罕见抗-Tja合并自身抗体致疑难配血分析

许露萍 尹俊皓 王若涵

P血型为血型集合GLOB中的罕见表型，其中个体缺乏P，P1和PK抗原，其中P和PK是公共抗原，在这些个体的血清中通常会出现针对这些抗原的抗体，称为抗Tja[1]，由于为隐性遗传，在人群中的比例低[2]，属于稀有血型。在日常配血工作中，我们发现1例由于血清中存在抗-Tja合并自身抗体引起的交叉配血困难标本，现报道如下。

材料与方法

1 一般资料 患者贾某，男，53岁，因泌尿系结石住院，择期手术，既往体检，无输血史，术前Hb：67 g/L，拟术前输血纠正贫血，申请输血。在配血过程中发现不规则抗体筛查3个细胞均阳性, 凝集强度无强弱之分,与多位同型献血者配血，主次侧均不相合。

2 试剂与仪器 Ortho AutoVue Innova自动配血仪、微柱孵育器（OBHB-32型）、微柱凝胶卡离心机（01-BV-8260型）由奥森多医疗器械贸易公司提供、低速离心机（JW-1012型）由嘉文仪器装备有限公司提供;电热恒温震荡水槽（DKZ-2）由上海一恒科技有限公司提供。

ABO正反定型及RhD血型定型试剂卡（批号ABR203H）、抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）检测卡（微柱凝集法）（批号AHC162F）、人ABO血型反定型用3%红细胞试剂盒（微柱凝集法）（批号A382Z）由奥森多医疗器械贸易公司提供；抗体筛选红细胞试剂盒（批号20207038）由上海血液生物医药有限责任公司提供；红细胞血型抗体鉴定细胞谱细胞（批号732019）、抗-Tja血清由广州市血液中心提供。

3 实验方法

3.1 血型鉴定：患者ABO、RhD血型鉴定采用血型血清学方法，参照输血技术操作规程[3]进行。

3.2 直抗试验：患者红细胞与抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）检测卡反应，具体方法参照输血技术操作规程[3]进行。

3.3 抗体筛查试验：患者血清与抗体筛选红细胞反应，判断是否存在不规则抗体，参照《全国临床检验操作规程》第4版[4]进行。

3.4 吸收放散实验：使用ZZAP试剂处理自身DAT阳性红细胞，用处理后的红细胞做血浆的自身抗体吸收试验，具体方法参照全国临床检验操作过程第4版进行[4]，去除血浆中的自身抗体。

3.5 抗体鉴定：患者血清与抗体鉴定谱细胞反应，并比较血清56 ℃灭活前后和2-Me处理前后的结果，判断血清中抗体的特异性。

结 果

1 血型鉴定试验 患者ABO、RhD血型为O型RhD阳性，与A、B和O细胞盐水立即离心均强凝集，置37 ℃ 温浴10 min离心观察均发生全部溶血，ABO、RhD血型结果见表1。

表1 患者ABO、RhD血型鉴定结果

2 自身抗体、DAT和不规则抗体筛查试验 患者DAT结果为阳性；患者EDTA抗凝剂血浆、原血清和37 ℃温浴10 min血清分别与抗体筛选红细胞反应，自身抗体对照均阳性，结果见表2。

表2 不同样本与抗体筛选红细胞凝集反应结果

3 吸收试验 通过吸收试验，吸收血浆中的自身抗体后，自身抗体检测为阴性，不规则抗体筛查试验阳性。

4 抗体鉴定试验 患者血清与1-11号抗体鉴定谱细胞反应及自身细胞反应，比较血清56 ℃灭活前后和2-Me处理前后的结果，判断血清中抗体的特异性，结果见表3。

表3 血清与抗体鉴定谱细胞反应结果

5 P血型鉴定 患者红细胞与抗-Tja血清呈阴性反应，O型对照细胞与抗-Tja血清呈阳性反应，说明患者血型为血清中含抗-Tja的P表型。

6 交叉配血结果 选择科室所有库存O型血液与该患者进行交叉配血，未能找到主次侧相合的血液。

讨 论

临床上交叉配血不合的原因众多，在进行血液筛查的每个环节都可能导致配血不合。在输血前的血液检测中，不规则抗体筛选阳性是导致不合的常见现象[5]。对于不规则抗体筛查阳性的患者，输血前最好能进行抗体鉴定，但是国内大多医院未能开展抗体鉴定，配血常常由当地中心血站帮忙完成[6]。

P血型系统是Landsteiner和Levine在用人红细胞注射家兔来观察多态性时发现的又一血型系统，是第3个被发现的人类红细胞血型系统，包括P、PK、P1三种抗原[7]。极少数人的红细胞上缺乏P1、P和PK抗原，则称为P表型，这是一种十分罕见的表型[2]。P表型个体的血清中天然存在抗-PP1PK，也称为抗-Tja，该抗体具有一定的临床意义，可凝集除P表型之外的所有表型红细胞，并能结合补体造成溶血，能引起严重的输血反应[8]。P血型抗原特异性决定簇是多糖，其生物合成分为红细胞糖苷酯(产生PK、P抗原) 和类红细胞糖苷酯（产生P1抗原) 两条途径。在P基因作用下，将N-乙酰-D半乳糖加到三己糖神经酰胺上，将PK转变为P。在欧洲每百万人群中有5.8例，而在中国香港人筛选了100万人群才发现1例。这种P表现型的特征是在其血清内发现有强溶血性IgM抗体，具有抗-P1+P+PK特异性，这种抗-Tja既可以是IgM型的（盐水介质中发生溶血），也可以是IgG型的（在去除补体作用后抗人球蛋白介质中出现凝集）[9]。

在实施疑难配血操作前要经过鉴定ABO血型、不规则抗体筛查等一系列操作，然后再进行交叉配血，继而有效保证安全输血[10]。自身抗体合并同种抗体病例，常常造成临床输血过程中抗体筛查阳性及交叉配血不相合[11]。我科采用吸收试验去除自身抗体，排除自身抗体对抗体鉴定的干扰后，进一步进行抗体鉴定。患者为O型，37 ℃温浴后反定型出现溶血反应，抗体鉴定格局显示其除与P表型红细胞不反应外，与所有谱细胞反应，表明含有具高频抗原的抗体，与P表型不反应可判定其是该血型集合中的抗体。患者血清56℃灭活前与抗体鉴定谱细胞有凝集反应，37 ℃水浴后出现溶血反应，而灭活补体后不出现溶血反应，证明血清中的抗体有补体活性。此外，该血清经2-Me处理后IAT呈阳性，显示具有IgG性质抗体，表明该抗体是IgM和IgG混合型。这些均符合抗-PP1PK的抗体特性，而患者红细胞与抗-PP1PK血清均无反应。同时因其血清中能检出抗-PP1PK抗体，证明患者为P表型[12]。患者血清中存在抗-Tja合并自身抗体，交叉配血试验受抗-Tja合并自身抗体影响，与多名供血者进行交叉配血均不相合，未能找到PP1PK抗原阴性的同型悬浮红细胞。根据输血技术规范规定，对于稀有血型患者，应采用自身输血、同型输血或配合型输血。2011年，中国稀有血型网站开通（http：//www.chinarareblood.cn/）[13]，通过信息共享，为高频抗原抗体患者解决输血难题已可进行跨区域乃至国际合作[14]，为临床稀有血型患者的输血提供更有效的安全保障。

面对谱细胞全阳性的格局，需要运用多样的血清学方法，对照高频抗原抗体的特点，推测可能的抗体类别。因实验室条件限制，未能运用分子生物学技术对其进行基因分型鉴定和测序。目前的研究认为抗-Tja可以导致妊娠早期女性的习惯性流产[15]，可追踪调查该患者家族史，进一步研究其抗-Tja基因的遗传特点。

（特别鸣谢广州血液中心血型参比室老师对本次试验的支持与帮助!）

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突