移取上述各定位溶液10.00ml 于同一100ml 容量瓶中，用二甲基亚砜稀释到刻度，摇匀。精密量取2ul，照上述色谱条件进行检测。系统适用性溶液中的甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺各峰能完全分离，分离度均大于1.5，且各溶剂峰的理论塔板数均大于5000。（见表1）

表1 系统适用性试验

2.3 检测限与定量限

精密量取甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N,N- 二甲基甲酰胺定位溶液适量，分别用二甲基亚砜稀释至适宜浓度，精密量取2μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以信噪比3:1 确定检测限，以信噪比10:1 确定定量限；精密量取各溶剂适宜浓度溶液适量，置同一量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度制成各溶剂的混合定量限（LOQ）浓度溶液，连续进样5 针，精密量取2?l，注入气相色谱仪，照上述色谱条件进行检测。（见表2，3）。

表2 浓度- 信噪比

表3 定量限精密度

2.4 重复性试验

精密称取样品0.5g 置10ml 量瓶中，精密加入对照品溶液5ml，使溶解，并用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，使供试品溶液中各溶剂的浓度接近50%对照限度溶液，精密量取2ul 注入气相色谱仪，连续进样6 次。结果见表4，结果表明重复性良好。

表4 重复性试验结果

3 讨论

3.1 溶剂甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺的理论塔板数均大于5000，且分离度大于1.5 符合《中国药典》的相关规定。

3.2 溶剂的选择：经试验，恩替卡韦中间体不溶于水，且二甲基亚砜沸点不高，用其作溶剂有利于待测溶剂的汽化和缩短分析时间。[1]

3.3 重复性试验中采用的是样品加对照溶液，使各溶剂浓度接近50%限度溶液。