亲子鉴定中vWA基因座等位基因丢失1例

陈 炜，李冠武

（1．广东精正司法鉴定中心，广东 汕头 515041；2．汕头大学司法鉴定中心，广东 汕头 515041；3．汕头大学医学院，广东 汕头 515041）

1 案例资料

被检父和孩子母亲为给女儿和儿子办理户籍事宜，前来进行亲子鉴定。分别用FTA卡采集4人的指尖血备检。

分别采用HuaxiaTMPlatinum PCR扩增试剂盒（美国ABI公司）和HEALTH Gene STRtyper-21G Plus扩增荧光检测试剂盒（海尔施基因科技公司），采用10 μL扩增体系对4人的FTA血卡直接进行短串联重复序列复合PCR扩增，产物用3130XL基因分析仪（美国ABI公司）进行电泳检测及GeneMapper软件判读基因分型。

检验结果分析，被检父和孩子母亲与女儿在每一个常染色体STR基因座的基因分型都遵循孟德尔遗传规律。通过计算得到其累积亲权指数大于10 000，结果支持被检父和孩子母亲为女儿的生物学父母亲。

在HuaxiaTMPlatinum PCR扩增试剂盒中，被检父和孩子母亲与儿子之间的22个非性别基因座中，只有vWA基因座不符合孟德尔遗传规律。在vWA基因座，被检父分型为“14，18”，母亲分型为“17”，儿子分型为“14”（如图1）。在该基因座上，母子基因分型均为纯合子且不符合遗传规律。结合已与被检父、孩子母亲确定亲子关系的女儿在vWA基因座的分型“17，18”，判断母子存在多步突变的可能性极小，怀疑为等位基因丢失。经STRtyper-21G Plus试剂盒重复检验后，发现孩子母亲与儿子在vWA基因座均丢失等位基因“18”。在vWA基因座，母亲分型为“17，18”，儿子分型为“14，18”（如图1）。

2 讨论

等位基因丢失，也叫杂合性丢失。通常是与DNA多态性、碱基的插入/缺失有关的[1]。STR基因座结合区存在突变可能会导致同源染色体上其中一个等位基因的部分或全部基因序列丢失，出现等位基因无效扩增，仅表现为纯合子性状。由突变形成的2个等位基因均丢失的现象较罕见。有关等位基因丢失的报道较多[2-3]，但在vWA基因座发生等位基因丢失的情况则尚未见报道。

杂合性丢失样本会在相应的基因座上将杂合子峰检成纯合子峰，只检测出1个等位基因，但该纯合子峰的面积和高度接近其他杂合子峰[4]。本例中，虽然在HuaxiaTMPlatinum PCR扩增试剂盒检测时未表现出上述特征，但孩子母亲和儿子在vWA基因座中18基因位置上均有一个小峰（图1），因此在增加了模板量重新扩增电泳后，结果仍均为纯合子。

图1 vWA基因座的基因分型

亲子鉴定中常出现的个别STR基因座基因分型结果不符合遗传规律现象，通常被认为是滑动错配机制产生的突变。一步突变在日常工作中较为常见，存在多步突变的则较为少见，需要特别注意。本案例使用HuaxiaTMPlatinum PCR扩增试剂盒检测时发现孩子母亲和儿子在vWA基因座上均表现为纯合子，且母子不符合，存在多步突变，可能性极小。结合该案例中女儿在vWA基因座分型为“17，18”，推测孩子母亲由于vWA基因座结合区存在突变，导致等位基因18无效扩增，且该突变遗传给了儿子导致其等位基因18也出现无效扩增。相反被检父由于vWA基因座结合区不存在突变，未出现无效扩增。该推测经STRtyper-21G Plus试剂盒重复检验后，证实为等位基因丢失。

目前商品化STR试剂盒已经被广泛应用，亲代与子代之间出现个别STR基因座不符合孟德尔遗传规律的现象常有发生。在亲代一方和子代的分型结果均为纯合子，并存在多步突变时，需要特别留意是否可能存在等位基因丢失。如果在日常工作中怀疑等位基因丢失时，可以根据等位基因峰的面积和峰的高度来进行初步判断[5]。在分析单一检测体系下的样本数据时较难判定是否属于杂合性丢失样本，但通过采用两种不同引物设计的检测体系进行检测即可发现。亲子鉴定中，若两个样本之间出现某个STR基因座基因型不符合孟德尔遗传规律，尤其是存在均为纯合子且多步突变的情况时，应该采用引物设计不完全相同的两种或两种以上检测试剂盒进行复检。在采用多种检测试剂盒仍无法验证的情况下，则需采用测序技术进行证实[6]，避免误判，增加结论的准确性和可靠性。