15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂高效液相色谱分析

胥亚云，吴建兰，曹新梅，陈玲玲

(联合国南通农药剂型开发中心，江苏南通 226006)

嘧菌酯(azoxystrobin)属高效、广谱、低毒的甲氧基丙烯酸酯类农药，能够抑制真菌分生孢子的产生，减少植物被侵染，对14-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧酰胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效[1]，具有保护、治疗、铲除作用，被广泛应用于瓜果、蔬菜、谷物、水稻等多种作物病害的防治。噻呋酰胺(thifluzamide)是噻唑酰胺类琥珀酸酯脱氢酶抑制剂，具有很强的内吸传导性和持效期长，对多种致病真菌有活性，尤其对担子菌纲真菌引起的病害如纹枯病有特效[2]。15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂是联合国南通农药剂型开发中心实验室自制样品，主要用于预防花生白绢病。目前嘧菌酯和噻呋酰胺的主要分析方法有液相色谱法[3-5]和气相色谱法[6]，但二者复配制剂的分析方法尚未见文献报道。本文采用液相色谱法同时测定试样中嘧菌酯和噻呋酰胺的含量，方法简单、高效，适用于该农药制剂质量控制。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

安捷伦1200高效液相色谱仪配二极管阵列检测器(DAD)；Eclipse XDB Cl8不锈钢色谱柱 (4.6 mm×150 mm，5 μm)；微孔滤膜(混合纤维树脂，孔径约0.45 μm)(上海兴亚净化材料厂)；电子天平(BSA224S)(赛多利斯科学仪器有限公司)；超声波振荡器(JP-030S)(深圳市洁盟清洗设备有限公司)。

新蒸二次蒸馏水；甲醇、乙腈均为色谱级(国药集团化学试剂有限公司)；嘧菌酯标样(质量分数98.8%)、噻呋酰胺标样(质量分数98.6%)(上海市农药研究所)；15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂(实验室自制，嘧菌酯和噻呋酰胺比例为1∶2)。

1.2 色谱条件

梯度洗脱程序：0～10 min，甲醇/水=68/32(体积比)；11～14 min，甲醇/水=92/8(体积比)；15～18 min，甲醇/水=68/32(体积比)；流速：1.0 mL/min。柱温：室温；检测波长：225 nm；进样体积：5 μL。在上述色谱条件下嘧菌酯和噻呋酰胺的保留时间分别约为3.7 min和7.0 min。

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制

称取嘧菌酯标样0.25 g和噻呋酰胺标样0.5 g (均精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为标准储备溶液。准确移取上述溶液5 mL于另一50 mL容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，过滤，备用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取0.5 g(精确至0.000 2 g) 试样，置于50 mL容量瓶中，用甲醇超声提取10 min，冷却后用甲醇定容，摇匀，过滤，备用。

1.3.3 测定

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针峰面积的变化率，直至相邻2针峰面积变化≤1.0%后，方可进行样品分析。进样顺序为：标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液。典型色谱图如图1所示。

1.3.4 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标准溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)的峰面积分别平均，试样中嘧菌酯(或噻呋酰胺)的质量分数W(%)按下式进行计算：

式中：A1为标样溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)峰面积的平均值；A2为试样溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)峰面积的平均值；m1为嘧菌酯(或噻呋酰胺)标样的质量，g；m2为试样的质量，g；p为嘧菌酯(或噻呋酰胺)标样的质量百分含量，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

应用二极管阵列检测器，在190～400 nm对1.3.1标准溶液进行光谱扫描，得到嘧菌酯和噻呋酰胺的紫外吸收光谱图(图2)，结果显示，二者的最大吸收波长均在205 nm左右。为了避免洗脱液溶剂及样品杂质峰的干扰，选择225 nm作为检测波长。

图2 嘧菌酯与噻呋酰胺光谱图

2.2 流动相的选择

在等度洗脱条件下，分别用甲醇-水和乙腈-水体系作为流动相进行筛选试验，发现当流动相有机相比例高时，样品中杂质峰很难与目标峰分离；有机相比例低时，样品中杂质峰又很难被洗脱，因此采用梯度洗脱程序。考虑到乙腈-水体系的成本较高，首先选择甲醇-水体系，进行梯度洗脱程序的优化。经反复测试发现，选择在1.2节所示梯度洗脱程序下，两种有效成分均能较好分离，且峰形对称，基线平稳，杂质峰也能很快被洗脱，保留时间适当。因此，选择甲醇-水体系，采用初始流动相为甲醇/水=68/32(体积比)梯度洗脱程序进行分离检测。

2.3 方法的线性相关性测定

用移液管移取1.3.1节中的标准储备液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL于5个50 mL容量瓶中，用甲醇稀释，定容至刻度，摇匀，制成系列标准溶液。在上述色谱条件下测定其响应值。分别以浓度(x)和峰面积(y)为横坐标和纵坐标，绘制标准曲线，得到两种物质的线性方程及相关系数(表1)。结果表明，嘧菌酯在0.1～1.0 mg/L、噻呋酰胺在0.2～2.0 mg/L，方法的线性关系良好。

表1 线性方程及线性相关系数

2.4 方法精密度试验

在选定的色谱条件下，对同一15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂样品进行5次平行测定，计算标准偏差和变异系数，结果见表2。嘧菌酯的标准偏差和变异系数分别为0.021和0.41%；噻呋酰胺的标准偏差和变异系数分别为0.031和0.30%。

2.5 方法准确度试验

采用加标回收法，在已知含量的同一15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂5个平行样品中，分别加入1.3.1节中的标准储备溶液1、2、3、4、5 mL，按照上述色谱操作方法进行分析，计算加标回收率，结果见表3。嘧菌酯的回收率为97.55%～100.54%，平均回收率为99.25%；噻呋酰胺的回收率为98.05%～100.34%，平均回收率为99.04%。

表2 方法精密度试验

表3 准确度试验

2.6 结论

本文采用液相色谱仪建立了同时测定15%嘧酯·噻呋酰胺种子处理微囊悬浮-悬浮剂中2种有效成分含量的分析方法。该方法能使两种有效成分有效分离，线性关系良好，精密度和准确度较高，具有操作简单、快捷、准确等优点，可用于该复配制剂产品的质量控制。