浅议薄层色谱及中药成方制剂的方法建立

刘冰，刘松雁， 高庆辉，张蕾，谢亮，吕洁

（1.石家庄市畜产品和兽药饲料质量检测中心 050000；2.新乐市农业农村局 050000；3.石家庄市动物疫病预防控制中心 050000）

薄层色谱法是指将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。 待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药物的鉴别、杂质检查或含量测定的方法，由于其快速、操作方便、设备简单、显色容易等特点而被广泛应用于中药成分分析中。

1 影响薄层色谱质量的主要因素

1.1 温度

展开缸空间分布的展开剂中各溶剂蒸汽的比例发生变化会影响待分离物质的展开，在湿度恒定时，一般在较高温度展开时的Rf 值高，反之则低，一般展开温度保持在15℃～25℃，实验时也必须在实验记录中体现温度。

1.2 吸附剂的活性和相对湿度的影响

吸附剂的活性一般由表面能和表面积决定，其中活泼型及游离型的硅醇基数目决定硅胶活性，硅醇基是亲水性基团，吸附水后形成水和硅醇基失去活性，所以在其他条件相同的情况下，薄层板的活性与实验环境的湿度有直接影响。 但有的样品分析和使用的展开剂对相对湿度有较宽的适应能力，在30%～70%都可以得到稳定的色谱。 因为地区气候影响，环境湿度可能会有所不同，所以记录实验中的相对湿度是很有必要的，一般控制在小于50%左右。 可以在实验室中加装空气加湿器或者除湿器来控制大环境中的湿度， 也可以转移到加入五氧化二磷或者硫酸的干燥器中控制湿度，也可以在放入变色硅胶的展开缸中控制，同时我们也能选择自动展开设备，如自动展开仪来控制相对湿度。

1.3 溶剂蒸汽影响

薄层色谱展开过程中，展开剂的蒸汽相、液相、固定相形成作用机制复杂的色谱过程， 如果处理不到位就会影响斑点分离度，或者展开过程中展开剂的组分被固定相分离产生第二前沿，或者平衡时间不够产生边缘效应， 这些都会影响薄层色谱的质量。

1.4 薄层板的质量

实验过程中目前一般都使用商品薄层板，以保证实验的可重复性，在建立方法时，也应该考虑不同品牌的薄层板质量和层析效果，以保证方法的通用性良好。 实验过程中也应该记录薄层板的厂家、型号、批号，以保证实验结果的可追溯和可重复。

1.5 点样技术

点样过程中点样体积过大会降低分离效率， 还会产生点样环形色谱效应，这种效应会对之后的线性展开造成不良影响，所以在配置样品溶液时应该选用对组分溶解度较小的溶剂， 且溶剂粘度不能太高，沸点要适中，沸点过低时会产生挥发造成样品溶液浓度改变，沸点过高又会导致样品溶液在原点残留，导致改变展开剂的选择性。实验中推荐使用溶剂甲醇和乙醇。 点样后应该除去原点残存溶剂，比如用吹风机吹干，而且要避免点样装置对薄层表面产生机械损伤。

1.6 样品预处理与供试品溶液的制备

供试品溶液的制备原则是在不牺牲图谱质量的前提下，操作越简单越好，减少不必要的回流和过柱。 如果预处理与制备不合理，会产生斑点不圆、不完整、不清晰、背景干扰严重或者斑点过少，失去图谱的特征性。

2 薄层色谱常见问题

2.1 边缘效应

边缘效应是指同一种化合物在同一块薄层板上用相同展开剂在同一展开室内展开后， 薄层板中部的斑点比薄层两侧边缘处的斑点Rf 值小的现象。为了克服这一问题，可以增加展开室中溶剂蒸汽饱和度， 选择单一展开剂或共沸展开剂代替混合展开剂， 采用窄薄的薄层板， 或者在薄层板两侧各去除5mm 的吸附剂，通过这些方式可以减小或者消除边缘效应。

2.2 拖尾

拖尾现象是指点样虽在同一垂直线而圆心未重合， 在圆形或者椭圆形斑点的后方呈现拖尾，严重时呈现倒火焰状。 实验中通过控制点样量，展开剂pH 值，吸附剂pH 值，去除痕量金属离子可以避免发生拖尾现象。

2.3 斑点念珠状

斑点念珠状是指化合物的斑点之间距离小， 斑点相互重叠或者连接的状态。 产生此现象的原因是单一的化合物产生了分解，或者形成了络合物，以及被层析样品中组分过多导致在薄层板上无法分开，或在原点点样时形成复斑。

2.4 Rf 值不稳定

层析时温度变化，层析时间不恒定，吸附剂规格不统一，薄层板、展开剂厂家型号不同，展开剂反复使用这些因素都会产生Rf 值不稳定的现象。

2.5 斑点异形

斑点异形产生是因为吸附剂粒度活度偏低， 薄层板厚度不均匀，展开时层析缸被挪动等因素。

3 中药成方制剂的方法建立

在方法建立时，应充分参考药材和饮片的中药鉴别方法，即与药材饮片的专属鉴别方法保持一致。 如果有其他成分干扰或者制剂的提取方法不同，不能采用与该药材相同的鉴别方法时，可采用其他鉴别方法。 如处方相同，剂型不同的制剂，其鉴别方法应保持一致。 并且尽可能采用一个供试品溶液多项多维鉴别使用的薄层色谱法，达到节约资源、保护环境、简便实用的目的。

方法建立过程中涉及到供试品溶液的制备， 应该首先除去干扰物，并且方法尽量简单便捷，采用提取、纯化选择，如回流超声提取的方式，还要对溶剂、时间、酸碱处理、溶剂萃取、柱层析优化等。 其中柱层析跟薄层色谱层析类似，色谱柱的品牌填料、装填等都会影响薄层色谱的结果。 对对照物的选择应该尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照的方式，如对照品不易获得时，可以采用对照提取物或对照药材为对照，遇到对照药材较多斑点有干扰时， 应该选择专属性对照品或者对照药材某个具有鉴别特征的斑点。 薄层板应对吸附剂进行比较，最终选择聚酰胺板、硅胶G 板或者硅胶GF254 板来进行层析。建立方法时要对三个以上的展开系统进行比较， 对显色条件进行考察，比如选择日光、紫外灯或者选用喷显色剂进行显色。 点样过程中应选择适宜的点样量，点样量过小会造成斑点不显色，过大则会产生拖尾等影响色谱质量的情况。 做成方制剂的薄层色谱鉴别是应做阴性空白实验，以证明其他药味没有干扰。 建立方法中应考察不同品牌薄层板的层板温度等耐用性参数的考察。