生猪精液稀释保存注意事项

顾海洋

（江苏省响水县畜禽改良站，江苏响水 224600）

1 前言

生猪人工授精技术能够克服生猪体格大小、时间和区域的差别，充分利用杂种优势，减少疾病传播、特别是生殖道传染病传播，提高优良公猪的配种效能和种用价值，促进生猪品种改良和提高商品猪质量及其整齐度。生猪精液稀释与保存是生猪人工授精技术的一个核心环节，如果操作不严谨，影响精液质量，影响到生猪人工授精的成功率和受孕质量，从而影响生猪人工授精技术的应用效果。

2 生猪精液稀释技术要点

生猪精液稀释的目的就是提高良种公猪利用率，扩大精液容量，增加输精头数，同时延长精子的保存时间及受精能力。生猪精液稀释，有以下几项技术要点：

2.1 采精前的准备

2.1.1 人员的准备。采精员和化验员需更换洁净工作衣、帽，戴口罩，穿长胶鞋。先修剪手指甲，用消毒液洗手，再用清水（冬天用40℃温水）浸泡，擦干后，戴一次性无毒塑料手套。

2.1.2 器械的准备。集精杯（内置无毒塑料袋并覆盖四层纱布或一层精液过滤纸）、载玻片、盖玻片、精液处理器皿、精液密度仪等器械杀菌消毒，确保无菌。采精前1h，将消毒后的与精液接触的器械预热至37℃，显微镜载物台恒温板、精液密度仪预热至37℃。

2.1.3 稀释液的准备。稀释液的温度应略低精液传入精液处理室时的精液温度。

2.1.4 采精室、精液处理室的准备。采精前，需要开启空调，保证室内温度在22℃～28℃，空调的风向应避开精液采精和精液化验的方向。采精室、精液处理室要保持清洁卫生，避免阳光直射。

2.2 稀释液

稀释液用来稀释精液，延长精子寿命，降低精子新陈代谢的速率，为精子提供营养；稀释液中防冻成分，可以使精液低温保存，稀释液中的抗生素可以抑制精液中细菌生长。

2.2.1 制剂和配方。稀释剂有短效稀释剂、中效稀释剂和长效稀释剂，可以自配，也可以购买商品稀释剂。实际工作中，精液保存3d以内，选择短效稀释剂，稀释剂自配，成本较低。精液保存4～6d，选择中效稀释剂；精液保存7d以上，选择长效稀释剂。精液保存4d以上，选择商品稀释剂，虽然成本较高，但具有良好的稳定性，不同批次之间没有较大的差异。稀释剂保存在低温避光的环境中。江苏地区自配公猪精液稀释剂的配方为：葡萄糖50～60g，柠檬酸三钠3～5g，乙二胺四乙酸二钠1g，青霉素钠50万单位，硫酸链霉素0.5g（或庆大霉素10万单位，或卡那霉素50万单位），二次蒸馏水或注射用水1000g。葡萄糖用分析纯或注射用，柠檬酸三钠和乙二胺四乙酸二钠用分析纯。

2.2.2 稀释用水。稀释水应选择二次蒸馏水或注射用水。

2.2.3 配制稀释液。自配稀释剂，用电子天平准确称取药品，放入蒸馏水中用磁力搅拌器搅拌达到充分溶解，再过滤一次，然后在水浴锅内进行预热，以备使用。商品稀释剂，将稀释剂溶解在25℃～35℃的水中，水温不得超过40℃，会对抗生素造成破坏。稀释剂在水中完全溶解后，需要静置1h以上，使稀释液的渗透压与pH值稳定后，才能投入使用。剩余稀释液应密封后置于冰箱中冷藏，时间不得超过24h。

2.3 精液质量检测

精液质量检测的目的是检查种公猪的配种能力、繁殖问题、确定精液稀释倍数、检查精液的处理方法是否正确和检查精液产品的质量。

精液采集后，放置时间不宜超过15min，要在30min之内处理完毕。新鲜精液质量要求：颜色为乳白色或浅灰白，无脓性分泌物。采精重量≥150mL；精子密度≥1亿/mL；精子活力≥0.7；精子畸形率 ≤20%。

2.3.1 外观检测。主要评定标准为精液重量（1mL/g）、颜色以及气味等。成年公猪一次射出的精液重量为150～600mL，精液中精子数量为200～800亿个。公猪的品种不同，精液重量也存在较大的差异。正常的精液为乳白色或灰白色。乳白色说明精液比较浓，精子密度高，2亿/mL以上，属于正常精液；灰白色说明精液比较稀，精子密度也达到1亿/mL，也是正常精液，可以使用。精液颜色为黄色说明精液中混有尿液，多因为公猪包皮积尿；浅褐色说明精液中混有血液，多因为公猪阴茎或输精管有损伤出血；浅绿色说明精液中混杂脓性细胞，多由于公猪患附睾炎或前列腺炎症，这些都属于不正常精液，不可以使用。正常精液的气味略带腥味，如果在检测中发现有其他异味或恶臭味，则代表公猪生殖系统有炎症，不可以使用。精液中含有血液，伴有臭味，公猪可能患有生殖器官疾病，需要将其及时淘汰。

2.3.2 精液实验室检测。精液实验室检测包括精子活力、精子密度以及精子畸形率等。精子活力是指精液在37℃的环境中，直线前进运动的精子数量占精子总数量的百分比，实行“十级一分制”、0.1～1.0评定法，如直线前进运动的精子数量占精子总数量的80%，评为0.8。精子活力检测使用恒温载物台，在温度上升至35℃～37℃时，使用100～400倍的显微镜观察精子，原精液精子活力低于0.7的应废弃。精子密度是指每mL精液中精子的数量，用分光光度计能够准确的检测出精子密度，正常种公猪精液精子密度为2～3亿/mL。精子畸形率则是指精液中畸形精子数量占精子总数量的百分比。正常的精子形似蝌蚪，头部和尾部完整，而畸形的精子包括头部畸形、尾部畸形以及顶体缺陷等。精子畸形率高于20%的精液不得使用。检测精子畸形率用400～600倍的显微镜观察，每两周应检测一次。

2.4 精液稀释倍数

精液质量检测合格后，按照《种猪常温液》（GB23238-2009）中的要求，精液稀释后每个输精剂量中有效精子数地方品种需达到10亿个，其他品种需达到25亿个，输精量为地方品种40mL，其他品种需达到80mL的标准。例如，一头长白公猪采集精液量为250mL，精子活力为0.8，精子密度为2亿/mL，有效精子数为250mL×2亿/mL×0.8=400亿，可以确定输精份数为400亿÷25亿/份=16份，稀释过程中需要加入的稀释液量16份×80mL/份-250mL=1030mL。

2.5 精液稀释操作要点

精液稀释采用等温稀释，精液与稀释液温差不得超过1℃，应根据精液温度调节稀释液温度，不得反向操作。将稀释液沿杯壁缓慢加入到精液中，轻轻摇动或沿一个方向搅拌，混合均匀。高倍稀释时，先低倍稀释（1：1）～（1：2），30s后再加入余下的稀释液。

2.6 精液稀释后检查与分装

在精液稀释操作完成后，应在5min后进行精子活力检查，检查合格，进行精液分装。如果检查时发现精子活力下降，需要查明原因，采取改进措施。精液分装采用袋装、瓶装或管装，应选用对精子无毒害作用且灭菌的一次性塑料制品。地方品种以40mL、其他品种以80mL为单位，将精液分装至精液袋、瓶或管中，排出空气后密封。精液分装完成后，需要在包装瓶上粘贴标签，一个品种一个颜色便于区分，标注产品名称、生产单位、生产日期、批号、公猪品种、公猪耳号和精液保质期等信息。

3 生猪精液保存技术要点

精液的保存，要恒温、避光、防水、防震。自然状态下，精子的寿命只有几个小时。精液保存方法按温度分：常温保存，温度为15℃～25℃；低温保存，温度为0℃～5℃；冷冻保存，温度为-79℃～-196℃。精液保存原理：精子自身所产生的酸性物质和稀释液中的酸性物质使精液的pH降低到一定的水平（通常把pH调整到6.35左右），能够抑制精子的代谢，从而延长精子的存活时间，抗生素主要是抑制微生物的繁殖。生猪精液3～4h内使用，放在常温（20℃左右室温）保存即可。5h以上使用的精液，应置于22℃～25℃下1～2h后，放到4米深旱井中保存或17℃恒温冰箱内避光保存，也可用12～15层纱布或干毛巾包严直接放入17℃恒温箱（或旱井）内。保存时注意平放，增大接触面积。里面放温度计，随时监测温度变化。常温保存的精液一般能够存活7d，但一般保存期限为3d以内。保存的精液每隔4～8h摇动一次并记录，摇动时应轻缓均匀。每批精液应留样备查，同批号的精液在保质期内应抽样检查并记录。

4 生猪精液稀释保存注意事项

在生猪精液稀释保存过程中，为了避免精液受到外界因素的影响，需要重点关注以下注意事项：

4.1 严格控制温度

精液稀释与保存过程中，为防止冷应激或热应激，需要严格控制温度，不能使用过冷过热的容器，精液不能直接放置冰冷的桌面上。分装后的精液，不能立即放入17℃恒温冰箱内，应先留在冰箱外l～2h，以免因温度下降过快而刺激精子，造成死精增多。

4.2 在无尘环境中稀释

精液稀释要在无尘环境中进行，所有使用的设施要严格消毒，显微镜用专门的擦拭纸擦拭，载玻片和盖玻片清水清洗后烘干。

4.3 抗生素的添加

抗生素应在稀释精液时添加，太早易失去效果。

4.4 检测精子活力预热

输精前检测精子活力必须是精液在35℃～37℃的水浴锅内预热10min之后才能检测精子活力，预热不够，无法正确判断精子活力。

4.5 定期倒置容器

在精液保存过程中，精子可能沉淀到容器底部，因此需要每天倒置容器2次，保证精子均匀分布。

5 结语

总而言之，在生猪人工授精技术的应用过程中，精液稀释与保存的操作规范是影响生猪人工授精技术应用效果的关键因素。因此，工作人员必须严格执行相关规范，避免因操作不当而对精液品质造成不利影响，保证生猪人工授精技术的应用效果。