高效液相色谱法测定4种邻苯二甲酸酯

邓冬莉

(重庆工业职业技术学院，重庆401120)

作为塑化剂的主要成分，邻苯二甲酸酯(PAEs)的年产量在20世纪90年代就已经达到800万t[1]。邻苯二甲酸酯及其代谢产物已经在环境中普遍存在，并在人体内产生富集现象，作为环境内分泌干扰物危害着人类的健康[2]。

要有效控制PAEs的污染，首先要建立检测方法。国内外对PAEs的检测研究非常广泛，分光光度法、荧光光谱法、液相色谱法、气相色谱法及色谱质谱联用法等均可用于检测PAEs[3-4]。高效液相色谱法适用于检测PAEs这类相对分子质量大、挥发性小、热稳定性差的有机污染物[5]，方法的灵敏度、精密度、准确度和重现性均能满足一般的检测需求。因此，本实验采用高效液相色谱-紫外分光光度法(HPLC-UV)，建立了常见的4种PAEs的分析方法。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂

仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪、普析L6紫外分光光度计。

试剂：4种PAEs标准品，甲醇(色谱纯)，实验用水为二次蒸馏水。

1.2 HPLC-UV分析条件

C18色谱柱 (4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇 /水体系，流速：1 mL·min-1，柱温 25℃，进样量 25 μL。采用梯度洗脱程序，甲醇 ∶ 水(V/V)=85∶15(0～5min)～100∶0(5～30min)。

1.3 标准溶液配制

准确称取DMP、DBP、DEP、DHEP标准样品各0.1000g，分别用甲醇溶解后，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成1000mg·L-1的单标储备液。使用单标储备液配制成100 mg·L-1的混合标准储备液，放于冰箱4℃保存备用。

用移液管吸取一定量的100mg·L-1混合标准储备液，用甲醇分别稀释成质量浓度不等的标准混合液，待用于HPLC分析。

2 结果与分析

2.1 紫外检测的最大吸收波长

将4种PAEs标准溶液依次用紫外分光光度计进行波长扫描，测得4种物质的最大吸收波长分别为 DMP 225nm、DEP 225nm、DBP 232nm、DEHP 216nm。综合考虑各种组分的最大吸收值及灵敏度，最终选择紫外检测波长为225nm。

2.2 峰的归属

将单标样品储备液分别用甲醇稀释为20 μg·L-1的溶液，分别在波长225nm、流动相组成为甲醇 ∶ 水=100∶0的情况下进行测定，得到4种物质的出峰时间，通过分析保留时间，判断4个物质的出峰顺序为 DMP、DEP、DBP、DEHP。

2.3 色谱分离条件的优化与选择

在实际操作过程中，分析仪器色谱条件的改变，对PAEs的分析会有不同的结果。改变流动相的组成、洗脱时间、柱温、柱压等，会改变待测物质在固定相中的分离效果。本次实验重点对梯度洗脱程序进行了优化。

选取了以下4个色谱条件进行检测(其他色谱分离检测条件完全相同)：

1)甲醇∶水 =70∶30(0～5min)～100∶0(5～30min)；

2)甲醇∶水 =80∶20(0～5min)～100∶0(5～25min)；

3)甲醇∶水 =85∶15(0～3min)～100∶0(3～30min)；

4)甲醇∶水 =85∶15(0～5min)～100∶0(5～30min)。

根据上述色谱条件，得到以下4个色谱图(图1)。可以看出，在第4种色谱条件下，4种PAEs的色谱峰区域宽度较窄且实现了基线分离，分离仅需15min。因此，选择第4种色谱条件作为最优条件，应用于之后的实验检测。

图1 4个色谱条件下的HPLC谱图

2.4 标准曲线的绘制

用1.3中配置的标准溶液，在最优色谱条件下，测定4种PAEs混合溶液的峰面积。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，获得4种物质的标准曲线(表1)。结果表明，PAEs浓度在0.05～10 mg·L-1范围内线性关系良好，相关系数为0.9988～0.9997，4种PAEs的检出限(LOD)为 3.9～16.4 μg·L-1，定量限(LOQ)为 12.9～54.7 μg·L-1。

表1 4种PAEs保留时间、标准工作曲线、相关系数、检出限(LOD)及定量限(LOQ)

2.5 重现性

取5μg·mL-1混合标准溶液，在上述色谱条件下，分别重复7针，以验证方法的重现性。计算得到平均峰面积的相对标准偏差RSD为5.3%～8.1%，说明分析方法的重现性良好。

3 结论

本实验利用常用的高效液相色谱仪，建立了4种PAEs的快速检测方法，仅使用甲醇和水作为流动相，在15min内即可完成分离检测。该方法操作简单、快速，灵敏度、精密度和重现性均较好，借助于样品前处理方法，可应用于环境水体中邻苯二甲酸酯类化合物的分析和检测。