PAK4在甲状腺乳头状癌中的表达作用研究

冯天斌　李延俭　冼志荣　杨家诚　陶珊花　罗俭权

【摘要】 目的：探究PAK4在甲状腺乳头状癌中的表达情况及临床意义。方法：从笔者所在医院甲状腺癌标本库中选取2013-2017年经手术后的组织标本，其中甲状腺乳头状癌（PTC）60例，甲状腺非恶性病例30例。采用免疫组化的方法对PAK4在甲状腺非恶性病例与甲状腺乳头状癌中的表达水平进行检测。结果：在60例PTC中PAK4阳性表达为27例（45.00%），其中强阳性表达12例（20.00%），中等阳性表达15例（25.00%）。PTC中PAK4的阳性表达率为45.00%，显著高于甲状腺良性组织中的6.67%，差异有统计学意义（P<0.05）。PAK4在甲状腺乳头状癌阳性表达和正常表达的性别、年龄、肿瘤大小、是否单发、是否单侧比较，差异无统计学意义（P>0.05）;两者腺体外浸润、临床分期、淋巴结转移比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：PAK4在甲状腺乳头状癌中阳性表达率较高，可能预示存在腺体外浸润、淋巴结转移、疾病Ⅲ或Ⅳ期，为本病的早期诊治提供新的策略。

【关键词】 PAK4 甲状腺乳头状癌 免疫组化

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.060 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）21-0-03

Study on the Expression of PAK4 in Papillary Thyroid Carcinoma/FENG Tianbin， LI Yanjian， XIAN Zhirong， YANG Jiacheng， TAO Shanhua， LUO Jianquan. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）： -147

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of PAK4 in papillary thyroid carcinoma. Method： From 2013 to 2017， there were 60 cases of papillary thyroid cancer and 30 cases of non malignant thyroid cancer were selected. The expression of PAK4 in non malignant thyroid cases and papillary thyroid carcinoma were detected by immunohistochemistry. Result： A total of 60 PTC patients， the positive expression of PAK4 was 27 cases （45.00%）， strong positive expression was 12 cases （20.00%）， moderate positive expression was 15 cases （25.00%）. The positive expression rate of PAK4 in PTC was 45.00%， which was significantly higher than the non malignant thyroid cancer （6.67%）， the difference was statistically significant （P<0.05）， there were no significant differences in gender， age， tumor size， single lesion and unilateral expression between positive and normal expression of PAK4 （P>0.05）. There were significant differences in extraglandular infiltration， clinical stage and lymph node metastasis between the two groups （P<0.05）. Conclusion： The positive expression of PAK4 in papillary thyroid carcinoma may indicate the presence of extraglandular infiltration and lymph node metastasis to Ⅲ or Ⅳ of the disease， providing a new strategy for the early diagnosis and treatment of the disease.

[Key words] PAK4 Papillary thyroid carcinoma Immunohistochemistry

First-authors address： Sihui Peoples Hospital， Sihui 526200， China

甲狀腺癌恶性程度不高，因此临床不被重视，且其相关诊断发现不了较小的肿瘤。甲状腺乳头状癌（PTC）占其病理类型的80%，为防止临床症状被忽视所致PTC至疾病中晚期，死亡率增高，因此采取适宜的早期诊断尤为关键[1]。P21激活激酶4（PAK4）在当今已被证实，与食管癌、肝癌、胰腺癌、直肠癌及乳腺癌等肿瘤疾病的发生发展、侵袭转移具有密切联系[2]。PAK4是在RAS驱动肿瘤形成通路中具有关键作用的介导蛋白之一，能够刺激MAPK通路[3]。曾有研究表明，PAK4与肿瘤恶性程度具有密切联系，其表达水平提高，提示肿瘤预后不良[4]。因此，本研究就PAK4在甲状腺乳头状癌中的表达情况进行研究，如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院2013-2017年经手术切除手术后具有完整临床资料及随访资料的甲状腺乳头状癌60例及甲状腺非恶性病例30例的组织标本。纳入标准：参照文献[5]《NCCN临床实践指南：甲状腺癌》中甲状腺乳头状癌的诊断。排除标准：既往存在手术病史或者甲状腺癌复发;存在有神经源性疾病;合并心肝腎等功能不全;未超过18岁，怀疑或确有药物滥用病史;受试过程中病情改变显著，不宜进一步接受试验;临床病理资料缺失。甲状腺乳头状癌中男21例，女39例，年龄25～67岁，平均（33.35±4.66）岁;甲状腺非恶性病例中男8例，女22例，年龄25～66岁，平均（33.88±4.69）岁，正常甲状腺6例，结节性甲状腺肿9例，桥本甲状腺炎7例，亚急性甲状腺炎5例，甲状腺腺瘤3例。

1.2 方法

1.2.1 试剂 鼠抗人BRAFV600E单克隆抗体（克隆VE1），武汉华美生物工程有限公司CUSABIO?;PAK4多克隆抗体-PAK4 polyclonal antibody，上海群己生物科技有限公司;PAK4 ELISA KIT/人PAK4 ELISA试剂盒，武汉菲恩生物科技有限公司;显色剂及其他相关试剂，北京冬歌博业生物科技有限公司。

1.2.2 检测方法 采用免疫组化的方法对PAK4在甲状腺乳头状癌表达水平进行检测，并在光学显微镜下阅片，采取双盲法，其中阳性染色可见黄色或棕黄色颗粒。根据染色程度进行评分：其中0分为与背景无显著颜色差别为阴性;1分为背景颜色存在轻微差别，染色呈淡黄色为弱阳性;2分为背景差别较为明显，染色深黄色或浅棕色，为中度阳性;3分为染色中等棕色甚至更深，为强阳性。根据高倍镜显示细胞着色百分比计分：0分为总着色细胞数量所占总计细胞数量比例未超过5%;1分为百分比超过5%，未超过25%;2分为超过25%，百分比未超过50%;3分为超过50%，百分比未超过75%;4分为超过75%。总分上述两种计分方法的乘积。其中分数0分为阴性，以“-”表示为低表达;≤3分为弱阳性，以“+”表示为正常表达;4分≤总分≤6分者为中等阳性，以“++”表示为高表达;≥7分者为强阳性，以“+++”表示为过表达。其中“-”和“+”视为低表达或正常表达。“++”和“+++”视为阳性表达。其中总分未超过4分及以下者为PAK4正常表达。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 22.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验及Fisher确切概率检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PAK4表达情况

60例PTC中存在PAK4阳性表达27例（45.00%），其中强阳性表达及中等阳性表达分别为12例（20.00%）及15例（25.00%）。正常甲状腺组织中未存在阳性表达，其中亚急性甲状腺炎及甲状腺滤泡性腺瘤中均存在1例高表达，其余未存在阳性表达。PAK4阳性表达和阴性表达见图1。PTC中PAK4的阳性表达率为45.00%，显著高于甲状腺良性组织中的6.67%，差异有统计学意义（字2=13.457，P=0.000）。

注：左图PAK4蛋白强阳性表达;右图PAK4蛋白阴性表达。

2.2 PAK4的表达与临床病理特征关系

PAK4在甲状腺乳头状癌阳性表达和正常表达的性别、年龄、肿瘤大小、是否单发、是否单侧比较，差异无统计学意义（P>0.05）;两者腺体外浸润、临床分期、淋巴结转移比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

PTC发病过程较为隐匿，因此其早期诊断尤为关键，本病的发病机制较为复杂[6-7]。PAK4是1994年在进行RAS相关蛋白研究中发现的一种下游分子蛋白，参与经典MAPK信号通路[8]。曾有研究表明，PAK4能不经过RAF及MEK等激酶，通过其他途径激活ERK以调节PTC细胞的转移[9-11]。笔者研究表明，PTC中PAK4的阳性达率为45.00%，显著高于甲状腺良性组织的6.67%，与PTC临床病理参数相关性的研究中发现，临床分期越高，PAK4表达率越高，这与胃癌、卵巢癌及乳腺癌的研究基本一致。PAK4在有腺体外浸润及淋巴结转移中呈高表达，这与金成玲[12]在结肠癌及胃癌的研究中存在相似结论。此外在性别、年龄、肿瘤大小、单发与否及单侧与否等相关因素中差异无统计学意义。黄凯等[13]通过对膀胱癌进行研究发现，肿瘤较大PAK4表达较高，与本实验研究存在差异，这可能与实验样本较小有关。此外年龄也是甲状腺癌的一项危险因素，可能也与样本数量存在关系，因此进一步扩大样本对本实验研究具有重要意义。

综上，PAK4在甲状腺乳头状癌中阳性表达率较高，可能作为预测是否存在腺体外浸润、癌症分期、淋巴结转移的有效指标，为本病的早期诊治提供新的策略。

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（收稿日期：2020-02-28） （本文编辑：何玉勤）