HPVE6/E7mRNA联合P16Ki-67预测低级别宫颈鳞状上皮的临床价值评估

江强

【摘要】 目的：探討HPVE6/E7mRNA联合P16Ki-67预测低级别宫颈鳞状上皮的临床价值。方法：选取2017年1月-2019年4月在本院进行妇科检查的低级别宫颈鳞状上皮病变患者220例，以宫颈病理学为标准，对患者进行HPVE6/E7mRNA检测、P16Ki-67双染色及联合检测，比较P16Ki-67与HPVE6/E7mRNA的阳性检测率以及单一检测与联合检测对高级别宫颈鳞状上皮病变及以上患者的诊断效能。结果：HPVE6/E7mRNA宫颈炎、LSIL检测阳性率分别为13.64%、22.34%，P16Ki-67宫颈炎、LSIL检测阳性率分别为4.55%、10.64%，两组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。HPVE6/E7mRNA HSIL、宫颈癌检测阳性率分别为80.00%、100%，P16Ki-67 HSIL、宫颈癌检测阳性率分别为77.14%、100%，两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。联合检测灵敏度明显高于单一检测，比较差异有统计学意义（P<0.05），且联合检测约登指数较高，且特异性较高，其综合性最强。结论：HPVE6/E7mRNA联合P16Ki-67能够更好预测低级别宫颈鳞状上皮病变的进展，且针对高级别宫颈病变具有更强的敏感性，减少阴道镜转诊率，有效避免了因短暂性HPV感染的过度治疗，从而降低了监测以及治疗成本。

【关键词】 HPVE6/E7mRNA检测 P16Ki-67检测 低级别宫颈鳞状上皮病变

Evaluation of Clinical Value of HPVE6/E7mRNA Combined with P16Ki-67 in Predicting Low Grade Cervical Squamous Epithelium/JIANG Qiang. //Medical Innovation of China， 2020， 17（22）： 0-067

[Abstract] Objective： To investigate the clinical value of HPVE6/E7mRNA combined with P16Ki-67 in the prediction of low grade cervical squamous epithelium. Method： From January 2017 to April 2019 in our hospital of department of gynaecology the less of cervical squamous epithelial lesions of 220 cases were selected. On the basis of cervical pathology，they were given HPVE6/E7mRNA test， P16Ki-67 double staining and joint detection. P16Ki-67 with HPVE6/E7mRNA positive detection rate， and a single detection with joint detection in patients with high level cervical squamous epithelial lesions and above diagnostic efficiency of patients were compared. Result： The positive rates of HPVE6/E7mRNA cervicitis and LSIL were 13.64% and 22.34%， respectively， the positive rates of P16Ki-67 cervicitis and LSIL were 4.55% and 10.64%， respectively， with significant differences between the two groups （P>0.05）. The positive rates of HPVE6/E7mRNA HSIL and cervical cancer detection were 80.00% and 100%， respectively， the positive rates of P16Ki-67 HSIL and cervical cancer detection were 77.14% and 100%， respectively， with no statistical difference between the two groups （P>0.05）. The sensitivity of the combined test was significantly higher than that of the single test， with a significant difference （P<0.05）. Moreover， the combined test had a higher Yoden index， higher specificity， and the most comprehensive. Conclusion： HPVE6/E7mRNA combined with P16Ki-67 can better predict the progress of low grade cervical squamous lesions， and has a stronger sensitivity for high grade cervical lesions， reduce the colgoscopy referral rate， effectively avoid over treatment due to transient HPV infection， thereby reducing the monitoring and treatment costs.

[Key words] HPVE6/E7mRNA detection P16Ki-67 detection Low grade cervical squamous epithelial lesions

First-authors address： Taian Cancer Prevention and Treatment Hospital， Taian 271000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.22.017

宫颈癌发病率在妇女恶性肿瘤位居第二，据相关统计全世界每年大约有50万女性罹患宫颈癌，我国每年约新增宫颈癌患者13万例，约占全球1/3发病量[1-2]。据相关研究显示，宫颈癌以及癌前病变均与HPV感染有关[3]。而相关学者进一步的研究发现，宫颈上皮内瘤变并非一种程度不同连续的单一病变，而是具有明显差异的两类不同临床病理过程，临床将其分为低级别鳞状上皮病变和高级别鳞状上皮病变[4]。低级别鳞状上皮病变是致癌性或者非致癌性HPV感染的组织病理学表现，临床主要通过随访为主;而高级别病变则被认为癌变病变，此类患者通常需要通过手术进行治疗。而临床对于低级别鳞状上皮病变的诊断具有一定难度，因缺乏客观依据，通常会导致诊断结果出现偏差，从而出现漏诊或过度治疗，因此提高低级别宫腔鳞状上皮病变准确性具有重要的临床价值。文献[5-6]显示，HPVE6/E7mRNA与P16Ki-67检测在低级别宫腔鳞状上皮病变的评估中均有一定的临床价值，但对于二者联合预测低级别宫腔鳞状上皮病变的研究较为罕见，需进一步探讨。本研究旨在通过对低级别宫腔鳞状上皮病变患者使用HPVE6/E7mRNA联合P16Ki-67检测，评估二者联合在预测低级别宫腔鳞状上皮病变的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年1月-2019年4月在本院进行妇科检查，经TCT检测为低级别宫颈鳞状上皮病变患者220例，年龄21～62岁，平均（40.43±4.61）岁。纳入标准：有性生活史，在入院前3 d未进行阴道冲洗或用药;排除妊娠、HIV感染或者免疫缺者，有子宫腔疫苗接种、盆腔手术、子宫颈病变的治疗史。本研究患者均知情同意并签署知情同意书，同时获得本院伦理委员会的批准下进行。

1.2 方法 所有患者均先行TCT检测，之后进行P16Ki-67免疫细胞化学双染色检测以及HPVE6/E7mRNA检测。标本的采集：分别采集每位患者宫颈标本2份。取膀胱截石位，窥阴器暴露宫颈，使用无菌盐水棉球拭去宫颈口多余分泌物以及黏液，将宫颈刷置于宫颈口顺时针旋转5周后取出，将标本放入相对应的取样试管中进行相应的检测。P16Ki-67免疫细胞化学双染色检测方法：（1）制作液基细胞学基片，将其用950 mL/L酒精固定20 min，使其自然干燥;（2）在免疫组织化学染色仪中进行P16Ki-67双染色检测;（3）设置阳性与阴性对照：即P16核呈现棕黄色或者胞质及核均为棕黄色，且在同一个细胞内Ki-67核呈现棕红色则为阳性，其他则为阴性[7]。HPVE6/E7mRNA检测方法：（1）离心处理后弃去上清液，使标本同质化;（2）在沉淀细胞团中加入200 μL的裂解液与400 μL DDH2O，混合后再加入5 μL蛋白酶K，在65 ℃环境中孵育60 min;（3）配置空白以及陽性质控缓冲液2份，每份98 μL，标本反应体系50 μL;（4）使用含特殊捕获探针的96孔板常温复温后，进行杂交捕获mRNA;（5）按照3︰1 000比例配置底物催化剂与底物的混合液，将96孔板取出，弃置标记探针混合液，IX洗脱液洗板3次，200 μL/次，每孔加入混合液100 μL，封板后置于46 ℃恒温箱反应20 min后判断结果;（6）HPVE6/E7mRNA拷贝数>1 copy/mL为阳性，反之为阴性[8]。组织病理学检测：为能够准确评估检测方法的特异性，本研究对所有患者进行阴道镜下子宫颈活检，其结果分为低级别宫腔鳞状上皮（LSIL）及以下病变：宫颈炎及CINⅠ，高级别宫腔鳞状上皮（HSIL）及以上病变，CINⅡ、CINⅢ以及宫颈癌。

1.3 统计学处理 本研究数据采用SPSS 19软件包进行统计学处理，计量资料采用率（%）表示，比较采用字2检验，一致性采用Kappa值衡量，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织病理学结果 220例患者中宫颈炎88例（40.00%），LSIL为94例（42.73%），HSIL为35例（15.91%），宫颈癌为3例（1.36%）。

2.2 P16Ki-67与HPVE6/E7mRNA的宫颈炎、LSIL、HSIL、宫颈癌检测情况比较 HPVE6/E7mRNA宫颈炎、LSIL检测阳性率分别为13.64%、22.34%，P16Ki-67宫颈炎、LSIL检测阳性率分别为4.55%、10.64%，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。HPVE6/E7mRNA HSIL、宫颈癌检测阳性率分别为80.00%、100%，P16Ki-67 HSIL、宫颈癌检测阳性率分别为77.14%、100%，比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3 P16Ki-67检测、HPVE6/E7mRNA检测及联合检测对HSIL诊断效能比较 联合检测灵敏度明显高于单一检测，比较差异显著（P<0.05），且联合检测的约登指数较高，但三者比较无显著差异（P>0.05）。见表2～5。

3 讨论

宫颈癌是危害女性健康的恶性肿瘤之一，近几年随着宫颈细胞学筛查技术的发展，逐渐普及于临床后，使宫颈癌的发生率与死亡率得到明显改善。研究显示，低级别宫颈鳞状上皮病变在临床诊断中具有相当大的挑战，与观察者之间重复性较差及过度诊断有关，导致低级别宫颈鳞状上皮病变在治疗中存在较多的分歧[9-10]。相关学者研究发现，约15%的低级别宫颈鳞状上皮病变可能会发展为宫颈癌。在低级别宫颈鳞状上皮病变中，HPV高感染率现状导致DNA的分流能力受到影响，若将所有感染HPV的低级别宫颈鳞状上皮病变患者转为阴道镜检查会给患者带来较大的经济压力及心理负担[11-12]。因此如何将有进展性的高危患者从大量暂时性感染人群中分流出来成为当务之急。文献[13]显示，HPVE6/E7致癌基因的表达是HPV感染与高级别宫颈鳞状上皮病变进展的一项重要标志。HPVE6/E7致癌基因的上调降解了p53及pRb蛋白，解除细胞周期，最终形成子宫颈癌[14]。

本研究显示，220例低级别宫颈鳞状上皮病变患者通过组织病理进一步检测，其中炎症患者占40%，低级别宫颈鳞状上皮病变患者占42.73%，高级别宫颈鳞状上皮病变患者占15.91%，宫颈癌患者占1.36%。使用HPVE6/E7mRNA检测其炎症、低级别宫颈鳞状上皮病变、高级别宫颈鳞状上皮病变及宫颈癌阳性率分别为13.64%、22.34%、80.00%、100%，而P16Ki-67双染色检测在上述病变中的阳性率分别为4.55%、10.64%、77.14%、100%。由此可见，随着患者病变程度的加重，两种检测方法检测阳性率随之增加。而在炎症与低级别宫颈病变中，HPVE6/E7mRNA检测阳性率明显高于P16Ki-67，而在高级别病变与宫颈癌中，两种检测阳性率则无显著差异，与相关文献[15]结论一致。

另有学者研究发现，HPVE6/E7mRNA出现的时间要早于P16Ki-67，特别是在宫颈病变较轻的组织中表现较为明显，而在病变较为严重的组织中，HPVE6/E7mRNA与P16Ki-67则几乎同时表达[16-17]。文献[18]显示，P16Ki-67双染色检测可有效提高宫颈癌的准确性，并且对于在低级别宫颈上皮病变中的分流诊断中有重要价值。国外则有报道认为HPVE6/E7mRNA可有效提高宫颈癌筛查的效能，同时可弥补TCT检测的不足[19-20]。

本研究通过分析HPVE6/E7mRNA、P16Ki-67及二者联合检测在低级别宫颈病变患者的分流效果进行评估，笔者以组织病理学为诊断结果的金标准。结果显示，联合检测诊断高级别宫颈病变以上的灵敏度明显高于单一检测，且联合检测的约登指数最高，说明联合检测的真实性为最好。相比于HPVE6/E7mRNA、P16Ki-67单一检测，二者联合检测不仅提高了诊断的灵敏度，同时也保持了较高的特异度，且综合性最好。

综上所述，HPVE6/E7mRNA联合P16Ki-67能够更好预测低级别宫颈鳞状上皮病变的进展，且针对高级别宫颈病变具有更强的敏感性，减少阴道镜转诊率，有效避免了因短暂性HPV感染的过度治疗，从而降低了监测以及治疗成本。

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（收稿日期：2019-12-02） （本文編辑：周亚杰）