老年高脂血症患者血脂水平与ADCY3基因rs10187348位点基因多态性的关系

甘福生 刘小梅 陈智华 卢磊 章燕 赵国荣

(江西中医药大学第二附属医院 1检验科，江西 南昌 330012；2心脑血管科；3体检科)

高脂血症的典型临床病理改变是血清中总胆固醇(TC)或三酰甘油(TG)水平显著升高，实际临床中也包括高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平下降，特别是老年人属于高脂血症的高发人群〔1〕。血脂水平改变与多种心脑血管疾病的发生发展存在紧密联系，是冠脉粥样硬化、冠心病及缺血性脑卒中等疾病的独立危险因素〔2〕。血脂水平发生异常不仅与平时饮食和运动习惯具有密切联系，遗传因素在高脂血症的发生和发展过程中发挥关键作用，某些基因突变或缺陷会导致机体的脂肪吸收、分解、合成代谢过程发生差异化改变，从而诱发严重的高脂血症〔3〕。腺苷酸环化酶(ADCY)是人体细胞膜中广泛存在的一种酶类，ADCY的9种亚型均在腺苷三磷酸(ATP)生成环磷酸腺苷(cAMP)过程中发挥关键催化作用，ADCY3 就属于关键成员之一〔4〕。现已有一些研究证实ADCY3基因多态性与肥胖和脂肪肝等疾病存在密切联系，但它与机体脂质代谢异常之间的关系特别是与高脂血症各血脂异常种类或亚组之间的关系尚未见详细报道。本文研究旨在探讨高脂血症患者血脂异常影响因素及该位点基因多态性与血脂异常易感性之间的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择江西中医药大学第二附属医院于2018年1月至2020年3月收治的568例老年高脂血症患者为研究组，并以同期128例健康体检者作为对照组。纳入标准：①研究组患者均符合高脂血症诊断标准〔5〕：满足高TG血症组(TG≥1.70 mmol/L)或低HDL-C血症组(HDL-C<1.04 mmol/L)或高TC血症组(TC≥5.18 mmol/L)或混合型高脂血症组(TG≥1.70 mmol/L、TC≥5.18 mmol/L)；②对照组各项检查指标均符合要求；③知情同意并签字。排除标准：①合并其他严重心、肝、肾等重要脏器功能异常或精神疾病者；②中途退出研究者；③3个月内使用降血脂相关药物者。所有患者在知情同意书上签字，研究方案已得到医院伦理委员会准许。

1.2一般临床信息收集 对所有研究对象的一般临床信息进行收集。包括性别、年龄、收缩压、舒张压、吸烟和饮酒史。其中吸烟者定义为曾经吸烟总数≥100支；饮酒者定义为受试者每年的饮酒次数≥12次。

1.3DNA基因提取及ADCY3基因rs10187348位点基因分型检测 分别于患者接受治疗前抽取外周静脉血3 ml并置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中保存，采用DNA提取试剂盒(型号：QIAGEN DNeasy Blood &Tissue)对基因组DNA进行提取，然后采用连接酶检测反应技术(LDR)对基因型进行SNP分型检测。ADCY3基因rs10187348位点引物序列为上游引物：CCCGATCTCGCCTCTTTCAC，下游引物：TTCTGCTTGACATTCACCTAAAT。然后使用PCR试剂盒对cDNA进行PCR。PCR体系为：1.0 μl DNA样本，1.5 μl GC-I缓冲液，1.5 μl MgCl2；1.0 μl dNTP，1.0 μl/条引物，加超纯水补至10 μl。PCR条件为95℃ 1 min，94℃ 20 s，63℃ 45 s，72℃ 1.5 min；连续循环32次。最后采用测序仪(软件GeneMapper4.1)对基因进行测序分型，分型为GG、CG及CC型。

1.4血脂等生化指标检测 采集患者清晨空腹外周静脉血标本。采用全自动生化分析仪(厂家：迈瑞医疗；型号：BS-330E)测定血脂指标〔TC、TG、HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)〕及血糖(GLU)水平。

1.5统计学分析 采用SPSS19.0软件进行t检验、χ2检验、方差分析、LSD-t检验、Logistic回归分析、Hardy-Weinberg平衡检验。

2 结 果

2.1两组一般资料比较 研究组吸烟者比例、收缩压、舒张压、体重指数、TG、TC及LDL-C 水平均显著高于对照组(P<0.05)，但两组性别、饮酒者比例、年龄、GLU及HDL-C 水平之间无明显差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2两组基因分型比较 ADCY3基因rs10187348位点分布3种基因型：研究组和对照组中ADCY3基因rs10187348位点基因型(GG、CG、CC)期望值和观测值符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.466，P=0.481；χ2=2.854，P=0.240)；两组基因型分布差异显著,且研究组CC型基因频率和C等位基因频率明显高于对照组，GG型基因频率和G等位基因频率明显低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 ADCY3基因rs10187348位点基因型分布情况〔n(%)〕

2.3研究组各亚组的基因多态性分析 研究组各亚组C等位基因明显高于对照组，除混合型高脂血症组患者外，其他亚组的GG、CC基因频率和和G等位基因频率明显低于对照组(均P<0.05)。见表3。

表3 高脂血症组各亚组的血脂基因多态性分析〔n(%)〕

2.4各遗传模型下基因多态性与血脂水平异常相关性的多元Logistic分析 对血脂水平可能产生影响的影响因素(高血压、吸烟、体重指数)等进行校正后，等位基因模型、加性模型、显隐性模型及纯合子模型下的DCY3基因rs10187348位点基因多态性均与血脂异常之间存在显著相关性(P<0.05)。见表4。

表4 各遗传模型下基因多态性与血脂水平异常相关性的多元Logistic分析

2.5血脂水平影响因素的多元线性回归分析 以血脂水平(异常=1，正常=0)为因变量，以ADCY3基因rs10187348位点基因型为自变量进行多元线性回归分析。结果显示基因型GG和CC均与各血脂指标水平存在显著线性相关性(P<0.05，P<0.001)。其中基因型GG是高脂血症患者的血脂异常保护因素，基因型CC属于血脂异常的独立危险因素。见表5。

表5 血脂水平影响因素的多元线性回归分析

3 讨 论

高脂血症的发生和发展过程与血脂代谢异常具有紧密联系，是一个复杂的生物学过程。研究证实，高脂血症的重要发病机制之一是与脂代谢有关的基因变异，进而导致脂蛋白降解酶活性下降，从而使机体内的脂蛋白的代谢速度减慢或清除量降低，最终表现为各种类型的血脂指标水平异常〔6〕。

ADCY3基因在染色体上的位置位于2p23.3上，共由26个外显子构成，ADCY酶3为该基因编码生成的重要产物。ADCY3作为一种膜结合酶，其在机体组织中广泛存在，在参与机体内多种重要生理和病理代谢过程发挥关键作用〔7〕。多项全基因组关联分析 (GWAS)研究结果证实ADCY3基因的多个位点均与肥胖或超重及高体质指数之间存在密切相关性〔8，9〕。潘玲雁等〔10〕最近研究结果揭示肥胖所致的重要并发症-脂肪肝也与ADCY3基因多态性之间具有密切联系，认为ADCY3基因可能是通过影响TNF-α等炎性因子的浓度进而参与脂肪肝的发生发展。近来陈鋆等〔11〕结果显示，rs10187348、rs6751537、rs11689546、rs4077678、rs7608976、rs13-44840位点的突变基因型均与TC发生显著升高存在联系及rs1344840、rs1127568、rs6751537位点的突变基因型与TG升高有关，rs1344840、rs7608976、rs4077678及rs11689546位点突变基因型与LDL-C的升高有关，提示ADCY3基因多态性与血脂水平异常之间存在关联。且Saeed等〔12〕研究证实ADCY3基因的rs10187348位点CC基因型、rs4665273位点TT基因型、rs2278485位点的GG基因型等均属于超重/肥胖的独立危险因素。这为本文进一步研究ADCY3基因与高脂血症血脂异常水平之间的关系提供新的研究方向。

本研究结果提示ADCY3基因rs10187348位点基因多态性与高脂血症之间存在一定联系。由于血脂代谢过程的调控机制非常复杂，血脂异常通常为多种血脂指标异常情况的统称，且不同血脂指标如TG、TC的代谢途径也存在差异〔13，14〕。

本研究多元线性回归分析结果与Saeed等〔12〕研究显示携带rs10187348位点CC基因型人群患发超重/肥胖风险更高具有一致性。Meng等〔15〕通过动物实验研究进一步证实ADCY3基因参与大鼠下丘脑调控过程并发挥关键作用，而当下丘脑的信号传导通路出现功能障碍时，就会影响机体的能量和脂肪代谢过程，导致体内脂肪蓄积量增加，进而产生脂肪肝、高脂血症等脂肪代谢性疾病。因此推测ADCY3基因rs10187348位点基因多态性对高脂血症患者血脂水平的影响可能也与该基因参与机体脂质代谢过程有关，但具体作用机制仍研究。

综上，老年高脂血患者ADCY3基因rs10187348位点多态性与血脂异常之间存在显著相关性，其中基因型CC属于高脂血症血脂异常的独立危险因素。可以在临床中对发生该基因突变的人群采取进行进一步预防措施，以降低高脂血症患发风险。