亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性对妊娠结局的影响

林金友，王纯叶

（惠州市第二妇幼保健院江北分院 妇产科，广东 惠州 516000）

新生儿出生缺陷一直是世界性的医学难题。根据中国疾病预防控制中心的数据资料统计显示，我国新生儿出生缺陷率较高，每年有80 万～120 万名出生缺陷儿［1］。从出生缺陷的类型来看，主要包括神经管畸形、先天性心脏病、唇腭裂、尿道下裂等，严重威胁新生儿的健康乃至生命安全［2］。至今，新生儿出生缺陷的发病机制并不明确，病因十分复杂，其中遗传、环境是两个被公认的因素，而遗传因素中又以母体叶酸缺乏最为常见［3］。对于绝大部分孕妇而言，叶酸的需求量比较大，服用叶酸后能够在很大程度上预防流产、孕期或产后抑郁［4］。我国自全面二胎政策实施以来，欲生二胎的高龄妇女人数增加，该人群妊高征、唐氏综合征发病率较高，针对这部分人群开展叶酸基因检测有重要意义。本研究基于惠州地区MTHFR 基因突变的高风险人群小样本给药，探讨高风险人群活性叶酸的个体化给药，以实现优生优育的目标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料从2020 年1 月至10 月期间我院收治的有流产史或畸形胎儿史妇女中，筛选出MTHFR 6771298 基因突变的高风险人群70 名作为研究对象，经医院伦理委员会批准。经随机数字表法分为对照组和实验组，每组各35 例。对照组：年龄35～40 岁，平均年龄（37.41±1.25）岁；生育情况，二胎28 例，三胎5 例，四胎及以上2 例。实验组：年龄35～40岁，平均年龄（37.03±1.20）岁；生育情况，二胎25 例，三胎7 例，四胎及以上3 例。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 入选标准纳入标准：①年龄35～40 岁之间；②有流产史或有畸形胎儿史；③精神和认知正常，可配合完成基本调查研究；④自愿参与，签订基因检测知情同意书。排除标准：①内分泌功能异常；②合并严重心肝肾等器质性病变；③伴有严重妊娠期并发症（如高血糖、高血压等）；④临床资料不完整。

1.3 方法①个体化给药：对照组给予叶酸（扬州制药有限公司，国药准字H20065658）800 μg／日，实验组给予活性三代叶酸（西安浩天生物工程有限公司，国药准字H20127156）800 μg／日。②检测方法：标本采集：于清晨空腹状态下，采集孕妇静脉血5 mL，经柱式抽提试剂盒（德国罗氏公司，批号23655500）进行DNA 样本提取。检测操作：经紫外光分光仪对样本DNA 的纯度（A260／A280≥1.7）进行检测，随后采用荧光定量PCR 对MTHFR 基因多态性进行检测，再进行稀释处理，使稀释之后的浓度在5～10 ng／μL 范围内。检测室：于每个反应中设置6 种阳性样本，同时设置1 种阴性标准品，控制反应体系总体积，使其为6 μL。反应条件：温度为95 ℃，时间为10 min。激活荧光基团，95 ℃15 s、60 ℃40 s 为一个循环，扩增40 个循环，然后冷却处理，时间为1 min。反应结束后，采用ABI 公司生产的荧光定量PCR 仪读取样品孔内终点荧光，并应用专业分析软件对样本基因分型进行分析。

1.4 观察指标比较两组C677T 位点的基因分布情况和妊娠结局。①C677T 位点的基因分布包括CC、CT、TT 等位点。②妊娠结局主要为不良妊娠结局，如流产、孕妇妊高征、抑郁以及胎儿畸形。

1.5 统计学处理使用SPSS 21.0 统计软件处理数据。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以表示，采用t检验。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组C677T 位点的基因分布比较C677T 位点的基因分布中，实验组的CC 占比高于对照组，CT 占比低于对照组，差异有统计学意义（P ＜0.05）；两组的TT 占比比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表1。

表1 两组C677T 位点的基因分布比较 ［n（%）］

2.2 两组的不良妊娠结局比较实验组的流产、妊高征、抑郁、胎儿畸形发生率均显著低于对照组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 两组的不良妊娠结局发生率比较 ［n（%）］

3 讨论

我国是一个出生缺陷频发的国家，高出生缺陷率严重影响了人口质量，与优生优育的目标不相符。出生缺陷的发生原因十分复杂，母体叶酸缺乏是其中重要原因之一［5］。食物中的叶酸易被紫外线破坏，另外食物在烹饪时叶酸损失50%～95%。叶酸缺乏症在全世界被公认为是一个保健问题。孕妇处于特殊生理时期，叶酸需求量高于正常人。据相关研究［6］，叶酸本身无治疗作用，孕妇服用后，在MTHFR 的作用下，可还原成5－甲基四氢叶酸，从而实现对同型半胱氨酸（HCY）的调节，最终发挥保护胎儿神经管发育以及抑制流产、抑郁的作用。

目前，MTHFR 基因多态性与妊娠结局的研究并不少见。孙庆梅等［7］探讨MTHFR 基因与不良妊娠结局的相关性，结果显示，MTHFR－677 TT 和MTRR－66 AG 是不良妊娠结局发生的独立危险因素。梁玲芝等［8］的研究显示，育龄妇女携带MTHFR C677T 位点的T 等位基因及CT、TT 和CT ＋TT 基因型可能会增加不良妊娠结局风险。但是相关报道多集中在既往存在不良妊娠结局孕妇和无不良妊娠结局孕妇，且年龄并未限定。本研究建立在既往研究的基础上，选取的孕妇年龄均在35～40 岁之间，这部分孕妇均与二胎政策的开放有关，有生育史，且既往均有不良妊娠结局，并针对性地给予叶酸，这就有别于既往相关报道。本研究结果显示，C677T 位点的基因分布中，实验组的CC 占比高于对照组，CT 占比低于对照组（P ＜0.05），提示MTHFR 基因的多态性和不良妊娠结局密切相关。本研究进一步分析两组的不良妊娠结局，结果显示，实验组的流产、妊高征、抑郁、胎儿畸形发生率均显著低于对照组（P＜0.05），表明MTHFR 基因的多态性的确会影响妊娠结局，其突变可能增加不良妊娠结局。

综上所述，MTHFR 基因多态性会对妊娠结局产生影响，必须重视孕期叶酸的补给，尽可能补充三代叶酸，以减少不良妊娠结局的发生，提高出生人口质量，实现优生优育的目标。