经典名方开心散不同温度高压蒸汽灭菌条件下9种指标成分含量变化研究

陈 颖，禹鹏鑫，丁 辉，荆瑶瑶，张丽娟，余河水, 2, 3*，杨建会，宋新波, 2, 3，李 正, 2, 3

经典名方开心散不同温度高压蒸汽灭菌条件下9种指标成分含量变化研究

陈 颖1，禹鹏鑫1，丁 辉1，荆瑶瑶1，张丽娟1，余河水1, 2, 3*，杨建会4，宋新波1, 2, 3，李 正1, 2, 3

1. 天津中医药大学 中药制药工程学院，天津 301617 2. 省部共建组分中药国家重点实验室，天津 301617 3. 中药制药工程市级实验教学示范中心，天津 301617 4. 天士力医药集团股份有限公司，天津 300410

开心散方出自于唐代孙思邈所著的《备急千金药方》，由远志、人参各四分、茯苓二两、菖蒲一两组成。其中，君药为远志，安神益智、交通心肾、祛痰消肿；臣药为人参，大补元气，生津养血，安神益智，辅以茯苓，利水渗湿、宁心、安神；佐以石菖蒲，开窍化痰、醒神益智。四药合用，具有安神、补气和利湿化浊功效，主治好忘[1-2]。现代药理研究表明，开心散具有抗抑郁[3-4]、抗痴呆[5-6]、抗衰老及抗氧化[7-8]、抗疲劳[9-10]等作用。临床上广泛用于治疗老年痴呆症、抑郁症、焦虑症和神经衰弱等症状。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1290超高效液相色谱仪，Agilent公司；Acquity UPLC®BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），Waters公司；KQ2200DBV型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；AL204型电子天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；超纯水系统，美国Millipore公司。

1.2 材料

远志、人参、茯苓及石菖蒲4种药材均由天津天士力有限公司提供以及安徽援康药业有限公司购买，经天津中医药大学中药鉴定教研室李天祥教授鉴定，远志为远志科远志属植物远志Willd.的干燥根，人参为五加科人参属植物人参C. A. Mey.的干燥根和根茎，茯苓为多孔菌科茯苓属真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核，石菖蒲为天南星科菖蒲属植物石菖蒲Schott的干燥根茎，且按照《中国药典》2015年版要求检测，均为符合药典规定的品种。

2 方法与结果

2.1 开心散散剂的制备

按《备急千金药方》开心散原方，称取各单味药，粉碎过六号筛，按等量倍增法、打底套色法制备开心散散剂。

2.2 微生物限度

参照《中国药典》2015年版四部通则1107“非无菌药品微生物限度标准”，对灭菌前后开心散进行微生物限度检测。结果未灭菌的开心散的微生物限度不符合《中国药典》2015年版项下规定，经过灭菌处理后的开心散其微生物限度均符合《中国药典》2015年版项下规定（表1）。

表1 不同灭菌方法的微生物限度检查结果(n = 3)

2.3 不同灭菌方法的指标性成分含量测定

2.3.2 供试品溶液的制备 称取开心散散剂2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入75%甲醇50 mL超声提取（360 W，40 Hz）30 min，滤过，滤液减压浓缩至干，残渣加75%甲醇溶解，并转移至5 mL量瓶中，加75%甲醇定容至刻度，摇匀，测定前用0.22 μm的微孔滤膜滤过。

2.3.3 色谱条件 色谱柱为Acquity UPLC®BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相为0.05%磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～9 min，7%～14%乙腈；9～13 min，14%～16%乙腈；13～19 min，16%～19%乙腈；19～23 min，19%～23%乙腈；23～32 min，23%～36%乙腈；32～37 min，36%～38%乙腈；37～41 min，38%～42%乙腈；体积流量0.3 mL/min；柱温30 ℃；进样体积2 μL；检测波长203 nm。混合对照品溶液、供试品溶液的色谱图见图1。

1-西伯利亚远志糖A5 2-西伯利亚远志糖A6 3-远志酮III 4-3,6′-二芥子酰基蔗糖 5-细叶远志苷A 6-人参皂苷Rg1 7-人参皂苷Re 8-β-细辛醚 9-α-细辛醚

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 在“2.3.3”项色谱条件下，精密吸取系列质量浓度的混合对照品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。记录各对照品相应保留时间处的峰面积，以色谱峰面积为纵坐标（），质量浓度为横坐标（），绘制标准曲线，计算回归方程，结果显示其线性关系良好。其回归方程，相关系数（）及线性范围见表2。

表2 开心散中9种有效成分的线性关系考察结果

2.5 不同灭菌温度对开心散9种指标性成分影响

表3 不同灭菌温度的9种成分的含量测定结果(n = 3)

表4 9种指标成分在不同高压蒸汽灭菌温度条件下的变化率

Table 4 Variation range of nine index components under different high-pressure steam sterilization temperature conditions

条件对比变化率/%西伯利亚远志糖A5西伯利亚远志糖A6远志酮Ⅲ3,6′-二芥子酰基蔗糖细叶远志苷A人参皂苷Rg1人参皂苷Reβ-细辛醚α-细辛醚111 ℃与未灭菌对比3.447.2127.6011.515.95−3.26−2.435.22−3.58121 ℃与111 ℃对比2.25−0.1612.90−0.59−1.731.250.26−0.1214.13131 ℃与111 ℃对比11.8111.79−2.909.7711.2911.2310.008.2220.32

3 讨论

在样品处理过程中对不同体积分数的甲醇提取溶剂进行比较，发现用75%甲醇超声提取30 min得到的供试液分离效果好且色谱峰数量较多。同时进行200～400 nm波长下全波长扫描，发现在203 nm处各成分均有较强吸收，色谱峰相对较多，故选择203 nm波长下进行分析。研究中还考察流动相（乙腈-水、乙腈-0.05%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液）、柱温（30、35 ℃）、流动相体积流量（0.2、0.3、0.4 mL/min）、进样量（2、4、8 μL)，最终确定流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱，柱温30 ℃，体积流量为0.3 mL/min，进样量为2 μL时所得色谱图可以获得较为平稳的基线，且各待测成分的峰形较好。

文献研究报道α-细辛醚和β-细辛醚具有广泛的药理活性，但β-细辛醚结构在体内不稳定，使得其药理作用及作用机制尚不明确，且超剂量的α-细辛醚和β-细辛醚具有致突变性、遗传毒性和致畸性，临床使用考虑一定的风险[20]。开心散灭菌过程中药效物质变化规律以及变化成分对其药效的影响，以及细辛醚的药效剂量和毒性剂量均有待进一步深入研究。

志谢：中川工程顾问（上海）有限公司提供高压蒸汽灭菌设备进行开心散不同温度的灭菌实验。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Changes of nine index components in classic formula Kaixin Powder under different temperatures of high pressures steam sterilization

CHEN Ying1, YU Peng-xin1, DING Hui1, JING Yao-yao1, ZHANG Li-juan1, YU He-shui1, 2, 3, YANG Jian-hui4, SONG Xin-bo1, 2, 3, LI Zheng1, 2, 3

1. College of Pharmaceutical Engineering of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China 2. State Key Laboratory of Provincial and Ministerial Co-construction of Component Traditional Chinese Medicines, Tianjin 301617, China 3. Municipal Experimental Teaching Demonstration Center of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Engineering, Tianjin 301617, China 4. Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd., Tianjin 300410, China

To establish a UHPLC-DAD method for the simultaneous determination of sibiricose A5, sibiricose A6, polygalaxanthone III, 3,6′-disinapoyl sucrose, tenuifoliside A, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, β-asarone and α-asarone in the extract of Kaixin Powder (开心散), and compare the effect of different steam autoclaving temperatures on the content of nine index components in Kaixin Powder extract, to provide reference for the selection of sterilization process for Kaixin Powder.High pressure steam sterilization method (sterilization temperature 111, 121, 131 ℃; holding time 60 s) was performed for the sterilization process of Kaixin Powder. The chromatographic separation was achieved on a Acquity UPLC®BEH C18column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) with acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution as mobile phase at the flow rate of 0.3 mL/min for gradient elution. The column temperature was maintained at 30 ℃. The wavelength was set at 203 nm.The results showed that the separation of the nine index components was good, and each component had a wide linear range and a good linear relationship (2> 0.999), with good precision, stability, repeatability and sample recovery. Through the detection and comparison of the content of the nine index components in Kaixin Powder after different sterilization conditions, the autoclave sterilization sterilization was optimized at 111 ℃ for 60 s. The bacterial test met the requirements of Pharmacopoeia, and the content change of each component had the smallest difference with the sample before sterilization.The established UHPLC method can be used to simultaneously determine the contents of nine index ingredients in Kaixin Powder. The method is simple to operate, highly sensitive, accurate, practical, and reliable, which provides theoretical basis for the quality control of Kaixin Powder.

Kaixin Powder; classic formula; UHPLC-DAD; high pressures steam sterilization method; sterilization; content difference; sibiricose A5; sibiricose A6; polygalaxanthone III; 3,6′-disinapoylsucrose; tenuifoliside A; ginsenoside Rg1; ginsenoside Re; β-asarone; α-asarone; quality control

R283.6

A

0253 - 2670(2021)04 - 0976 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.009

2020-10-30

“重大新药创制”科技重大专项（2018ZX09721005）；“重大新药创制”科技重大专项（2018ZX09201011）；天津市高等学校科技发展基金计划项目（2018KJ001）

陈 颖（1996—），女，硕士研究生，研究方向中药质量控制。E-mail: 16622911576@163.com

余河水（1981—），男，讲师，研究方向为中药有效成分及质量控制研究。E-mail: hs_yu08@163.com

[责任编辑 郑礼胜]