MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产的关系研究

张年宝 赵梦岚

反复性流产患者发病因素复杂，研究认为反复性流产发生与甲状腺功能低下、黄体功能不全、子宫疾病等因素有关[1]。随着现代分子生物学研究的进展，遗传因素在不良妊娠中的作用已逐渐引起临床重视。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetra hydro folate reductase，MTHFR)、纤溶酶原激活剂抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)基因多态性与代谢及凝血有关[2,3]。而代谢及凝血异常可影响胚胎发育，被证实在反复性流产中发挥重要作用[4]。由此推测MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产有关，但目前现有研究报道笔者所见较少。基于此，本研究观察MTHFR、PAI-1多态性与反复性流产的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至2020年1月在我院接受检查的338例孕妇，年龄19～43岁，平均年龄(29.25±5.65)岁；孕前体重指数(body mass index，BMI)17～21 kg/m2，平均(19.13±1.37)kg/m2；停经时间30～67 d，平均(45.18±7.59)d；孕次0～4次，平均(2.59±0.77)次。医院医学伦理委员会批准本研究，孕妇及家属签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①孕妇怀孕期间饮食及运动适宜，无不良嗜好；②经检查，孕妇生殖系统解剖结构正常；③均为自然妊娠。

1.2.2 排除标准：①患有感染的孕妇；②合并甲状腺功能异常(甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退)孕妇；③孕妇或其配偶染色体、生殖抗体异常；④合并妊娠期糖尿病、妊娠期高血压等并发症孕妇。

1.3 方法

1.3.1 基线资料:收集孕妇基线资料，包括年龄、孕前BMI、停经时间、孕次、孕期每天睡眠时间(分为≤8 h、>8 h)、孕期有无性生活(分为有、无)。

1.3.2 MTHFR、PAI-1基因多态性检测:抽取患者空腹肘静脉血3 ml，将灭菌注射用水与氯化钠溶液(北京华夏时代基因科技发展有限公司)按照9∶1的比例混合，制成工作液。取血液标本200 μl，与1 ml工作液混合，以3 500 r/min的速度、10 cm的离心半径离心5 min，去除上清，向管中加入20 μl耀金保试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)，制成白细胞保存液。取1.5 μl白细胞保存液，加入耀金分试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)，置入检测仪。采用西安天隆科技有限公司L998A荧光检测仪检测MTHFR、PAI-1基因型频率分布，检测技术为原位杂交荧光染色分析技术，采用分析系统自动判读荧光信号值，获取荧光曲线图，进行C677T、1298、4G/5G基因型分型，并行阳性质控。

1.3.3 反复性流产评估:参照《妇产科学》[5]，以患者有连续≥2次自然流产为反复性流产，将患者分为反复性流产组与与非反复性流产组，比较2组基线资料及基因型频率分布，分析基因多态性与反复性流产的关系。

2 结果

2.1 孕妇反复性流产情况及基线资料 338例孕妇中，反复性流产108例(31.95%)，非反复性流产230例(68.05%)；2组年龄、孕前BMI、停经时间、孕次、孕期每天睡眠时间、孕期有无性生活比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组基线资料比较

2.2 2组PAI-1基因型频率分布 2组PAI-1基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组PAI-1基因型频率分布 例(%)

2.3 2组MTHFR基因型频率分布 2组MTHFR基因C677T基因型频率分布比较，差异有统计学意义(P<0.05)；2组MTHFR基因A1298C基因型频率分布，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 2组MTHFR基因型频率分布 例(%)

2.4 2组等位基因频率分布 反复性流产组总突变T等位基因频率高于非反复性流产组，4G等位基因频率高于非反复流产组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 2组等位基因频率分布 例(%)

2.5 MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产的关系 将MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型频率、等位基因频率作为自变量；将反复性流产作为因变量(1=反复性流产，0=非反复性流产)，Logistic回归分析显示，MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型频率、等位基因频率与反复性流产的发生密切相关，基因型TT、CT、4G4G，C677T等位基因T，4G/5G等位基因4G是反复性流产发生的风险因子(OR>1，P<0.05)。见表5、6。

表5 自变量赋值情况

表6 MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产关系的Logistic回归分析

3 讨论

反复性流产使生育年龄夫妻承受巨大的心理压力，除已知的多项因素外，部分反复性流产患者尚无明确病因，涉及到基因位点突变[6]。研究报道，MTHFR、PAI-1基因突变包括较多位点，C677T、A1298C及4G/5G基因型仍然是其中最为常见的突变位点[7]。

研究进一步证实，MTHFR、PAI-1基因突变与流产发生密切相关[8]。本研究结果显示，338例孕妇中，有108例(31.95%)为反复性流产。在排除反复性流产的多项相关因素后，比较2组基线资料证实差异无统计学意义。进一步分析MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产的关系，结果显示，2组MTHFR基因C677T基因型频率及PAI-1基因型频率分布比较差异有统计学意义(P<0.05)，反复性流产组总突变T等位基因频率高于非反复性流产组，4G等位基因频率高于非反复流产组。

Logistic回归分析显示，MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型频率、等位基因频率与反复性流产的发生密切相关，基因型TT、CT、4G4G是反复性流产发生的风险因子。分析MTHFR基因C677T基因型及PAI-1基因4G/5G基因型频率与反复性流产的关系在于：MTHFR参与机体代谢过程，可将同型半胱氨酸转变为S-腺苷蛋氨酸，蛋氨酸是重要甲基供体，可影响DNA甲基化，进而影响血管形成及胚胎生长发育[9,10]。在孕期前3个月内，胚胎处于高蛋氨酸、低同型半胱氨酸状态，而在MTHFR基因C677T基因型为TT或CT的患者中，酶活性较高，MTHFR基因可发挥强效催化作用，促使5，10-亚甲基四氢叶酸还原成5-甲基四氢叶酸，加速同型半胱氨酸转变为S-腺苷蛋氨酸，增加流产风险[11]。PAI-1位于7号染色体上，可经滋养层入侵，控制蛋白质水解[12]。而在PAI-1基因4G/5G基因型为4G4G的患者中，4G4G纯合子基因携带者体内PAI-1浓度最高，PAI与纤溶酶原激活物动态平衡被打破，纤溶酶原激活物与PAI-1的结合减少，进一步造成PAI-1高浓度，而高浓度的PAI-1可促使纤维蛋白溶解凝固，促使高凝状态形成[13,14]。而高凝状态可能损害静脉的血液流动，进一步形成胎盘血栓、深静脉血栓，引起胎儿生长受限，增加流产风险[15]。

Nair等[16]研究结果显示，携带T等位基因的女性患不明原因重复性流产的危险性明显增加。王晓慧等[17]研究指出，4G等位基因是引发习惯性流产的主导因素。本研究Logistic回归分析显示，MTHFR基因及PAI-1基因等位基因频率与反复性流产的发生密切相关，C677T等位基因T，4G/5G等位基因4G是反复性流产发生的风险因子与上述研究结论一致，分析可能的原因为，MTHFR被作为代谢中的关键酶，携带T等位基因的女性，酶活性较高，更易通过相关机制[18]。等位基因4G与基因启动密切相关，参与PAI-1基因的转录，可增加PAI-1基因表达，对提高PAI-1浓度有更为显著的作用[19]。针对此情况，临床可对携带T等位基因及4G等位基因的患者应用适当的抗凝药物治疗，并结合叶酸，以期改善胎盘血供，降低流产风险。而因本研究未能观察，反复性流产患者HLA-C、KiSS-1、ACE基因多态性，结论尚有局限，未来还应纳入更多基因多态性研究，以期为反复性流产的合理防治提供可参考的意见。

综上所述，MTHFR、PAI-1基因多态性与反复性流产的发生密切相关，临床可根据患者基因型及等位基因频率分布，对患者实施针对性治疗。