miR-205-5p在卵巢癌患者血清中的表达及其预后价值

张红梅， 梁艳丽， 席 源， 魏 容， 周慧君

(遂宁市中心医院检验科，四川省遂宁市629000)

卵巢癌是女性生殖器最常见的恶性肿瘤之一，疾病早期缺乏有效的诊断生物学标志物，约70%患者确诊时已是晚期，5年生存率低于30%[1]。miRNA是一类具有调控基因表达功能的小分子RNA，血清miRNA表达水平与肿瘤发生及转移相关[2]。血清中miRNA结构稳定，难降解，可在-80 ℃条件下长期保存，有成为疾病诊断生物学标志物的潜质[3]。卵巢癌患者的血清中存在着多种miRNA的异常表达，miRNA的异常表达可靶向调控其下游的靶基因，促进疾病的发展[4]。miR-205-5p是miRNA家族中的一种，其在多种肿瘤患者血清中均呈高表达，且与肿瘤恶性程度具有一定的相关性[5-6]。但是目前关于miR-205-5p在卵巢癌中研究的报道较为少见，因此本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测卵巢癌患者血清中miR-205-5p表达水平，并分析其临床预后意义，为卵巢癌的临床诊断和治疗提供参考。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选择本院妇产科2016年1月—2017年12月收治的卵巢癌患者98例为卵巢癌组，另选取同期健康体检女性98例为健康组。两组一般资料比较差异无显著性(P>0.05；表1)。本研究经本院伦理委员会批准，患者和家属均知情同意。纳入标准：①组织活检确诊为卵巢癌；②临床资料完整；③肝肾功能正常；④进行手术治疗。排除标准：①妊娠或哺乳；②伴有严重心、脑、肺功能障碍；③合并其他或严重妇科疾病；④放疗或化疗史。

表1 两组基本资料的比较(n=98)

1.2 主要试剂及仪器

RNA提取试剂盒(批号20132154)、RNA反转录试剂盒(批号2041245)、qRT-PCR试剂盒(批号2145874)均购自上海优宁维生物有限公司。伯乐Mini-PRO荧光定量PCR仪购自美国伯乐公司。

1.3 qRT-PCR

卵巢癌患者术前1天及术后7天各抽血1次，采集空腹静脉血，健康组体检当天抽血。3 000 r/min，离心15 min，取上清置于-80 ℃冰箱保存备用。根据RNA试剂盒提取血清总RNA，并利用反转录试剂盒得到cDNA保存至-80 ℃备用。qRT-PCR体系：SYBR Green qPCR SuperMix 16.25 μL，特异性引物2.0 μL，模板cDNA 3.25 μL，DEPC水补足至30 μL。反应条件为：95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s；60 ℃ 30 s；70 ℃ 30 s；共40个循环。设置3个复孔，根据公式(2-ΔΔCT法)计算mRNA表达情况。

1.4 随访

以门诊或电话随访的方式进行3年随访，半年1次，随访终点为2020年12月止或患者死亡时间。

1.5 统计学分析

2 结 果

2.1 两组血清miR-205-5p表达水平的比较

与健康组比较，卵巢癌组血清miR-205-5p表达水平更高(P<0.05)；与术前比较，卵巢癌组术后miR-205-5p表达水平显著降低(P<0.05；表2)。

表2 两组血清miR-205-5p表达水平的比较

2.2 血清miR-205-5p对卵巢癌的诊断价值

ROC曲线结果显示，血清miR-205-5p诊断卵巢癌的曲线下面积为0.810，最佳截断值为6.28，灵敏度为89.79%，特异度为86.73%(图1)。

图1 血清miR-205-5p对卵巢癌诊断价值的ROC曲线

2.3 miR-205-5p与卵巢癌患者临床特征的关系

以术前血清miR-205-5p表达水平8.08为界值，将卵巢癌患者分为miR-205-5p低表达组(48例)和miR-205-5p高表达组(50例)，两组患者肿瘤分化程度和有无淋巴结转移情况比较，差异有显著性(P<0.05；表3)。

表3 miR-205-5p与卵巢癌患者临床病理特征的关系

2.4 miR-205-5p表达水平与卵巢癌患者预后的关系

miR-205-5p低表达卵巢癌患者生存期、1年生存率、3年生存率均高于高表达卵巢癌患者(P<0.05；表4)。

表4 miR-205-5p表达水平与卵巢癌患者预后的关系

2.5 影响卵巢癌患者预后的多因素Cox回归分析

经多因素Cox分析得出，肿瘤分化程度低、有淋巴结转移和miR-205-5p呈高表达均为影响卵巢癌患者预后的危险因素(P<0.05；表5)。

表5 影响卵巢癌患者预后的多因素Cox回归分析

3 讨 论

卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在女性恶性肿瘤中仅次于宫颈癌和子宫体癌，卵巢上皮癌在各种类型卵巢癌中死亡率最高[7]。由于卵巢体积小且位于盆腔内，导致卵巢癌早期临床症状不明显，且难以发现，因此患者容易错过早期的最佳治疗时间。当肿瘤细胞发生迅速增殖和扩散，导致患者癌细胞扩散至盆腔内脏器时，往往已经到了疾病的晚期，患者病情加重，临床治疗困难。据统计，2018年全球预计卵巢癌确诊病例为29.5万，中国卵巢癌发病率为5.37例/10万，死亡率为2.22例/10万[8]。因此寻找有效的、新颖的检测方法和治疗靶点，以提高卵巢癌早期发现率、个性化治疗及预后是一个迫切的问题。

miR-205-5p是miR-205-5家族中的一种，已被证实在多种肿瘤中发挥重要作用。有研究发现，肺癌、肝癌、子宫内膜癌和胃癌患者血清miR-205-5p异常高表达，表明在多种肿瘤中miR-205-5p均可作为一项有价值的检测指标，有成为潜在生物学标志物的可能性[9-10]。本研究结果发现，卵巢癌组血清miR-205-5p表达水平显著高于健康组，表明卵巢癌的发生会引起机体血清miR-205-5p的异常高表达，因此miR-205-5p异常升高可能与卵巢癌发生具有一定的相关性。同时本研究还检测了卵巢癌患者术前、术后血清miR-205-5p表达水平，发现手术后患者miR-205-5p表达水平较术前显著降低，表明当疾病终止时，患者血清miR-205-5p有趋向正常水平的趋势，进一步说明了miR-205-5p与卵巢癌发展密切相关，也提示miR-205-5p有成为卵巢癌治疗靶点的可能性。

已有研究发现，miR-205-5p对肿瘤细胞分化、增殖及转移均具有调控作用[11]。目前认为其作用机制为miR-205-5p高表达可作用于抑癌基因的上游靶位点，从而抑制抑癌基因表达，为肿瘤细胞增殖和分化提供了良好的体内环境基础[12]。研究发现，在卵巢癌患者血清中存在着多种miRNA的异常表达，miR-199a、miR-9、miR-223等在卵巢癌患者中均表达异常[13-15]。而本研究分析miR-205-5p在卵巢癌患者血清的表达水平与临床病理特征的关系，发现卵巢癌患者血清miR-205-5p的表达水平与肿瘤的分化程度和淋巴结转移与否密切相关，患者肿瘤分化程度越低，血清miR-205-5p表达水平越高，淋巴结转移增加，这表明miR-205-5p表达水平与患者的疾病进程具有密切的相关性，患者肿瘤恶性程度高，同时癌细胞发生扩散均可导致miR-205-5p表达水平升高，进一步说明miR-205-5p可作为卵巢癌患者诊断的生物学标志物。本研究还对卵巢癌患者的生存时间进行了分析发现，卵巢癌患者miR-205-5p高表达组1年和3年生存率均显著低于miR-205-5p低表达组，提示miR-205-5p的表达水平对卵巢癌术后患者的康复情况有一定的影响，miR-205-5p高表达可能不利于卵巢癌患者的预后。多因素Cox分析发现，肿瘤分化程度低、肿瘤细胞有淋巴结转移和miR-205-5p呈高表达水平均是影响卵巢癌患者预后的危险因素，因此对以上患者治疗后应密切关注其康复情况。同时本研究也存在一定的局限性，后期应加大样本量的收集，同时对多个miRNA进行联合检测，以找到最有效的靶点。

综上所述，卵巢癌患者血清miR-205-5p表达水平异常升高，同时miR-205-5p异常高表达可能会引起患者肿瘤细胞扩散风险增加，术后生存率可能降低，因此miR-205-5p有成为临床卵巢癌治疗靶点的可能。