实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

□ 倪 阳 秦皇岛市食品药品检验中心

数据显示，全球每年大约有超过50万人死于食物中毒，约6 000万人出现腹泻。微生物食物中毒的发生率逐年攀升。因此，进一步完善微生物检测手段，提升检测效率与准确性是当前的主要发展方向。传统检测方法中，需要对细菌进行分离、培养与鉴定，整个过程耗费的时间比较长，准确性也不高，而实时荧光定量PCR技术因具备高效、快速，且准确性高等优势，被广泛应用于食品致病菌检测中。实时荧光定量PCR技术在传统PCR反应过程中加入荧光基团，持续监测荧光信号的变化情况，并将获得的基因初始量和已知量进行对比，从而完成实时荧光定量。与传统PCR相比，有了质的飞跃，从定性到定量，灵敏度、速度以及准确性方面都显著提升。

1 金黄色葡萄球菌的检测

金黄色葡萄球菌是导致食物中毒的一种致病菌，人畜都可能会被感染，感染症状以局部感染、脑膜炎、肺炎等化脓性感染为主，严重危害人们的身体健康。与传统检测方法相比，实时荧光定量PCR技术具有明显的优势。根据金黄色葡萄球菌基因序列设计引物与探针，采用基因重组技术建立实时荧光定量PCR方法以及金黄色葡萄球菌重组质粒标准品即可进行检测。李丹丹[1]建立了快速检测黄色葡萄球菌的实时荧光定量PCR方法，并对样品进行了检测，其阳性率和国标法基本一致，具有很高的特异性与灵敏度。随着技术的快速更新与完善，人们用于检测的手段和方法也会越来越高效化。

2 沙门菌的检测

沙门菌是一种常见的致病菌，其主要是通过食品或污染水等渠道感染人类与动物，会造成胃肠炎、败血症、伤寒等相关疾病。传统检测方法通常需要4—7 d的时间，需要耗费大量的时间与精力。通过荧光定量PCR方法扩增沙门菌的基因片段，可高效准确的对其进行检测，其整体特异性是非常强的。曹冬梅[2]根据伤寒沙门菌的基因序列设计引物与探针，对伤寒沙门菌进行了全面的检测与分析，且有效鉴定出了绝大多数的伤寒沙门菌，所检测的结果与传统方法检测结果一致。相关学者通过实时荧光定量PCR快速检测沙门菌，所需时间较短，检测速度大幅度提升，同时检测精准性与质量也有了明显的改善[3]。

3 志贺菌的检测

志贺菌主要有痢疾志贺菌、福氏志贺菌等血清群，一旦感染人类，将会导致细菌性痢疾，严重危害人类的健康安全。李丹丹以志贺菌基因序列为目的基因设计引物探针，并建立了快速检测方法，并对样品进行了全面检测，得出的结果和国标法一致[4]。

4 单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌属于一种短小杆菌，可在水、土壤以及粪便当中检测出，分布极为广泛，会对奶制品造成严重的污染。主要通过口、粪进行传播，会引起脑膜炎、菌血症等相关疾病，严重危害人畜健康。相关学者[5]等以单核细胞增生李斯特菌基因为靶基因，建立了实时荧光定量PCR检测方法，并对150份样品进行了检测，并检测出3份阳性样本，随后建立了可快速高效检测猪肉中该细菌的实时荧光定量PCR方法，且准确性与速度显著提升，可应用于大量样品的同时检测。

5 大肠埃希菌

大肠埃希菌属于肠道正常菌群，但也存在引起腹泻的菌株，会导致人体出现菌血症、肺炎，还会引起泌尿系统感染，实际危害性非常大。相关学者等建立了实时荧光定量PCR法对食品中的菌株进行快速检测，该方法更加快捷、灵敏，可应用于大量食品的同时检测[6]。

6 结语

实时荧光定量PCR技术具备高灵敏度、速度快以及特异性等优势，在食物中毒与疾病爆发事件的检测中有着显著的优势与作用，被广泛应用于食品微生物检测中。随着各项技术的快速发展，在未来其应用范围也会进一步扩大，效率也会不断提升，为食品安全检测工作的高效有序开展奠定良好的基础。