超声造影定量参数联合人类表皮生长因子受体-2、原癌基因对肿块型乳腺癌的诊断价值

乐国彪 周学刚 张 怡 谢 科 邓春燕

乳腺癌是全世界范围内女性最常见的癌症，患病风险和死亡率较高，起病相对较隐匿，多于无意时发现肿块就诊，与乳腺其他肿块病变临床表现相似，鉴别较困难。新生血管在乳腺癌的发生、发展（包括生长和转移）中扮演着重要的角色，而超声造影可观察乳腺癌病变内的微循环情况，定量评价组织新生微小血管的分布与形态，可提高乳腺癌术前和非侵袭性诊断的准确性［1］。临床常将蛋白表达作为乳腺癌靶向治疗的参考依据，其中人类表皮生长因子受体-2（HER-2）及原癌基因（CerbB-2）表达的乳腺癌患者对常规化疗药物治疗预后差且不敏感，但对于相应的靶向药物具有较好敏感性［2］。但免疫组织化学检查在标本处理过程中蛋白容易变形、破坏，有产生假阴性和假阳性的风险。本研究旨在探讨超声造影定量参数联合HER-2、CerbB-2对肿块型乳腺癌的诊断价值，以期为临床早期诊断肿块型乳腺癌提供依据。

资料与方法

一、研究对象

选取2017年7月至2020年10月在我院经术后病理确诊的肿块型乳腺癌患者61例（恶性组）和乳腺良性肿瘤患者73例（良性组），均为女性、单发病灶。恶性组年龄29～73岁，平均（51.15±6.07）岁，最大径为0.74～4.86 cm，平均（3.12±0.35）cm；包括25例浸润性导管癌、12例乳头状癌、11例导管原位癌、6例小叶原位癌、4例髓样癌、3例黏液癌。良性组年龄25～67岁，平均（47.26±5.69）岁，最大径为0.62～4.60 cm，平均（2.91±0.33）cm；包括36例乳腺纤维瘤、14例乳腺腺病、12例乳腺导管内乳头状瘤、6例慢性炎性肿块、5例乳腺积乳囊肿。纳入标准：①符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2019年版）》中肿块型乳腺癌的诊断标准［3］；②BI-RADS分类≥3类；③在我院完成后续治疗且临床资料完整者。排除标准：①行乳腺手术、激素治疗者；②对超声造影剂不耐受者；③未经术后病理证实或临床资料不完整者；④合并其他乳腺弥漫性病变者；⑤就诊前已行手术、化疗或药物等治疗者；⑥伴有严重心、肝、肾功能障碍者。本研究经我院医学伦理委员会批准，超声造影检查前患者及其家属均签署知情同意书。

二、仪器与方法

1.超声造影检查：使用GE Logiq E 9彩色多普勒超声诊断仪，ML6-15探头，频率9～15 MHz；配备超声造影成像软件。先行常规超声检查观察双侧乳腺情况，确定乳腺病变位置以获得较好的二维图像，选取最佳切面切入造影状态，经肘静脉快速推注造影剂声诺维（意大利Bracco公司）2.4 ml后以5.0 ml 0.9%生理盐水冲洗，观察乳腺病灶动态灌注过程并记录。在乳腺病灶达增强最高峰时选取感兴趣区（直径4 mm，面积8 mm2），病灶内部及边缘各选取5点作为感兴趣区，记录总共10个点的感兴趣区测量值，取其均值；开启QLAB分析软件自动分析获取时间-强度曲线（TIC），进行曲线拟合得到感兴趣区血流参数：峰值强度（PI）、上升支斜率（WIS）、达峰时间（TTP）、曲线下面积（AUC1）和梯度（Grad）。以上操作均由同一具有10年以上乳腺超声工作经验的超声医师进行。

2.免疫组织化学检查：所有患者手术切除标本均行常规甲醛固定和石蜡包埋处理，标本切片厚度为0.4μm，常规进行免疫组化染色（SP法）测定乳腺病灶组织中HER-2和CerbB-2的表达情况。

三、统计学处理

应用SPSS 22.0统计软件，计量资料以±s表示，组间比较行t检验；计数资料以例或率表示，组间比较行χ2检验。超声造影定量参数与HER-2、CerbB-2表达的相关性采用Spearman秩相关分析法。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析超声造影定量参数与HER-2、CerbB-2单独及联合应用对肿块型乳腺癌的诊断效能。曲线下面积比较行Z检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、恶性组与良性组超声造影定量参数比较

恶性组与良性组PI、TTP、AUC1和Grad比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；WIS两组比较差异无统计学意义。见表1和图1。

表1 恶性组与良性组超声造影定量参数比较（±s）

表1 恶性组与良性组超声造影定量参数比较（±s）

PI：峰值强度；WIS：上升支斜率；TTP：达峰时间；AUC1：曲线下面积；Grad：梯度

WIS（s-1）7.62±3.347.36±3.210.4580.647 Grad 1.06±0.440.62±0.296.6900.000组别恶性组良性组t值P值PI 8.35±2.964.48±2.078.6040.000 TTP（s）18.06±7.6435.62±10.8210.9740.000 AUC1（dB/s）413.27±186.39254.36±104.085.9310.000

图1 两组超声造影TIC图

二、恶性组与良性组HER-2、CerbB-2表达情况比较

恶性组HER-2、CerbB-2阳性表达率分别为80.33%、77.05%，均较良性组（15.07%、16.44%）高，差异均有统计学意义（均P=0.000）。见表2和图2，3。

表2 恶性组与良性组HER-2、CerbB-2表达情况比较 例

图2 肿块型乳腺癌组织中HER-2、CerbB-2的表达情况（SP法染色，×200）

图3 乳腺纤维腺瘤组织中HER-2、CerbB-2的表达情况（SP法染色，×200）

三、恶性组超声造影定量参数与HER-2、CerbB-2表达的相关性分析

恶性组PI、TTP、AUC1和Grad均与HER-2表达呈正相关（均P＜0.05），TTP与CerbB-2表达呈正相关（P=0.000）；其余超声造影定量参数与HER-2、CerbB-2表达无相关性。见表3。

表3 恶性组超声造影定量参数与HER-2、CerbB-2表达的相关性分析

四、超声造影定量参数、HER-2、CerbB-2单独及联合诊断肿块型乳腺癌的效能比较

超声造影定量参数联合HER-2、CerbB-2诊断肿块型乳腺癌的曲线下面积、敏感性、特异性、准确率均优于超声造影定量参数或HER-2、CerbB-2单独应用，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表4和图4。

图4 超声造影定量参数、HER-2、CerbB-2单独及联合诊断肿块型乳腺癌的ROC曲线图

表4 超声造影定量参数、HER-2、CerbB-2单独及联合诊断肿块型乳腺癌的效能比较

讨论

研究［4-5］表明，超声造影可鉴别诊断乳腺良恶性病变，乳腺癌多表现为异质性和向心性增强，而乳腺良性肿瘤多表现为均匀性和离心性强化；在超声造影定量分析中，乳腺癌较乳腺良性肿瘤表现为更高、更快的影像增强，其达到峰值的时间更短。超声造影TIC可反映超声造影剂进入病灶后的速度和数量随时间变化的关系，从而评价病灶内的血流灌注。研究［2］表明，乳腺癌组织中HER-2及CerbB-2的表达情况是乳腺癌靶向和内分泌治疗的重要选择依据。本研究旨在探讨超声造影定量参数联合HER-2、CerbB-2对肿块型乳腺癌诊断价值。

本研究结果显示，肿块型乳腺癌超声造影定量参数PI、TTP和Grad均高于乳腺良性肿瘤（均P＜0.05），与以往研究［6］报道结果一致。分析原因为肿块型乳腺癌病灶内生成大量新生微血管，且微血管无肌层、走行迂曲，导致新生微血管容易形成动静脉瘘，因此血流速度更高、更快且灌注量大。本研究恶性组HER-2、CerbB-2阳性表达率分别为80.33%、77.05%，均较良性组（15.07%、16.44%）高，差异均有统计学意义（均P=0.000）。表明HER-2、CerbB-2的阳性表达在一定程度上影响乳腺癌基因的扩增或过表达，进而影响乳腺癌细胞的生长，在肿瘤的发生、发展和侵袭性中发挥重要作用。本研究肿块型乳腺癌PI、TTP和Grad与HER-2的表达均呈正相关（均P＜0.05），即肿块型乳腺癌HER-2阳性表达者造影剂流入和流出的速度及流量均较HER-2阴性表达者更高、快、多。分析原因可能为HER-2阳性能够促进肿瘤新血管形成、加速生长速度并增加肿瘤侵袭性；此外，由于肿瘤生长过快，氧耗量增加且营养供应不足使肿瘤细胞溶解，提示其恶性程度越高［7］。CerbB-2是与乳腺癌密切相关的原癌基因，主要参与调控细胞生长、细胞增殖及肿瘤细胞分化，当CerbB-2呈阳性表达时，表明乳腺癌具有较强侵袭性，其过表达与远处转移密切相关［8］。本研究显示肿块型乳腺癌TTP与CerbB-2的表达呈正相关（P＜0.05），即肿块型乳腺癌CerbB-2阳性表达者超声造影增强上升速度较CerbB-2阴性表达者更快。分析原因为在肿瘤血管生成因子的影响下，肿瘤血管密度快速增长；此外，由于肿瘤血管壁薄、管腔小，内皮结构不完整，无平滑肌细胞和神经末梢，导致肿瘤内微血管收缩和舒张功能的缺失，因此相对于正常的组织，微泡很容易从恶性乳腺组织中逃逸出来。

本研究两组WIS比较差异无统计学意义，AUC1属于间接计算指标，故选取PI、TTP、Grad 3个超声造影定量参数进一步探讨超声造影定量参数联合HER-2、CerbB-2对肿块型乳腺癌的诊断价值，结果显示，超声造影定量参数联合HER-2、CerbB-2对肿块型乳腺癌的诊断效能优于超声造影定量参数或HER-2、CerbB-2单独应用的诊断效能（均P＜0.05），表明联合诊断价值更高。

综上所述，超声造影定量参数有助于鉴别诊断乳腺良恶性病变，且与乳腺癌组织中HER-2、CerbB-2的表达相关，联合应用可提高肿块型乳腺癌患者术前和非侵袭性诊断的准确性，为临床治疗提供参考依据。