金龟子绿僵菌CQMa421 可分散油悬浮剂对中华圆田螺的急性毒性试验

李欣湲，李文红

(广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530004)

我国南方稻作区自古以来就有稻田养殖田螺的传统，近年得益于柳州螺蛳粉产业的带动，稻螺养殖在广西山区迅速发展。生产实践中通过加强水稻病虫害的绿色防控以确保水稻稳产，目前在稻渔生产中常用诱虫灯诱杀、性诱剂诱杀、建立天敌群落和生物农药等绿色防控技术防治虫害。

绿僵菌属的一些菌作为真菌型生物杀虫剂，具有广谱性、安全性和不产生抗药性等优势。在稻田中施用一定剂量的绿僵菌可有效控制水稻病虫害而不伤害水稻植株细菌和真菌主要类群(谢佳沁等，2019)及稻田中养殖的鱼、虾、蟹(彭国雄等，2020)，但绿僵菌对稻螺养殖中的中华圆田螺毒性影响研究还未见报道。

本研究通过室内半静水试验方法，探讨金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂对中华圆田螺幼螺的急性毒性，确定其半致死浓度后推算出安全浓度，以期为稻螺养殖病害的绿色防控提供参考。

一、材料与方法

1.试验材料

(1)试验条件。试验在广西高校水生生物健康养殖与营养调控重点实验室进行，选用24个500毫升锥形瓶为试验容器，试验用水为经滤网过滤后充分曝气的池塘水，试验水温为(20±2)℃，pH为6.5，溶氧为3.5～6毫克/升。

(2)试验生物。中华圆田螺幼螺采自广西大学水产养殖教学示范基地，所有试验个体均为10毫米≤壳高＜15毫米、体重1.25～2.50克的幼螺。选取健康的中华圆田螺放入水箱中驯养1周，每天换试验用水1次并定时投饵，急性毒性试验开始前24小时停止投食。

(3)试验药品和试验用水配制。选用金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂(以下简称金龟子绿僵菌421)，孢子数量为80亿个/毫升，每瓶40毫升，加入试验用水及有机硅助溶剂配制成1×105毫克/升的母液备用，试验开始时再加入试验用水稀释至所需浓度。

2.试验方法

(1)预备试验。随机分配试验用中华圆田螺幼螺，每10只为1组，参考周永欣等(1989)对水生生物的急性毒性试验方法，设置4个间隔较大的浓度分别为0、400、800、1 600毫克/升，观察96小时，获得最低24小时100%死亡浓度(24小时LC100)1 600毫克/升和最高96小时无死亡浓度(96小时LC0)400毫克/升。

(2)正式试验。根据预试验确定的浓度范围，按照等对数间距设置7个浓度组(398.10、501.18、630.96、794.33、1 000.00、1 258.93、1 584.90毫克/升)、1个空白对照组，每组3个平行。每个平行随机放养驯化后的螺10只(每个容器先分配2只，以后每次捞到的个体在每个容器分配2只，如此重复，直到每个试验容器达到所需的试验数为止)。试验期间，每24小时更换含相同浓度药品的试验用水，确保试验期间试验药液的浓度不低于初始浓度的80%，试验期间不投食。

试验开始后6小时内随时观察并记录螺中毒情况和死亡数，其后于24、48、72、96小时观察并记录螺的死亡数，计算死亡率。参考沈坚等(2013)的方法，当螺腹足脱出或用镊子轻拉后不收回、放入脱氯清水中漂浮于水面或悬浮于水中、刺激腹足5分钟内无反应时可判断其死亡。

(3)半数致死浓度及安全浓度计算。采用改良寇氏法计算24、48、96小时的LC50及95%置信限，计算公式如下。

式中：Xm为最高浓度的对数；i为相邻浓度比值的对数；ΣP为各组死亡率的总和(用小数表示)。

安全浓度(SC)根据下式进行计算。

(4)数据统计处理。运用Excel 2010软件进行数据记录、统计以及分析计算24、48、96小时LC50及SC，利用SPSS软件采用概率单位加权回归法计算95%置信限及回归方程。

二、结果与分析

1.幼螺中毒症状

试验开始后的24小时内各组均开始出现死亡现象，具体表现为针刺5分钟内无反应，除死亡个体外其余大部分螺静伏在容器底部或吸附在侧壁，小部分缓慢移动。24～48小时，398.10、501.18毫克/升浓度处理组剩余个体静伏在底部或吸附于侧壁，活动缓慢，轻拉腹足后缩回，针刺反应较明显；630.96～1 584.90毫克/升浓度处理组的螺因金龟子绿僵菌421的浓度升高，中毒症状随之加深，表现为腹足收缩、足厣闭合，有白色絮状分泌物出现；大部分螺停止活动，侧壁吸附的螺减少，甚至出现腹足脱出、经针刺后无反应的死亡现象，试验96小时，各组均仅有小部分螺存活。中华圆田螺的死亡率观察结果详见表1。

表1 金龟子绿僵菌421可分散油悬浮剂对中华圆田螺的急性毒性试验

2.半致死浓度及安全性评价

表1结果表明，中华圆田螺的死亡率表现出随金龟子绿僵菌421的浓度升高而增大的趋势。死亡情况在48小时后表现最为明显，高浓度组(1 584.90、1 258.93、1 000.00毫克/升)中华圆田螺在96小时死亡率达100%。

根据改良寇氏法计算24、48、96小时的LC50及95%置信限，计算出安全浓度(表2)。

表2 金龟子绿僵菌421可分散油悬浮剂对中华圆田螺的安全浓度

表2结果表明，金龟子绿僵菌421对中华圆田螺幼体24、48、96小 时 的LC50分别 为951.262、650.467、367.938毫克/升，在水温18～22℃条件下，对10毫米≤壳高＜15毫米的中华圆田螺幼螺的安全浓度为91.24毫克/升，是金龟子绿僵菌421在水稻施用有效杀虫用量的400倍。

根据国家质量监督检验检疫总局2014年颁布的《化学农药环境安全评价试验准则第12部分：鱼类急性毒性试验》的标准，本试验中金龟子绿僵菌421对中华圆田螺24、48小时毒性试验结果表明，安全浓度为91.24毫克/升，为低毒。

三、讨论

金龟子绿僵菌CQMa421农药能有效防治鳞翅目、鞘翅目、直翅目、半翅目(同翅目)、双翅目、膜翅目和缨翅目7个目80多种(类)农业、林业和卫生害虫的多种虫态。车正明等(2018)在元阳、建水、开远等稻田综合种养区应用面积达35万亩，水稻增产6%，减少化学杀虫剂用量60%，具有显著的生态效益和经济效益。

有报道显示，在稻田中金龟子绿僵菌421对小龙虾和鲫鱼的安全浓度分别为15.74、18.07克/米3，是金龟子绿僵菌421在水稻中有效杀虫剂量的30～40倍。由于鱼的体表直接接触水体，而虾、蟹、螺具有保护作用的外壳使之不容易受到水中药物的侵害，同时在养殖生产中，虾、蟹、螺会通过掘穴、打洞等行为避免外界水体的恶劣环境。相比于虾、螺可以通过紧闭厣形成相对密闭的环境，对同种药物的安全浓度鱼＜虾＜螺、蟹，如余伟楠等(2014)得出苯扎溴铵对几种淡水水生动物的毒性为大型溞＜团头鲂幼鱼＜草鱼幼鱼＜田螺＜Ⅲ期仔蟹和幼蟹。

我国南方稻区水稻病虫害常有二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟等害虫发生期重叠的现象，其他微生物农药及性诱剂虽杀虫效果也较好，但往往具有专一性，仅针对个别害虫有效果，并不能同时防治多种害虫。

四、结论

金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂对中华圆田螺幼螺24、48、96小时半致死浓度(LC50)分别为951.262、650.467、367.938毫克/升，安全浓度为91.24毫克/升。金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂对中华圆田螺接触试验毒性为低毒药物，可用于稻螺生产中的水稻病害防治。