广西玉林市小作坊花生油中黄曲霉毒素B1膳食暴露及风险评估

梁馨予，陈 凤，黎 强，张晓娟，莫礼艳

(玉林市食品药品检验检测中心，广西 玉林 537000)

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉产毒菌株产生的真菌毒素，其与气候环境条件关系很大，产毒菌株在温暖潮湿的环境容易繁殖生长。目前已经分离鉴定出12种以上黄曲霉毒素，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)污染最普遍，危害最大，污染水平约占黄曲霉毒素总量的70%。AFB1具有遗传毒性、致癌性，是影响人和动物健康的主要真菌毒素之一，也是全球食品安全控制中最主要的真菌毒素。我国食品安全监督抽检中发现，黄曲霉毒素容易污染的食品有花生及其制品，尤其是散装花生油或者自制花生油。花生油是广西玉林市居民的主要食用油，当地居民的消费观念和习惯使小油坊成为了花生油的主要消售渠道，但是在监督抽检中发现，小作坊花生油成为AFB1的超标重灾区。考虑到小作坊花生油中黄曲霉毒素含量可能增加对公众健康的影响，同时考虑到广西是我国肝细胞癌(HCC)高发地区[1]，乙型肝炎病毒感染和黄曲霉毒素暴露是诱发肝癌的重要危险因素，在非洲和亚洲国家中，黄曲霉毒素对HCC的归因危险度接近50%[2]。因此，本研究对广西玉林市居民通过小作坊花生油摄入AFB1进行膳食暴露及风险评估，为相关单位进行监督或者风险管理提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

样品来源：采用随机抽样法，2020年在广西玉林市辖区内3个区和5个县(市)的小作坊采取散装食用花生油样品共183批，每批样品取样两份，一份检样，一份备样。样品均完好无损送达实验室完成试验。

食物摄入和人群体检调查数据来源：《2010—2012广西壮族自治区居民营养健康状况调查报告》[3]。

试剂与仪器：黄曲霉毒素B1(国家粮食局科学研究院，批号GBW(E)100302，1.96 μg/mL)，乙腈、甲醇(色谱纯)，磷酸氢钠(纯度≥99.0%)，磷酸二氢钾(纯度≥99.5%)，吐温-20(分析纯)。Synergy超纯水系统(美国Millipore)，XS205DU电子分析天平(瑞士Mettler-Toledo)，Thermo U3000高效液相色谱仪(美国Thermo Fisher Scientific)，Pinnacle PCX柱后衍生系统(美国Pickering Laboratories)，VM-01U涡旋器(美国精骐)，ROTANTA 460R离心机(德国Hettich)，免疫亲和柱(批号K8420030，CNW公司)。

1.2 试验方法

1.2.1 花生油中AFB1含量的测定

按照GB 5009.22—2016的第三法高效液相色谱-柱后光化学衍生法进行AFB1含量的检测。依据GB 2761—2017中花生油AFB1的限量20 μg/kg进行判定，即检出含量大于20 μg/kg判定为不合格。

1.2.2 质量控制

检样均摇匀后取样，每20个待测溶液进一针空白以确保系统不被污染，进一针标准溶液以确保目标物保留时间误差控制在5%以内。每次集中处理样品，均平行做加标回收。疑似不合格样品均由具有资质人员复测2次。本实验室检出限为0.1 μg/kg。

1.2.3 低水平数据处理

根据WHO推荐，当小于60%的结果低于检出限(LOD)时，所有小于LOD的结果均以1/2 LOD计；当大于60%的结果低于检出限时，所有小于LOD的结果以0、1/2 LOD和LOD分别计算。

1.2.4 膳食暴露评估

1.2.4.1 膳食暴露量计算

采用点评估模型对AFB1进行膳食暴露量计算，计算公式为：花生油中AFB1暴露量=食用油人均摄入量×花生油中AFB1含量/体重。将研究对象按不同区域，不同性别，城市、农村，年龄/城乡/性别分组，统计各自的AFB1平均膳食暴露量和各百分位数暴露量。

1.2.4.2 分组、体重、摄入量的选择

将县市区设置成6个区域，分别以字母BL、RX、XY、LC、BB、YL表示。按性别分为男性、女性。按城乡分为城市、农村。按年龄/城乡/性别对人群分组，依次分为：6～11岁城市男生组，6～11岁农村男生组；6～11城市女生组，6～11农村女生组。12～14岁城市男生组，12～14岁农村男生组；12～14岁城市女生组，12～14岁农村女生组。15～17岁城市男生组，15～17岁农村男生组；15～17岁城市女生组，15～17岁农村女生组。成人体重相对稳定，18～60岁人群分为18～60岁城市组，18～60岁农村组；60岁以上人群分为60岁以上城市组，60岁以上农村组。

由《2010—2012广西壮族自治区居民营养健康状况调查报告》体检数据[3]得知：广西18岁以上居民平均体重为56.59 kg，其中男性61.32 kg，女性53.01 kg，城市59.27 kg，农村54.47 kg。6～11岁平均体重男生(城市/农村)27.99 kg，女生(城市/农村)27.33 kg。12～14岁平均体重为城市男生48.07 kg，农村男生39.66 kg；城市女生44.68 kg，农村女生39.95 kg。15～17岁平均体重为城市男生58.37 kg，农村男生51.02 kg；女生(城市/农村)48.43 kg。

根据《2010—2012广西壮族自治区居民营养健康状况调查报告》[3]，本研究采用了广西居民膳食模式(模式B)食用油人均摄入量，即：广西居民25.99 g/d，男性为26.31 g/d，女性为25.72 g/d，城市为27.03 d/g，农村为25.18 g/d，18岁以下为23.07 g/d，18～60岁为26.48 g/d，60岁以上为26.29 g/d。

1.2.5 风险特征描述

本次研究采用了风险特征描述中最常用的暴露限值(MOE)法，参照2020年欧盟发布食品中黄曲霉毒素的风险评估报告[4]的BMDL10值400 ng/(kg·d)(即雄性大鼠每天暴露于AFB1下引发10%肝癌发病率的基准剂量置信下限值)，用于暴露限值(MOE)法计算，计算公式为：MOE=BMDL10/暴露量。将研究对象按不同区域，不同性别，城市、农村，年龄/城乡/性别分组，统计各组的平均日膳食暴露MOE和百分位数MOE。风险可接受水平取决于MOE的大小，MOE越小，说明导致不良反应的剂量与人群的暴露量越接近，表明对人群健康的危害越大。当MOE大于10 000时，可认为具有较低的公共卫生关注度，看作是一个低优先级的风险管理行为；当MOE小于10 000时，可认为具有较高的公共卫生关注度，当优先采取风险管理措施[5]。

1.2.6 统计学分析方法

统计分析数据录入Excel数据表，采用SPSS软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 小作坊食用花生油中AFB1含量分布

183批广西玉林市小作坊花生油中AFB1含量检测结果见表1。

表1 广西玉林市小作坊花生油中AFB1的含量分布

由表1可见，全市小作坊花生油AFB1检出率为59%，超标率为18.6%，所有区域存在AFB1含量超标情况，超标率范围7.5%～30.0%，各区域之间的超标率不呈现显著性差异(χ2=5.533，P>0.05)。全市AFB1的最高含量为243.00 μg/kg，是国家限量标准(20 μg/kg)12.15倍，平均含量为16.91 μg/kg，并未超出国家限量标准。6个县市区域中，BL、XY的AFB1平均含量分别是国家限量标准的1.2、1.6倍，其他县市区域的均低于国家限量标准，含量最大值(243.00 μg/kg)出现在XY的农村。农村与城市的AFB1平均含量均低于国家限量标准，但农村的平均含量高于城市，然而各区域标准差和百分位数结果显示，各区域AFB1含量波动较大，平均含量在一定程度高于各区域实际污染水平。

本次研究同时抽取10批预包装花生油作为对照进行AFB1含量检测，结果见图1。

注：**表示经t检验，与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。

由图1可见，各区域AFB1的平均含量是预包装花生油的2.7～17.2倍。经t检验得到，BL、YL、全市小作坊花生油的AFB1平均含量与预包装花生油的有极显著性差异(P<0.01)，可以认为全市小作坊花生油的AFB1含量远高于预包装花生油的可能性比较大，尤其是BL、YL。

2.2 小作坊食用花生油中AFB1膳食暴露及风险评估(见表2)

由表2可见，全市小作坊花生油的AFB1平均暴露量为7.76 ng/(kg·d)，BL、XY AFB1平均暴露量明显高于全市的，是全市的1.4、1.9倍，农村AFB1平均暴露量明显高于城市的，是城市的1.6倍，女性AFB1平均暴露量高于男性，是男性的1.1倍。各年龄段农村组AFB1平均暴露量是各年龄段城市组的1.6～1.9倍，6～11岁农村男、女生组平均AFB1暴露量明显高于全市的，均约是全市的2倍。各分组平均MOE为171～25，远小于10 000，XY组、RX组MOE分别从P25、P75位开始低于10 000，其他分组MOE在P50位开始明显低于10 000，表明广西玉林市居民通过小作坊花生油摄入AFB1潜在健康风险较高，其中区域中BL、XY最高，农村高于城市，女性高于男性，6～11岁人群>12～14岁人群>15岁以上人群。

表2 广西玉林市小作坊花生油中AFB1暴露风险分布

续表2

3 讨 论

本研究结果显示广西玉林市居民小作坊花生油AFB1的平均含量为16.91 μg/kg，平均暴露量为7.76 ng/(kg·d)，MOE为52，应该引起较高的公共卫生关注度。近10年调查研究显示，云南、广西一带花生油等食用植物油的暴露或风险评估结果也呈现较高的风险。为了方便比较，其他文献中通过模拟使用本研究数据(食用油人均摄入量25.99 g/d，体重56.59 kg，BMDL10400 ng/(kg·d))计算MOE。程恒怡等[6]研究结果显示，广西居民经花生油摄入AFB1的平均暴露量为17.30 ng/(kg·d)，MOE为18，模拟MOE为23。石萌萌等[7]研究结果显示，2013—2017年广西地区居民油脂及其制品AFB1的平均暴露量为10.38 ng/(kg·d)，模拟MOE为39。王春双等[8]研究结果显示，2014—2017年广西南宁市居民经花生油摄入AFB1的平均暴露量为9.32 ng/(kg·d)，MOE为33，模拟MOE为43。刘展华等[9]研究结果显示，2014年广西城乡油坊散装花生油AFB1平均含量为70.2 μg/kg，模拟平均暴露量为32 ng/(kg·d)，模拟MOE为12。陈夏威等[10]研究结果显示，2012—2018年广东某市居民经花生油摄入AFB1平均暴露量为2.34 ng/(kg·d)，MOE为107，模拟MOE为171。宋美英等[11]研究结果显示，2017年广东居民通过小作坊花生油摄入AFB1平均暴露量约为3 ng/(kg·d)，模拟MOE为133。黄少文等[12]研究结果显示，广东清远市居民小作坊花生油AFB1的平均暴露量为8.88 ng/(kg·d)，MOE为34.37，模拟MOE为45.05。钟桂红等[13]研究结果显示，2013—2018年广东梅州居民散装花生油AFB1平均含量为3.195 μg/kg，模拟平均暴露量为1.47 ng/(kg·d)，模拟MOE为273。胡文敏等[14]研究结果显示，2012—2017年云南省部分地区居民植物油AFB1的平均暴露量为0.09 ng/(kg·d)，模拟MOE小于4 500。由模拟结果可见，居民食用油MOE大小顺序为广西<广东<300<云南<5 000，远小于安全指数10 000，均具有较高的公共卫生关注度，其中广西MOE为43～12，风险最高。本次调查的广西玉林市MOE为52，可见其风险较高，对风险管理和监督管理者提出了迫切要求。

从风险管理层面，当前国家标准(GB 2761—2017)中对花生、花生油中AFB1限量均为20 μg/kg；CAC标准对花生中黄曲霉毒素总量限量为15 μg/kg；欧盟对花生、花生油中AFB1限量分别为8、2 μg/kg；日本标准最严，黄曲霉毒素在所有产品中均不得检出。假设中国人群，摄入达到中国和欧盟标准限量的花生油，欧盟限量MOE是中国的10倍，但是根据饮食习惯，中国花生油消费水平明显高于欧盟，即使同等限量下，消费水平越高，暴露风险就越大，中国暴露水平高于欧盟。相关资料指出[15]，中国结合真菌毒素的风险评估结果，并充分考虑农业操作规程、气候环境以及工业发展等国情的影响制定了相对较高的毒素限量，早在1981年制定食品中真菌毒素的国家限量标准(GB 2761—1981)，之后分别在2005、2011、2017年进行修订，但是花生及其制品、花生油中AFB1的限量(20 μg/kg)一直没有修订。标准制修订是以风险评估为基础，国际主要组织和国家风险评估工作已从数据积累阶段转入有效管控阶段，最近两年欧洲食品安全局被要求就食品中黄曲霉毒素对公众健康的危害发表科学意见，于是2018年欧盟发布花生及其制品中黄曲霉毒素总量最大限量由4 μg/kg增加到10 μg/kg的风险评估报告[16]，2020年欧盟发布了食品中黄曲霉毒素的风险评估报告[4]，报告中采用基准剂量置信下限(BMDL10)400 ng/(kg·d)，欧盟平均膳食暴露于AFB1上限MOE为5 000～225，下限MOE为690～58。中国应意识到欧盟接下来可能会对黄曲霉毒素的限量标准进行修订，监督管理和风险管理者应密切关注。中国尚处于风险评估数据积累阶段，因此需强化中国黄曲霉毒素的暴露风险评估工作，消除与国际范围黄曲霉毒素限量标准的差异，促进中国相关食品进出口贸易的健康发展。

从监督管理层面，监督管理者应加大抽检和监管力度，倒逼小油坊不断提高工艺、技术和设备水平，同时指导油脂企业按照广西地方标准(DBS 45/045—2017)进行生产，提高油品的质量。

本研究存在不确定性，因缺乏相应数据，未评估6岁以下人群膳食暴露风险。未考虑消费者食品加工时发生的含量变化，如加热、烘烤等可降低AFB1含量水平。抽样时间集中在8月，高温高湿季节使AFB1更容易产生，会高估整体含量。

4 结 论

结合《2010—2012广西壮族自治区居民营养健康状况调查报告》调查数据，采用点评估模型，对广西玉林市居民通过小作坊花生油摄入AFB1进行暴露量计算，参照欧盟于2020年最新发布的食品中黄曲霉毒素的风险评估报告中BMDL10值400 ng/(kg·d)进行风险评估。结果表明：2020年全市花生油小作坊AFB1检出率为59%，超标率为18.6%，平均含量为16.91 μg/kg，含量检出范围为0.05～243.00 μg/kg，平均暴露量为7.76 ng/(kg·d)，MOE为52；各组平均日膳食暴露MOE均介于200～25，远低于10 000，存在较大的风险，其中区域XY、BL风险最高，农村风险高于城市，女性风险高于男性，6～11岁人群风险最高，其次是12～14岁人群，15岁以上人群风险最低。广西玉林市居民通过小作坊花生油摄入AFB1潜在健康风险较高，应引起较高的关注。