应用气相色谱法测定复方丹参片中冰片含量

李石化，杨建龙

（长春市食品药品检验中心，吉林 长春 130000）

复方丹参片是中医常用的理血方剂，主要由丹参，三七，冰片组成[1-2]。复方丹参片具有活血化瘀，理气止痛的功效，被收入中国药典2015年版[3-4]。临床研究显示复方丹参片在气滞血瘀所致的胸痹、心痛等病症应用广泛[5]。冰片可芳香开窍，行气止痛，是复方丹参片中的主要成分之一。但是由于冰片性质的特殊性，易挥发，且生产时投料较少，因此含量容易下降[6-7]。本次研究应用气相色谱法建立复方丹参片中冰片含量，考查复方丹参片中冰片提取方法的效果，现汇报如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦的GC-4890D型气相色谱仪，FID检测器以及杭州普惠的SePu 3000色谱工作站。

1.2 试药

复方丹参片由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，（批号19040513，19051106，19062205）。异龙脑对照品、龙脑对照品均由中国食品药品检定研究院提供（批号111512-201904、110881-201902）。无水乙醇为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选用DB-WAX色谱柱（30mm，0.32mm，0.25μm），柱温初始100℃，后以7.0℃/min的升温速度将柱温升至160℃。检测器的温度设置为230℃，载气流速设定为2.0mL/min。

采用分流进样，分流比为15:1。进样量为1μL，用内标法进行测定，内标物选用水杨酸甲酯。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液的制备

量取适量的水杨酸甲酯，加入含有无水乙醇的量瓶中，制成0.20mg/ mL的内标溶液。

2.2.2 供试液的制备

取复方丹参片10片，细细研磨后。精密称定0.3g样品将其加入烧瓶中，加入内标溶液8mL，进行超声溶解20min，待其冷却后再加内标溶液定标10mL。

2.2.3 对照溶液的制备

分别取适量的龙脑、异龙脑对照品0.3g，加入适量的内标溶液，摇匀制备成龙脑0.15mg/ mL、异龙脑0.10mg/ mL的混合对照溶液。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备

取不含龙脑、异龙脑的复方丹参片，研磨后称定适量，按同法制定成阴性对照品溶液。

3 方法学考察

3.1 专属性试验

取对照溶液，在2.1色谱条件下进行进样测定，结果可见龙脑、异龙脑和水杨酸甲酯三峰能够有效分离，且阴性对照品溶液中在龙脑、异龙脑的相同位置没有色谱峰，专属性良好，干扰小。

3.2 线性关系考察

精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、1.2、2.4mL放入10mL 量瓶中，经内标溶液稀释定容。依次取样1μL注入气相色谱仪进行测定，以龙脑、异龙脑与内标物比值峰面积为纵坐标，浓度的比值为横坐标，绘制其回归方程为：①异龙脑Y =6.7912X-2.4605 ；②龙脑Y =7.1395X-3.9138。结果显示异龙脑、龙脑分别在65.2～84.9ng、55.8～98.1ng 范目内呈现出良好的线性关系（r=0.9982、0.9993）。

3.3 精密度试验

取对照品溶液，稀释定容后取样按上述色谱条件进行重复测定6次。测定结果显示异龙脑,龙脑与内标物的峰面积比值较为稳定，其RSD分别为0.93%,0.98%.

3.4 稳定性试验

取批号19040513的供试品溶液，稀释定容后，在室温下放置，每间隔2h进行进样测定，重复测定6次，结果显示龙脑、异龙脑与内标物峰面积的比值的RSD分别为0.93%、0.90%，显示供试品溶液在12h内可保持稳定.

3.5 重复性试验

取批号19040513的复方丹参片供试品溶液6 份，按之前的色谱条件进行重复测定，结果显示龙脑和异龙脑的RSD分别为0.92%, 0.89%(n=6)。

3.6 回收率试验

精密称取批号19040513的样品制成供试品溶液，分别加入样品含量50%，100%，150%的异龙脑,龙脑对照品，按上述色谱条件进样测定，计算异龙脑,龙脑的含量,结果显示异龙脑、龙脑的回收率分别为98.4%、99.1%,RSD分别为1.14%，0.97%。

3.7 样品含量测定

对于三个批号的复方丹参片供试品分别制备供试品溶液，均进行进样测定，结果可见三批的龙脑含量分别为1.523、1.518、1.530mg/片，异龙脑分别为0.913、0.891、0.930mg/片，详见表1。

表1 复方丹参片样品的龙脑、异龙脑含量测定

4 讨 论

冰片也称为合成龙脑，由龙脑和异龙脑构成，其挥发性较强，对于复方丹参片的质量也一定的影响[8-9]。本次研究建立气相色谱法测定复方丹参片的冰片含量，内标物选用水杨酸甲酯，其出峰时间与龙脑相近[10]，而柱温选择，我们考量了不同温度下的色谱图，结果显示在150-160时，色谱图最佳。结果显示应用气相色谱法测定复方丹参片中冰片含量，方法简便准确，可用于其质量控制。