泸县204例珠蛋白生成障碍性贫血患者基因型及血液学指标分析

胡高镜， 温先勇

1.四川省泸州市泸县人民医院检验科，四川泸州 646100；2.西南医科大学附属医院检验科，四川泸州 646100

珠蛋白生成障碍性贫血属于单基因遗传性贫血疾病，以珠蛋白合成障碍为特点，常见类型为α-珠蛋白生成障碍性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血。珠蛋白生成障碍性贫血目前还缺乏有效的治疗手段，携带者检查和婚前、产前诊断是减少受累患儿出生、保障优生优育的关键手段。确诊珠蛋白生成障碍性贫血的可靠依据是基因诊断，但其技术性强、耗时长、费用高，因此推广受到一定程度的限制，而经济、便捷、高效的血液学指标检测是基层医院初步筛查珠蛋白生成障碍性贫血的主要方法之一，在临床工作中得到广泛应用。本文就泸县地区204例珠蛋白生成障碍性贫血患者基因型及血液学指标进行研究，分析该地区α、β-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型及血液学特征，为珠蛋白生成障碍性贫血诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 2017年12月至2021年1月泸县人民医院共向四川金域医学检验中心送检来自泸县本地珠蛋白生成障碍性贫血疑似标本817例，选择经临床证实的珠蛋白生成障碍性贫血患者204例作为珠蛋白生成障碍性贫血组，其中男81例、女123例，年龄0～78岁、平均(20.61±4.26)岁，均符合2007年《血液病诊断及疗效标准》中的珠蛋白生成障碍性贫血诊断标准[1]。选取同期临床确诊的缺铁性贫血患者30例作为缺铁性贫血组，其中男12例、女18例，年龄0～68岁、平均(25.33±3.94)岁，均符合2007年《血液病诊断及疗效标准》中的缺铁性贫血诊断标准[1]。选取同期健康体检者30例作为健康对照组，其中男12例、女18例，年龄0～70岁，平均(25.83±4.17)岁，排除贫血症状、血液疾病、出血性疾病及肝肾疾病。3组研究对象性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1珠蛋白生成障碍性贫血基因检测 采用荧光PCR熔解曲线法对患者α、β-珠蛋白生成障碍性贫血基因进行检测。检测3种常见缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因：--SEA、-α3.7、-α4.2；3种非缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因：369C>G，377T>C，427T>C；17种β-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型：CD17(A→T)、CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CD31(-C)、CD43(G→T)、CD71-72(+A)、CD14-15(+G)、CD27-28(+C)、IVS-Ⅰ-1(G→T)、IVS-Ⅰ-5(G→C)、IntM、βEM、CapM(-AAAC)。

1.2.1.1DNA提取及加样 抽取珠蛋白生成障碍性贫血患者静脉血约2 mL于EDTA抗凝管中，采用磁珠法在赛默飞715型仪(美国)上提取DNA，试剂由亚能生物技术(深圳)有限公司提供。提取的DNA样本的吸光度比值(A260/A280)在1.6～2.0视为合格。向PCR反应管(内含20 μL反应液)中加入模板DNA 5 μL，反应总体系为25 μL。

1.2.1.2基因扩增及结果判断 按照基因检测试剂盒说明书设定PCR扩增和熔解曲线分析程序，在东胜龙ETC811荧光定量扩增仪(国产)进行操作，再进行结果分析。

1.2.2血液学指标检测 3个观察组对象分别于清晨采集2 mL EDTA-K2抗凝静脉血，2 h之内由熟练技师按SOP文件，在Sysmex XS-500i全自动血细胞分析仪上完成检测(仪器、试剂均由日本希森美康公司提供)，仪器自动测定、计算出红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、血细胞比容(Hct)6项血液学参数。

2 结 果

2.1珠蛋白生成障碍性贫血患者基因分型检测结果 204例确诊患者检出珠蛋白生成障碍性贫血基因202例，检出率为99.02%。63例α-珠蛋白生成障碍性贫血(31.19%)中检出基因型9种，见表1。构成比最高的前3种基因型为--SEA/αα(杂合缺失)、--SEA/-α3.7(复合杂合缺失)、αα/-α3.7(杂合缺失)，分别占39.68%、19.05%、19.05%。137例β-珠蛋白生成障碍性贫血(67.82%)检出基因型16种，见表2。构成比最高的前3种基因型为CD17(A→T)杂合突变(37.96%)、IVS-Ⅱ-654(C→T)杂合突变(26.28%)、CD41-42(-TCTT)杂合突变(18.98%)。另外，检出2例α-珠蛋白生成障碍性贫血合并β-珠蛋白生成障碍性贫血：αα/-α4.2(杂合缺失)合并CD17(A→T)/CD26(G→A)双重杂合突变、--SEA/αα(杂合缺失)合并CD41-42(-TCTT)杂合突变。

表1 63例α-珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测情况

表2 137例β-珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测情况

续表2 137例β-珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测情况

2.2各组血液学检测结果分析 与健康对照组比较，珠蛋白生成障碍性贫血组Hb、MCV、MCH、MCHC、Hct均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；珠蛋白生成障碍性贫血组的Hb、MCV、MCH、Hct与缺铁性贫血组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，MCHC差异无统计学意义(P>0.05)；RBC在3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 3组血液学检测结果

3 讨 论

在我国，长江以南的云南、贵州、四川等地区是珠蛋白生成障碍性贫血高发区，而泸县地处川滇黔渝结合部，人口数量和迁移率大，遗传背景复杂，使得珠蛋白生成障碍性贫血成为泸县重大社会公共健康问题之一。了解珠蛋白生成障碍性贫血患者基因型分布特点、血液学特征对珠蛋白生成障碍性贫血诊断具有参考价值，有助于针对性监测珠蛋白生成障碍性贫血患者的生长、发育，以提供相应的治疗、预后指导及建议合理的婚配，可防止将其异常基因遗传给下一代[2]。

α-珠蛋白生成障碍性贫血主要是基因缺失所致，少部分是点突变。本文204例珠蛋白生成障碍性贫血患者中，检出9种α-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型，前5位分别是--SEA/αα(39.68%)、--SEA/-α3.7(19.05%)、αα/-α3.7(19.05%)、427T>C(4.76%)、--SEA/-α4.2(4.76%),最常见的突变类型是--SEA，这与中山市[3]、武汉市[4]等地的报道一致。另外，与泸州地区其他相关报道[5-6]相比，点突变427T>C所占比例偏高，样本量较小可能是造成此现象的主要原因。目前已发现β-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型多达360种以上，且分布具有种族特异性和区域特异性。在云南、贵州及四川3省中，CD17(A→T)基因突变占首位；在香港、台湾，IVS-Ⅱ-654(C→T)基因突变构成比最高；在广东顺德地区、广西柳州市，CD41-42(-TCTT)基因突变为最常见类型；在广东、海南、四川等地，IVS-Ⅱ-654(C→T)基因突变构成比位居CD41-42(-TCTT)突变之后[7]。本试验检出β-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型16种，其中CD17(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD41-42(-TCTT)杂合突变构成比占前3位，分别为37.96%、26.28%、18.98%。这与上述四川地区报道大体一致，与广东、海南等地区报道有差异。

此外，本文204例珠蛋白生成障碍性贫血患者中，尚有2例珠蛋白生成障碍性贫血突变基因未在本试验检测范围内，提示珠蛋白生成障碍性贫血基因变异多样，极具遗传异质性，基因检测虽是珠蛋白生成障碍性贫血诊断金标准[8]，但对某些罕见突变存在一定漏检风险。

对RBC、Hb、MCV、MCH、RDW等血液学指标及血红蛋白电泳、红细胞渗透脆性实验等单项或多项联合筛查珠蛋白生成障碍性贫血，国内外学者进行了诸多研究，结果不尽相同。有研究表明，血液学指标在珠蛋白生成障碍性贫血诊断与鉴别诊断中具有突出的应用价值[9]。本研究结果显示，珠蛋白生成障碍性贫血患者Hb、MCV、MCH、MCHC、Hct水平明显降低，与健康人群差异有统计学意义(P<0.05)，可为珠蛋白生成障碍性贫血诊断提供依据。从病理角度分析，珠蛋白生成障碍性贫血患者Hb、Hct水平降低符合贫血的血液学特点，而且珠蛋白生成障碍性贫血属于小细胞低色素性贫血，因此在血液学指标上表现为MCV、MCH、MCHC水平降低。有研究报道，珠蛋白生成障碍性贫血患者血液学指标中以MCV水平降低为主要特征,MCV是快速筛查珠蛋白生成障碍性贫血的一项重要指标[10]。珠蛋白生成障碍性贫血患者RBC水平与健康人群差异无统计学意义(P>0.05)，原因可能是由于骨髓代偿作用，中轻度珠蛋白生成障碍性贫血患者RBC水平并不会出现显著变化[11]。临床诊断中，珠蛋白生成障碍性贫血易和其他小细胞低色素性贫血相混淆，例如缺铁性贫血，二者的致病机制、治疗措施各不相同，比如，某些珠蛋白生成障碍性贫血患者因溶血、反复输血、骨髓无效造血导致铁过载，常需采取去铁治疗，与缺铁性贫血患者以补充铁剂作为主要治疗手段完全相反。因此珠蛋白生成障碍性贫血的鉴别诊断在贫血疾病的医疗工作中尤为重要。本研究发现，与缺铁性贫血患者相比，珠蛋白生成障碍性贫血患者Hb、MCV、MCH、Hct水平较低，差异有统计学意义(P<0.05)，这与其他相关研究结果[12]相同。这些指标可作为珠蛋白生成障碍性贫血鉴别诊断的可靠筛查指标，为临床珠蛋白生成障碍性贫血的筛查提供依据。