慢性乙型肝炎患者血清HBV pgRNA与HBV DNA和HBeAg水平变化关系研究

卢艳玲 李小红 陈海涛

慢性乙型肝炎(CHB)是一种流行于世界各国的传染病，该病由乙型肝炎病毒(HBV)引起，目前医疗行业普遍认为慢性肝病的主要病因为CHB[1]。亚太地区是HBV携带的高发地区，在我国，CHB患者在病毒性肝病患者中占比可达80%左右[2]。过去聚合酶链式反应的检测限于103以上的样本，对低浓度样本的检测力度不足，影响了HBV复制情况的判断[3]。随着医疗行业与新兴科技的发展与结合，基因定量检测的敏感度得到显著提高[4]。目前国内相关研究多为定性检测，本研究以72例CHB患者为研究对象，研究HBV pgRNA、HBV DNA水平与HBeAg水平的相关性，结果如下。

资料与方法

一、一般资料

选择72例CHB患者，样本入选时间为2018年6月至2021年6月，根据HBeAg水平分组，将1<样本值/临界值(S/CO)≤5的患者纳入低浓度组(16例)，510的患者纳入高浓度组(21例)。三组性别、年龄无明显差异，P>0.05；三组白蛋白(Alb)水平比较，低浓度组>中浓度组>高浓度组，三组天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平比较，低浓度组<中浓度组<高浓度组，P<0.05。见表1。本研究已获得医院伦理委员会批准。

表1 三组一般资料比较[n，(±s)]

二、研究对象

纳入标准：①临床确诊[5]；②年龄>18周岁；③对研究知情同意。排除标准：①合并器质性病变；②其他肝炎；③遗传性、免疫性、药物性、酒精性肝脏疾病。

三、研究方法

(1)HBV pgRNA定量检测：使用北京大学基础医学院研制的核酸试剂盒进行检测。取血清250 μL，病毒核酸RNA使用磁珠法提取，DNA以Dnase I酶消化，荧光定量PCR仪同时反转录、扩增病毒核酸和内标。

(2)核酸释放剂和5 μL血清充分混合，将血样中的HBV DNA快速裂解、释放，之后使用Infinity-48s型全自动PCR分析仪(美国赛沛公司Cepheid)定量检测HBV DNA。

(3)酶联免疫吸附法检测HBeAg，计算HBeAg临界值的方法为CO=阴性对照组均值(OD)×2.1，以S/CO的比值作为HBeAg定量检测的结果，S/CO>1判定为阳性。

四、观察指标

①比较不同HBeAg水平分组中HBV pgRNA、HBV DNA水平；②分析HBV pgRNA、HBV DNA水平与HBeAg水平的相关性。

五、统计学分析

结 果

一、三组血清HBV pgRNA、HBV DNA水平比较

三组HBV pgRNA、HBV DNA水平比较，均有低浓度组<中浓度组<高浓度组，P<0.05，见表2。

表2 三组血清HBV pgRNA、HBV DNA水平比较 [拷贝/mL，(±s)]

二、HBeAg、HBV pgRNA与HBV DNA相关性

血清HBV pgRNA与HBeAg呈正相关(r=0.566，P=0.002)，血清HBV DNA与HBeAg呈正相关(r=0.496，P=0.005)。

讨 论

HBV pgRNA自1996年被发现开始逐渐成为国内研究的热点问题，该指标的一个重要临床价值在于反映HBV cccDNA的水平[6-7]。本研究显示，三组HBV pgRNA水平比较，低浓度组<中浓度组<高浓度组。潘美辰等[8]纳入CHB、乙肝肝硬化和肝癌患者为研究对象，研究CHB进展的不同阶段中多项血清标志物的相关性，该研究显示，随着HBeAg水平的降低，HBeAg阳性检检出率明显降低，这与本文结果互为印证。HBV pgRNA的形成主要与HBV cccDNA为模板的转录合成有关，而HBV pgRNA则是HBeAg的翻译模板，因此HBeAg和HBV pgRNA表现出一定的相关性[9]。HBV pgRNA作为HBV cccDNA转录过程的产物，可较好地反映出HBV的活跃程度和肝细胞中HBV cccDNA的水平，在停药后CHB复发风险的预测等方面具有一定意义[10-11]。HBV pgRNA是HBV DNA的反转录模板，因此HBV DNA水平会受到HBV pgRNA的影响，核苷酸类药物抗HBV治疗对于HBV的反转录过程有一定作用，对HBV pgRNA的反转录进行阻断，从而达到抑制HBV DNA水平的效果[12]。

本研究显示，三组HBV DNA水平比较，低浓度组<中浓度组<高浓度组，C基因和前C基因共同产生一条p25前体多肽链，在自身消化作用和转膜的作用下，HBeAg最终形成。若CHB患者外周血检出HBeAg则提示HBeAg阳性[13-15]。

综上，HBV DNA、HBV pgRNA水平与HBeAg水平呈正相关。