乌拉特前旗地区沙芥总黄酮提取方法对比研究

乌仁格格 高子舒 余靖冉(河套学院，内蒙古 巴彦淖尔 015000)

0 引言

沙芥又名沙萝卜、沙盖，蒙名额乐森·老邦，是沙区人民喜爱的野菜之一，其根、茎、叶均可食用，风味独特，营养保健价值高，有“沙漠人参”之称[1]。此外沙芥也是天然的中药、蒙药，主要含有矿物质、糖类、维生素、氨基酸、黄酮、生物碱等化学成分[2]。沙芥的茎和幼叶富含水，幼苗时的沙芥、沙芥籽含有大量油脂，可饲养生活在沙区的野生动物，牛羊等畜类也喜食，可作为牛羊等动物春冬两季的好饲料，同时对维护沙区生态平衡也起到了不可磨灭的作用[3]。本实验是对巴彦淖尔市乌拉特前旗地区沙芥总黄酮的提取方法进行对比研究，确定适于提取乌前旗沙芥总黄酮的可行性方法，为乌前旗沙芥开发利用提供理论依据。

1 材料与仪器

将已清洗并自然风干的野生沙芥全草放入粉碎机至2/3 处粉碎；再过60 目筛得试样。样品于2017 年8 月从内蒙古巴彦淖尔市乌拉特前旗沙地采集得。电子分析天平(FA10048 型上海市安亭电子仪器厂)、旋转蒸发仪(上海亚荣仪器有限公司)、数显恒温水域锅(HH-2 国华电器有限公司)、紫外分光光度计(SP-1920UV 型上海光谱仪器有限公司)、循环水式多用真空泵(SHB-III 型郑州长城科工贸有限公司)、各类玻璃仪器。芦丁(合肥博美药剂有限公司)为生化试剂，其他试剂为分析纯。

2 实验方法

2.1 标准曲线的绘制

称取芦丁标样10.00mg 加入80%乙醇溶液溶解，并定容至50mL。分别精确移取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL标准溶液于25mL 容量瓶，加入1.0mL5% NaNO2溶液，摇匀静置8min；再加入1.0mL10% Al(NO3)3溶液，摇匀静置8min；最后加4.0mL 2mol/L NaOH 溶液，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，摇匀静置15min，备用。通过紫外分光光度计测得芦丁标准溶液在510nm 处有最大吸收峰，将上述六份溶液于510nm下测OD 值，绘制标准曲线，得回归方程[4]。

2.2 精密度测定试验

精确移取芦丁标准溶液2mL，平行六份，测其吸光度，按标准曲线方法测定芦丁含量[4]。

2.3 加样回收率测定试验

准确称取沙芥全草粉末0.5g，平行三份，分别加入适量芦丁对照品，按2.1 中方法处理，测其OD 值，计算回收率[4]。

2.4 提取方法

2.4.1 碱提酸沉法

准确称取1.000 g 沙芥全草粗粉加100mL 蒸馏水煮沸。边搅拌边缓慢加入石灰石水溶液将体系pH 调节至8～9，微沸20～30min，趁热过滤。收集滤渣于250mL 锥形瓶中，重复上述操作，趁热过滤。合并两次滤液于250mL 锥形瓶中在60～70℃下用HCl 溶液调节pH 至5.0，静置24h，抽滤。沉淀物连同滤纸放在烧杯中，加入30mL 80%乙醇溶液放置3h[5]。抽滤后将滤液浓缩，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.2 乙醇热回流法

准确称取1.000g 沙芥全草粗粉加80%的乙醇30mL，在80℃温度条件下回流提取1h，抽滤。重复本操作3 次，合并滤液蒸馏浓缩，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.3 甲醇热回流法

操作同乙醇热回流法，溶剂为80%的甲醇。

2.4.4 超声波提取法

准确称取沙芥全草粗粉1.000g 加30mL 80%的甲醇；在超声波震荡器中震荡1h，抽滤[6]。滤渣重复上述步骤2 次，合并滤液，蒸馏浓缩，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.5 热水浸提法

准确称取沙芥全草粗粉1.000g 于250mL 锥形瓶中，加100mL蒸馏水，在95℃温度条件下用恒温水浴锅保温浸提6h，然后加热蒸馏浓缩，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液[5]。

2.5 总黄酮提取含量测定

每个方法平行提取四组，分别精密移取1mL 提取液，按照2.1 方法显色测定OD 值，根据标准曲线计算总黄酮提取含量。

式中：C 为待测样内总黄酮浓度(mg/mL)；V 为总体积(mL)；m 为沙芥原料质量(g)。

3 结果与分析

3.1 标准曲线绘制

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，在波长510nm 下测定吸光度，绘制标准曲线，得线性回归方程为：A=10.5685C-0.0024，R 值为0.9994。

3.2 精密度和加样回收率测定试验

精密度测定结果如表1 所示，计算得RSD 为0.79%，说明精密度良好、重复性良好。加样回收率测定结果见表2，计算得平均回收率为98.4%，RSD 为1.11%，说明准确度良好，方法可靠。

表1 精密度测定试验结果

表2 加样回收率测定试验结果

3.3 不同提取方法对沙芥全草总黄酮提取含量的影响

采用甲醇热回流法、乙醇热回流法、碱提酸沉法、超声波提取法、热水浸提法等5 种方法对沙芥全草中总黄酮进行了提取，提取效果如表3 所示。

表3 不同提取方法得沙芥全草总黄酮提取含量

由表3 中数据可知，不同提取方法提取沙芥全草总黄酮含量排序为：碱提酸沉法＞乙醇热回流法＞超声波提取法＞甲醇热回流法＞热水浸提法；且RSD 值表明重复性均良好。

五种方法中碱提酸沉法提取含量最高，能有效的提取沙芥中总黄酮，但其实验步骤较为复杂，试剂药品消耗量大，实验条件苛刻且用到的溶剂具有强烈腐蚀性，实验重复偏差相对较高，因此不适宜作为最佳提取方法。热水浸提法具有操作简单，溶剂易得的优点；但实验温度要求高，平均提取含量为3.29mg/g，与碱提酸沉法比提取含量低了16.9%，且实验所需时间长，一般不常用于总黄酮的提取。超声波提取法、甲醇热回流法和乙醇热回流法相对于碱提酸沉法来说操作简单，实验重复性良好；其中超声波提取法提取时间最短，但对仪器有要求，实验成本高；甲醇热回流法操作与乙醇热回流法相同，但其提取剂甲醇有一定毒性；而乙醇热回流法提取含量较高，且还具有实验原理易懂，使用后的乙醇可回收再利用等优点。因此提取沙芥全草总黄酮可将乙醇热回流法作为最佳提取方法。

4 结语

结果表明：在乌拉特前旗地区沙芥总黄酮的提取方法对比实验中，乙醇热回流法是最佳提取方法，平均提取含量为3.58mg/g。该方法具有操作简单，原理易懂，提取含量高，仪器简易，用时较短，溶剂乙醇无毒无害，方便回收等优点。贾彦峰等[6]测定沙芥叶片总黄酮含量的研究得结果为；碱提酸沉法＞超声波提取法＞乙醇(甲醇)回流提取法＞热水浸提法，其结果与本研究有较大差异，原因可能是试样产地、采集时间不同，贾彦峰[6]等采用的是沙芥叶片，本研究采用沙芥全草为试样。

通过本研究可知，巴彦淖尔市乌拉特前旗地区沙芥全草中总黄酮含量较可观，建议在今后研究中对本地区沙芥总黄酮乙醇回流提取法作进一步工艺优化以提高总黄酮的提取含量；为进一步分离、鉴定黄酮单体成分和其生物活性成分提供最优提取方案。总体来看，沙芥是一种值得去开发利用的药用和食用植物资源。