miRNA-602联合S100β检测对急性脑出血的诊断价值

高 伟 (福州市第一医院神经外科，福建 福州 350009)

脑出血是中老年高血压患者一种常见的严重脑部并发症，指非外伤性脑实质内血管破裂引起的出血，常见的病因是高血压、脑动脉硬化、颅内血管畸形等，常因用力、情绪激动等因素诱发，故大多数患者为在活动中突然发病[1]。临床上脑出血发病十分迅速，主要表现为意识障碍、肢体偏瘫、失语等神经系统的损害[2]。治疗超急性脑梗死的有效性，包括静脉内溶栓或取栓，通常限于缺血事件发生后6 h内，因此快速、准确的诊断是临床决策的关键[3]。microRNAs(miRNAs)是一种小的类似于siRNA的分子，由高等真核生物基因组编码。包括miRNA-602在内的许多miRNA已被证明在多种表观遗传水平上调节基因表达与中风的病理发生有关，中枢神经特异性蛋白(S100β)蛋白具有广泛的生物学活性，在细胞增生、分化、基因表达、细胞凋亡中具有重要作用，影响着神经胶质细胞的生长、增殖、分化，维持钙稳态[4-5]。然而，尚未有研究探讨二者联合检测对急性脑出血患者的诊断价值。因此，本研究探讨了miRNA-602联合S100β检测的临床机制，以期为脑出血患者的早期诊断提供更多依据。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2019年1月～2021年5月我院收治的70例急性脑出血患者为病例组。纳入标准：①均经影像学手段确诊为脑出血。②从卒中发作到入院的时间小于6 h。③年龄30～80岁。④临床资料完整。排除合并免疫性疾病、创伤、冠状动脉疾病、器官衰竭、恶性肿瘤和感染等疾病的患者。同时，选择同期在我院行体检的60名健康志愿者为对照组，两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。具有可比性。见表1。本研究经过本院医学伦理委员会同意。

表1 两组基线资料比较(n)

1.2RT-PCR检测：在患者入院后立即经肘静脉采集静脉血5 ml，并立即离心。上清液转移到无核糖核酸酶的EP管中，保存于-80℃冰箱。从血浆中提取总RNA，利用琼脂糖凝胶电泳法测定RNA完整性。miRNA-602、S100β引物序列见表2。RT-PCR反应条件如下：95℃预变性10 min，然后95℃变性30 s，50℃退火30 s，40个循环，最后70℃延伸10 min结束。

1.3神经功能缺损评分：在患者入院后即进行神经功能缺损评分(NIHSS)。NIHSS量表主要用于脑中风患者神经功能状态的评估，对病情合理评估，个体化治疗。质量表简洁、可信度高、准确性高，且具有共通性和低敏感度，其内容包括11个评估项目，分别为意识程度、回答问题的能力、遵从指令的能力、眼球运动、视野、面瘫、上肢运动功能、下肢运动功能、肢体协调功能、感觉、语言、构音和忽视，每个项目计分分为3～5个等级，评分范围0～42分，分数越高表示神经功能受损越严重[6]。

表2 miRNA-602、S100β引物序列

2 结果

2.1两组患者血清中miRNA-602、S100β的表达水平：RT-PCR检测结果显示，病例组、对照组患者的miRNA-602相对表达水平分别为(27.68±1.42)、(6.74±0.52)，S100β相对表达水平分别为(24.39±2.03)、(6.57±1.03)，差异均具有统计学意义(P<0.05)；病例组患者血清miRNA-602、S100β的表达水平均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2患者血清中miRNA-602、S100β表达的相关性分析：Pearson相关性分析显示，脑出血患者血清中miRNA-602与S100β的表达水平呈显著正相关(r=0.769,P<0.001)，且miRNA-602(r=0.512,P<0.001)、S100β(r=0.446,P<0.001)表达水平也均于NIHSS评分呈显著正相关(r=0.446,P<0.001)。见图1。

图1 脑出血患者miRNA-602与S100β表达的相关性

2.3血清中miRNA-602、S100β检测对急性脑出血的诊断价值：ROC曲线分析显示，血清miRNA-602、S100β对急性脑出血诊断的灵敏度分别为52.9%、46.8%，特异度分别为88.4%、76.3%，AUC分别为0.68、0.61，对二者进行联合检测后，灵敏度提高至67.8%、特异度提高至81.5%。见表3、图2。

表3 血清中miRNA-602、S100β检测对急性脑出血的诊断价值

图2 miRNA-602、S100β检测对急性脑出血的诊断价值

3 讨论

随着社会经济的发展，急性脑出血的发生率呈明显上升趋势，其治疗和康复已成为严重的社会负担。脑出血超急性期的早期诊断极大地影响着患者的治疗和管理方案[7]。本研究探讨了miRNA-602、S100β作为早期诊断标志物的价值。有研究者发现，S100β蛋白是自噬的关键调节因子，可能在大脑中动脉闭塞损伤后发挥重要作用，其主要是通过抑制鞘磷脂合成酶活性，增加神经酰胺水平，进而上调p21诱导的细胞周期阻滞，对脑梗死后的脑组织具有保护作用[8]。脑缺血损伤时细胞损伤是一个渐进的过程，脑缺血损伤后又出现再灌注损伤而引起脑水肿加重，使血脑屏障通透性进一步增高，导致血液中的S100β蛋白增多，同时神经细胞损伤也可能持续一段时间[9]。脑出血的神经损伤源于血肿的原发性损伤外，更重要的是继发性损伤，主要包括脑水肿、脑细胞的毒性损伤及继发性缺血[10-12]。

本研究发现，急性卒中发生后，S100β蛋白浓度8～24 h即明显升高，并在卒中发生72 h后S100β蛋白浓度随着病情的好转逐渐下降。许多经典的信号通路也被发现参与了脑梗死的病情进展，如miRNA-602介导的神经元凋亡参与了缺血性脑损伤[13]。与此同时，miRNA-602可影响NF-κB与p300的结合，阻断NF-κB介导的信号转导，还可影响P53转移至线粒体的生物学过程，引起细胞色素酶的释放[14]。本研究相关性分析也发现，脑出血患者血清中miRNA-602与S100β的表达水平呈显著正相关，且miRNA-602、S100β达水平也均于NIHSS评分呈显著正相关。这表明，miRNA-602与S100β在脑出血的发生发展过程中，可能存在着一定的协同作用，且二者表达量与患者神经功能密切相关。

综上所述，miRNA-602及S100β联合检测对急性脑出血有较高的诊断价值，值得临床推广。但本研究为单中心研究，且样本量较小，未来在多中心联合的基础上实施更大样本量的研究，或能得出更具说服力的证据。