合欢皮的化学成分研究

杨静，崔晓雪，陈娜，孙皓，郑永丽

（天津渤海职业技术学院，天津 300211）

合欢皮为豆科植物合欢的干燥树皮，别名合昏皮、夜合皮、合欢树皮[1]，合欢皮中含有三萜、黄酮、木脂素、生物碱、鞣质及多糖等多种化学成分[2]。为了开发利用其药用资源，本文选择中国四川产合欢皮作为原料，对其化学成分进行系统分离及结构鉴定。

1 仪器

分析型高效液相色谱仪为Waters 2695 Alliance Separations Module，Empower Pro 工 作站，色谱柱：Agilent zorbax C18柱(5μm，250 mm×4.6 mm)，检测器：Alltech 2000 ELSD，温度：110℃，气流量：2.4 L/min；制备型高效液相色谱仪为：PRIMELINE pump (5mL/min)，KNAUER RID，Hanbon licheoshper C18柱（5μm，250 mm×10 mm）;ESI-MS 测定仪器为ABI 公司API 3000 液质色谱仪。 超导核磁共振仪为VarianUNITYINOVA600 超导核磁共振谱仪。 核磁测定所用溶剂为氘代吡啶。

合欢皮药材2006 年8 月采集于四川省，经天津渤海职业技术学院孙皓教授鉴定为豆科植物合欢干燥树皮。

2 提取分离

2.1 提取粗分

取合欢皮饮片药材5 kg，加10 倍量的体积分数为50%的乙醇，回流提取两次，合并滤液，减压浓缩得干燥浸膏1145 g；取1000 g 浸膏，加适量水溶解，经AB-8 大孔吸附树脂柱分离，依次用水（6倍量柱体积）、30%乙醇（6 倍量柱体积）、50%乙醇（6 倍量柱体积）、80%乙醇（6 倍量柱体积）、95%乙醇（4 倍量柱体积）洗脱，分别收集洗脱液，经薄层展开及理化鉴别，其中80%乙醇洗脱部位主要为皂苷类成分。

2.2 皂苷部分分离纯化

将80%乙醇洗脱部位回收乙醇后，浓缩干燥得干膏56 g，加500 mL 50%乙醇溶解，离心，上清经SP825 大孔吸附树脂柱，依次用50%乙醇、70%乙醇（记为HH-70）以及95%乙醇洗脱，分别收集各洗脱液，浓缩，干燥，得到：HH-70（35.3 g）。 取HH-70 部分30 g，经上行硅胶柱色谱分离，分成20 份，甲醇溶解后TLC 检测，合并相同组分得Fr.A（10.4 g）。

组分Fr.A 经C18开放柱色谱，甲醇－水（63%～100%）梯度洗脱，收集流份308 份（Fr.A-C18-1-308）。 取流份Fr. A-C18-60-65（270 mg）经过开放C18柱（100 mL）由56%甲醇洗脱，收集27～29 流份合并蒸干，得化合物1（11.3 mg）。 组分Fr. A-C18-26-30（185.7 mg）经开放C18 柱54%甲醇洗脱，收集流份63 份。 合并46 ～49 流份得化合物2（17.36mg）。 合并64～77 流份（16mg）经制备液相（61%甲醇）HPLC 分别得化合物6（3.55mg）。 取流份Fr. A-C18-39-42（235 mg）经开放C18柱54%甲醇洗脱后， 再经100%甲醇洗脱， 得流份118（123.2mg）, 经过液相60%甲醇制备得化合物4（12.67mg）。 取组分Fr.A-C18-20-25（120.4 mg），经液相60%HPLC 制备， 收集流份1 得化合物3（7.17mg），收集流份4（15.98mg）经液相55%甲醇HPLC 制备，得化合物5（7.39mg）。

3 化合物结构鉴定

3.1 化合物1

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。 在正离子ESI-MS 谱中， 可以看到准分子离子峰m/z：949.2[M+K]+,933.1[M+Na]+,911.1[M+H]+和特征碎片峰m/z：779.1[M+H-132]+,633.2[M+H-132-146]+和471.2 [M+H-132-146-162]+，推测化合物1 含有1 个六碳糖基，1 个甲基五碳糖基，1 个五碳糖。结合碳谱数据，推测其分子式为C47H74O17。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.80，0.84，0.88，1.03，1.04，1.35，1.41 归属为苷元上7 个甲基质子的信号；δ1.49（d）归属为甲基五碳糖上的甲基质子信号，在1H-NMR 谱低场区，δ 4.94 (1H, d, J = 7.2 Hz)， 5.03 (1H, d, J = 7.8 Hz)，δ5.07(1H, d, J = 6.6 Hz) 为3 个糖基端基质子的信号。δ5.29(1H,br)为1 个烯基质子的信号。 在13C-NMR谱上也出现3 个相应的糖基端基碳信号：δ 103.5，106.8 和107.1； 一对烯碳信号δ 124.6 和140.2；一个羰基碳信号δ181.3。 同时，将化合物1与文献报道[3]的Julibroside A2进行比较，发现其核磁数据基本一致，故鉴定为Julibroside A2。

3.2 化合物2

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.96，1.01，1.05，1.08，1.16，1.29，1.88 归属为苷元上7 个甲基质子的信号；δ1.59（d），1.76（d）归属为甲基五碳糖上的甲基质子信号。 在13C-NMR 谱上出现8 个糖基端基碳信号：δ106.8,102.3,106.3,95.8,101.8,105.8,111.1 和99.4；并且在δ174.5 和167.6出现两个羰基信号。 同时，将化合物2 与化合物1进行比较，发现其糖端基碳数据只有δ102.3 与化合物1 的δ103.4 不一致，故推测可能C-3 糖链有差异，经与文献对照可能是葡萄糖C-6 位连接的糖变为阿拉伯糖， 另外氢谱上MT 残基上的两个甲基单峰变为一个，提示可能其中一个甲基上有取代，经与文献对照[5]，发现其与Julibroside J25波谱数据基本一致，故鉴定为Julibroside J25。

3.3 化合物3

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.97，1.02，1.05，1.08，1.16，1.30，1.88 归属为苷元上7 个甲基质子的信号；δ1.77（d）归属为甲基五碳糖上的甲基质子信号。 在13C-NMR 谱上出现8个糖基端基碳信号：δ106.9,102.3,106.3,95.8,101.9,105.8,111.1 和100.3；并且在δ174.6 和167.7 出现两个羰基信号。 同时， 将化合物3 与化合物2 进行比较，发现其糖端基碳数据只有δ100.3 与化合物2 的δ99.4 不一致，故推测可能C-21 糖链有差异，经与文献对照可能是C-21 MT 残基C-6 位连接的糖变为木糖，经与文献对照[4]，发现化合物3与Julibroside J20波谱数据基本一致， 故化合物3鉴定为Julibroside J20

3.4 化合物4

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.97，1.03，1.04，1.08，1.16，1.31，1.90 归属为苷元上7 个甲基质子的信号；δ1.48（d），1.59（d），1.76（d）归属为三个甲基五碳糖上的甲基质子信号。 在13C -NMR 谱上出现8 个糖基端基碳信号：δ106.8,103.4,107.0,95.8,101.8,105.8,111.1 和99.4；并且在δ174.5 和167.6 出现两个羰基信号。 经与文献对照[5]，发现其与Prosapogenin-10 波谱数据基本一致，故化合物4 鉴定为Prosapogenin-10。

3.5 化合物5

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.93，1.00，1.05，1.08，1.16，1.87 归属为苷元上6个甲基质子的信号；另一个甲基信号可能重叠在δ 1.16 上，δ1.59（d），1.77（d）归属为两个甲基五碳糖上的甲基质子信号。 在13C-NMR 谱上出现8 个糖基端基碳信号：δ104.9,102.2,106.3,95.7,101.8,105.8 ,111.1 和99.4；并且在δ174.5,170.1 和167.6出现三个羰基信号。 同时，将化合物5 与化合物4进行比较，发现其糖端基碳数据只有δ104.9,102.2与化合物4 的δ106.8,103.4 不一致， 故推测可能C-3 糖链有差异， 经与文献对照可能是葡萄糖2位脱氧连上乙酰胺基，并在C-6 位连接的糖由呋糖变为阿拉伯糖，经与文献对照[4]，发现其与Julibroside J22波谱数据基本一致，故化合物5 鉴定为Julibroside J22。

3.6 化合物6

白色无定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反应和Molish 反应均呈紫红色。

在1H -NMR 谱高场区， 甲基质子信号δ0.95，0.98，1.04，1.08，1.15，1.30,1.35 归属为苷元上6 个甲基质子的信号；另一个甲基信号可能重叠在δ0.98 上，δ1.59（d），1.80（d）归属为两个甲基五碳糖上的甲基质子信号。 在13C-NMR 谱上出现8 个糖基端基碳信号：δ106.8,102.4,106.4,95.6,101.7,105.8,111.0 和99.4； 并且在δ174.9 和167.4 出现两个羰基信号。 同时， 将化合物6 与化合物5 进行比较，发现其糖端基碳数据只有δ106.8 与化合物5 的δ104.9 不一致， 同时苷元上C-16 位明显发生高场位移（δ73.9→δ24.8）,故推测可能C-3 糖链有差异且C-16 脱氧，经与文献对照[4]，发现其与Julibroside J26波谱数据基本一致， 故化合物6鉴定为：Julibroside J26。

总之，通过对合欢皮化学成分的系统研究，分离得到6 个化合物，根据理化测定、波谱数据分析等方法鉴定它们均为β－香树脂醇型三萜皂苷。