白术调节结肠黑变病黏膜状态的实验观察

羊燕群 王子威 郑泽娜 张静 张均倡 田广俊

[摘要]目的观察白术对黑变病结肠黏膜的治疗作用。方法将60只实验大鼠分为正常对照组、模型組、白术低剂量组、白术中剂量组、白术高剂量组，每组各12只，给予相应生大黄液及白术液，观察各组大鼠结肠黏膜一般情况及病理组织学改变。结果随着白术剂量升高，肉眼可见结肠黏膜着色呈逐渐变浅趋势，白术高剂量组与模型组差异有统计学意义（ P <0.05），显微镜下见黏膜层棕褐色颗粒状物质沉积亦随着白术剂量升高而相应变化。结论白术可改善结肠黑变病黏膜的黑变程度，减少结肠黏膜蒽醌类物质沉积，改善程度与白术液剂量呈正相关。

[关键词]白术;结肠黑变病;结肠黏膜;病理组织学改变

[中图分类号] R285  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2021）23-0027-04

Experimental observation of Baizhu regulating mucosal state of melanosis coli

YANGYanqun1 WANGZiwei1 ZHENGZe'na1 ZHANGJing1 ZHANGJunchang1 TIANGuangjun

1. Department of Traditional Chinese Medicine， Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Guangdong， Shenzhen 518101， China;2. Zhuhai Branch of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guangdong， Zhuhai 519015， China

[Abstract] Objective To observe the therapeutic effect of Baizhu on mucosa of patients with melanosis coli （MC）. Methods The 60 experimental rats were divided into the normal control group， model group， Baizhu low- dose group， Baizhu medium-dose group and Baizhu high-dose group，12 in each group. The corresponding rhubarb root and Dahuang liquid and Baizhu liquid were given， and the general conditions and histopathological changes of colon mucosa in each group were observed. Results With the increase of the dosage of Baizhu， the staining of colonic mucosa gradually became lighter with naked eyes， and there was a significant difference between the Baizhu high-dose group and the model group （P <0.05）. Microscopically， the deposition of brown granular substances in mucosal layer also changed correspondingly with the increase of the dosage of Baizhu. Conclusion Baizhu can improve the degree of melanosis of colon mucosa and reduce the deposition of anthraquinone in colon mucosa， and the improvement degree is positively correlated with the dose of Baizhu solution.

[Key words] Baizhu; Melanosis coli; Colon mucosa; Histopathological changes

随着现代生活压力增大及饮食结构的改变，慢性便秘发病率逐年提高。使用蒽醌类泻剂导致的结肠黑变病（melanosiscoli， MC）随着结肠镜检查的普及，其检出率也逐年升高，且往往伴有息肉、慢性结肠炎，甚至与肿瘤的发生也有相关性[1]。结肠黑变病伴有的腹胀、便秘、排便无力的症状，在中医理论中认为是“虎狼之剂”误下之后，脾虚气弱、伤津耗液之症，治疗当以健脾益气、补液生津为治则。中药白术具有健脾、益气、养阴的作用，是 meta 分析出来最常用的治疗便秘的中药之一[2]。研究显示白术或白术提取物对修复肠道黏膜、恢复肠道动力有确切治疗效果[3]。本研究旨在明确中药白术对结肠黑变病的治疗作用，并初探其对结肠黑变病治疗作用的改善位点。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1中药制备项目所需白术（广州至信，批号：190810）、生大黄（南城建洪，批号：1907004）一次性购齐，所有药材品质符合《中华人民共和国药典》2015年版标准。

白术水煎液：取生白术饮片用蒸馏水浸泡0.5 h 后高火煎煮20 min，倒出煎液，12层纱布过滤，重复煎煮2次，合并滤液，浓缩为1 g/ml 浓度药液。

生大黄液：取生大黄饮片经70℃热蒸馏水浸泡，过滤，提取为1 g/ml 浓度生大黄液。

以上药液均4℃保存，当天使用药液加热后降至40℃左右使用。

1.1.2实验动物8周龄 SD 大鼠180～220 g，雌雄各半，共60只，广东省实验动物中心提供（许可证号： SCXK 粤2018-0002）。

1.1.3主要设备显微镜（日本奥林巴斯 BX51T- PHD-J11），石蜡切片机（德国莱卡 RM2015）。  1.1.4主要试剂苏木精-伊红染色液。

1.2方法

1.2.1分组与给药将60只8周龄 SD 大鼠随机分为五组：正常对照组、模型组、中药组（低、中、高剂量组），每组各12只，按组别给予不同干预治疗措施，实验周期为8周。正常对照组：自由进食进水，对照性灌胃蒸馏水1.5 ml/100 g 体重;模型组：予每日灌胃大黄液1.5 ml/100 g 体重;中药组在造模基础上按照临床分低、中、高剂量组，分别予0.3、0.6、1.2 g/100 g 体重白术水煎液灌胃。

1.2.2组织标本采集在实验最后一天麻醉处死所有大鼠，将结肠标本用冰生理盐水清洗后肠黏膜层向上，平铺于试验台上，肉眼观察盲肠近段结肠、中段结肠、远段结肠及回盲部并记录结肠黏膜的黑变程度并评分。用冰生理盐水反复冲洗肠内容物后在大鼠盲肠端后结肠连续截取0.5 cm 结肠组织两段，置于甲醛固定液中固定，继续依次截取相同结肠组织置于液氮中保存待用。

1.3观察指标

1.3.1肉眼观察结肠黏膜黑变病情况观察标准参照文献[4]进行肉眼下大体评分，颜色：浅红色0分，浅褐色1分，暗褐色2分，深褐色3分;范围：无黑变0分，盲肠1分，盲肠和部分近段结肠2分，全结肠3分;组织学大体评分为颜色评分与范围评分之和。

1.3.2光镜下观察结肠黏膜黑变病情况通过 HE 染色光镜下观察结肠组织病理学变化，比较各组大鼠结肠黑变病黏膜状态。

1.4统计学方法

所有数据用 SPSS 14.0统计学软件分析，所有实验数据用（x ±s）表示，各组间比较采用独立样本 t 检验，两组变量相关性分析用 Pearson 相关性分析，P <0.05为差异有统计学意义。

2結果

2.1肉眼观察结肠黏膜黑变病情况

正常对照组：结肠黏膜侧呈肉红色，无黑变现象，整体光滑，结构完整。模型组：盲肠及近端结肠可见条索状黑色病变，向结肠远端逐渐变浅至不能看到。白术低、中、高剂量组：盲肠及近端结肠黏膜可见条索状黑色病变，向结肠远端逐渐变浅至不能看到。随着白术剂量升高，结肠黏膜着色呈逐渐变浅趋势，黑变病评分与白术给药剂量呈负相关（ P <0.05）。见表1及图1。

2.2病理组织学观察

病理组织学观察见图2。

3讨论

MC 是结肠镜下检查发现结肠黏膜呈暗褐色花斑样改变的一种病变。其发病原因和慢性便秘患者长期服用含蒽醌类成分的泻剂有密切关系[5-6]。蒽醌苷类药物具有细胞毒性作用，可诱导结肠上皮细胞凋亡，产生的凋亡小体被单核巨噬细胞吞噬后，通过基底膜小孔转移到结肠黏膜固有层巨噬细胞的溶酶体内，由凋亡小体转化为褐脂素或其他色素;大量巨噬细胞沉积在结肠黏膜固有层间质内，即表现为色素沉着[7]。市面上常见通便药如大黄、芦荟[8]、番泻叶等中药含有蒽醌类物质成分，长期使用均有明确的导致 MC 发生的副作用[9-10]。有诸多文献证据显示 MC 与结肠息肉、间质瘤、炎症性疾病有直接关系，如可能影响 PI3K 等蛋白的表达，通过 Ras 信号通路、TNF 信号通路等调控结肠上皮细胞的增殖与凋亡，推动肿瘤细胞的侵袭转移;诱导原癌基因 c-myc表达上调，增加结肠、直肠癌症发生几率等[11]。MC 在60岁以上老人或者年轻女性中的发病率较其他人群高[12-13]。而这部分人群也是最容易出现慢性便秘并依赖口服蒽醌类泻剂通便的人群。停止服用蒽醌类泻剂后大部分黑变结肠可在一定时间内逆转，但是其排便功能却往往不能同步恢复，多数患者发展为进一步的腹胀、便秘和排便困难，甚至出现严重的肠动力障碍[14]。除了停止蒽醌类泻剂的服用，口服临床常用的通便药物改善症状，目前西医内外科对 MC 及其伴随的排便功能障碍尚无确定的治疗方案[15]。

MC 的临床症状主要是便秘，大便干结或不干结，排便费力，或有腹胀、腹痛、便血等非特异性症状，属于中医“便秘”“腹胀”等范畴。有 meta 分析认为中医药治疗结肠黑变病在缓解症状、改善肠黏膜病理状态方面疗效明确，与西医相比有一定优势[16]。夏婉等[17]认为其病机为大肠传导功能失司，与脾胃及肾关系密切。张喜珍等[18]认为 MC 病机主要为气阴两虚，采用益气养阴法口服加保留灌肠治疗结肠黑变病有效。栗宁等[19]认为 MC 需从“血瘀”论治，治以活血化瘀，辅以益气养血。付敏军等[20]认为 MC 病位在肠，病机主要为肠燥津亏、脾胃虚弱及肾气不足，治以滋阴润肠、补脾益肾。丁泽林等[21]认为本病发病主要与肝、脾相关，临床治疗方面重在疏肝理气、健运脾胃，佐以滋阴润肠、活血化瘀之法。不论哪种病机理论，MC 的脏腑归经总不离脾脏，病机都有“脾虚”参与其中。

白术性温，味苦、甘，归脾、胃经，主健脾益气。清代陈修园《神农本草经读》认为：“白术，此为脾之正药。”清代张志聪《本经崇原》认为：“白术气味甘温，质多脂液，乃调和脾土之药也。”临床应用中，白术燥而作润、温而能和，是治疗便秘和 MC 的要药。现代药理研究发现白术可通过调节水通道蛋白增加大便含水量从而提高结肠炭末推进率[22]。并能改善脾虚证大鼠肠道菌群，有利于肠道菌群的平衡[23]。白术还能升高“泻剂结肠”大鼠结肠组织中 c-Kit 含量而恢复其排便功能[24]。白术提取物还能多靶点修复肠道黏膜[25]。在 meta 分析中，白术是排第一位的治疗结肠黑变病的中药。

本实验观察到白术液高剂量时大鼠结肠黏膜的棕褐色沉积物明显减少，结肠黑变病评分随着白术液剂量的升高而降低，显示白术对黑变病结肠黏膜的改善修复程度与白术液的剂量呈现正性量效关系。因此，白术作为治疗慢性便秘中的主药，也是便秘诸型均可用到的“百搭”中药，对结肠黑变病的黏膜状态改善是有明确治疗作用的。但是其有效性是否会继续随用量升高而持续升高，其最佳使用剂量是多少，是否在随着剂量提高过程中，出现其他毒副作用，且其改善 MC 的作用机制与上皮细胞修复、神经细胞修复还是肠道菌群改善有关，尚需进一步实验研究来逐步明确。

本实验与本研究团队既往的实验研究体会及参考已有的结肠黑变病相关研究文献资料[26-27]，认为目前结肠黑变病模型动物可选择豚鼠或大鼠。相对于豚鼠，大鼠的价格便宜，实验造模过程中死亡率低，是它的优势。但是大鼠结肠黑变病模型相对豚鼠模型，病变结肠颜色浅，病变肠段短，结肠黑变病评分低。因此在选择大鼠作为模型动物时，需要设计更长造模时间和更高剂量的蒽醌类药物作为造模因素以确保实验效果。

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（收稿日期：2021-06-15）