草果化学成分的研究

2022-12-22 21:16金新宇王晓霞张子默庄鹏宇
中成药 2022年8期
关键词:正丁醇草果豆蔻

金新宇, 王晓霞, 柳 航, 韩 悦, 张子默, 庄鹏宇*

(1.华北理工大学药学院,河北 唐山 063202;2.南京大学医学院附属鼓楼医院药学部,江苏 南京 210008)

草果AmomumtsaokoCrevostet Lemarie为姜科豆蔻属植物,别名草果子、草果仁,分布在广西、云南等地,其性辛、味辣,具有调节肠胃、润肠通便、抗癌、抗氧化、降糖减脂、抑菌抗炎作用[1-3],目前研究表明,除挥发油外,该植物中还发现简单酚类、黄酮、二苯庚烷类、双环壬烷、甾醇[4-6]。本研究对草果95%乙醇提取部位进行分离纯化,得到11个化合物,其中化合物1~6为首次从该植物中发现,化合物3~6为首次从豆蔻属植物中发现。

1 材料

SX-600核磁共振仪(德国Bruker公司);制备液相色谱仪(北京慧德易科技有限责任公司);柱层析、薄层析硅胶(烟台新诺化工有限公司);薄层色谱硅胶预制板(烟台维启化工产品有限公司);Sephadex LH-20(广州安西亚科技有限公司);ODS制备色谱柱(北京慧德易科技有限责任公司)。草果于2017年6月采自云南曲靖,经南京鼓楼医院张海霞副主任鉴定为姜科豆蔻属植物草果AmomumtsaokoCrevost et Lemarie的干燥成熟果实。5%硫酸乙醇溶液、甲醇(天津汇杭化工科技有限公司)。

2 提取与分离

20 kg草果以95%乙醇提取,浓缩液用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次,分别得到萃取物102.4 g(石油醚层)、280.6 g(乙酸乙酯层)、117.3 g(正丁醇层)[7]。正丁醇层用乙醇-水(0∶100、30∶70、60∶40、95∶5)经大孔吸附树脂洗脱,得到4个部位Fr.A~Fr.D。Fr.B经二氯甲烷-甲醇(80∶1~1∶1)硅胶柱洗脱,得到流分Fr.B1~Fr.B20,Fr.B4经甲醇-水(30∶70)凝胶柱洗脱,得化合物2(3 mg)、3(3 mg);Fr.B9在230 nm波长处经制备HPLC(乙腈-水,20∶80)洗脱,得化合物1(3 mg)、4(4 mg),保留时间分别为24、36 min。Fr.C经石油醚-乙酸乙酯(100∶1~1∶2)硅胶柱洗脱,得流分Fr.C1~Fr.C15,Fr.C4在210 nm波长处经制备HPLC(乙腈-水,25∶75)洗脱,得化合物5(3 mg)、10(3 mg),保留时间分别为25、70 min;Fr.C1经甲醇-水(30∶70)凝胶柱洗脱,得流分Fr.C1A~Fr.C1H,Fr.C1D、Fr.C1F、Fr.C1G在210、254 nm波长处经制备HPLC(乙腈-水,20∶80)洗脱,得化合物6(2 mg)、7(2.5 mg)、8(3 mg)、9(3 mg),保留时间分别为30、51、62、70 min;Fr.C1H有明显结晶,用二氯甲烷和甲醇反复溶解并重结晶,得化合物11(8 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末,ESI-MSm/z:223.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.85(1H, d,J=9.4 Hz, H-4),6.93(1H, s, H-5),6.22(1H, d,J=9.5 Hz, H-3),3.97(3H, s, 8-OCH3),3.92(3H, s, 6-OCH3);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:160.5(C-2),145.2(C-6),144.5(C-4),144.0(C-7),142.7(C-9),134.4(C-8),111.0(C-10),110.3(C-3),103.2(C-5),59.8(8-OCH3),55.0(6-OCH3)。以上数据与文献[8]报道一致,鉴定为异嗪皮啶。

化合物2:白色粉末,ESI-MSm/z:146.9[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.78(1H, d,J=16.0 Hz,H-β),6.45(1H, d,J=16.0 Hz, H-α),7.56(2H, m, H-2,6),7.41(3H, m, H-3, 4, 5);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:172.6(C-9),147.0(C-7),133.9(C-1),130.7(C-4),128.9(C-2, 6),128.3(C-3, 5),117.3(C-8)。以上数据与文献[9]报道一致,鉴定为反式肉桂酸。

化合物3:无色油状物,ESI-MSm/z:167.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:6.72(1H, s, H-2),4.31(1H, d,J=9.6 Hz, H-7),2.39(1H, dd,J=16.0, 3.6 Hz, H-5b),2.18(1H, m, H-4, 5a),1.91(1H, m, H-6),1.73(3H, s, 3-CH3),0.98(3H, d,J=6.8 Hz, 6-CH3),0.92(3H, d,J=6.8 Hz, 4-CH3);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:202.4(C-1),151.9(C-3),135.4(C-2),69.1(C-7),52.0(C-6),37.3(C-5),27.3(C-4),20.9(6-CH3),16.8(4-CH3),15.4(3-CH3)。以上数据与文献[10]报道一致,鉴定为subamone。

化合物4:黄色结晶,ESI-MSm/z:285.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:8.06(2H, m, H-2′, 6′),7.62(3H, m, H-3′, 4′, 5′),6.86(1H, s, H-3),6.31(1H, s, H-6),3.87(3H, s, -OCH3);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:182.2(C-4),164.4(C-2),157.1(C-7),156.6(C-5),151.0(C-9),132.4(C-4′),130.1(C-2′, 6′),129.9(C-1′),126.7(C-8),126.5(C-3′, 5′),105.1(C-3),104.8(C-10),98.9(C-6),61.2(-OCH3)。以上数据与文献[11]报道一致,鉴定为汉黄芩素。

化合物5:淡黄色油状物,ESI-MSm/z:356.8[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:6.90(2H, d,J=1.2 Hz, H-2, 2′),6.88(2H, d,J=8.0 Hz, H-5, 5′),6.81(2H, dd,J=8.0, 1.2 Hz, H-6, 6′),4.73(2H, d,J=3.6 Hz, H-7, 7′),3.11(2H, m, H-8, 8′),3.86(2H, dd,J=8.8, 2.8 Hz, H-9a, 9′a),4.25(2H, dd,J=8.8, 6.8 Hz, H-9b, 9′b),3.91(6H, s, 3, 3′-OCH3),5.60(2H, brs, 4, 4′-OH);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:146.6(C-3, 3′),145.2(C-4, 4′),132.8(C-1, 1′),118.9(C-6, 6′),114.1(C-5, 5′),108.4(C-2, 2′),85.6(C-7, 7′),71.5(C-9, 9′),55.7(3, 3′-OCH3),54.1(C-8, 8′)。以上数据与文献[12]报道一致,鉴定为(+)-松脂醇。

化合物6:白色结晶粉末,ESI-MSm/z:360.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:4.78(1H, d,J=7.0 Hz, H-7′),3.97(1H, dd,J=6.6, 8.4 Hz, H-9′),3.71(1H, dd,J=6.1, 8.3 Hz, H-9′),3.83(1H, dd, overlap, H-9),3.62(1H, dd,J=6.5, 11.2 Hz, H-9),2.91(1H, dd,J=4.9, 13.5 Hz, H-7),2.50(1H, dd,J=11.2, 13.5 Hz, H-7),2.71(1H, m, H-8),2.34(1H, m, H-8′);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:149.0(C-3, 3′),147.1(C-4′),145.9(C-4),135.8(C-1′),133.6(C-1),122.2(C-6′),119.9(C-6),116.3(C-5′),116.1(C-5),113.6(C-2′),110.9(C-2),84.1(C-7′),73.6(C-9),60.6(C-9′),56.5(-OCH3),54.0(C-8′),43.8(C-8),33.7(C-7)。以上数据与文献[13]报道一致,鉴定为落叶松脂醇。

化合物7:无色油状物,ESI-MSm/z:166.8[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:9.37(1H, s, H-10),6.75(1H, ddd,J=5.6, 2.8, 1.2 Hz, H-3),3.95(1H, dt,J=9.2, 5.0 Hz, H-5),2.94(1H, m, H-1),2.48(1H, dddt,J=18.8, 5.6, 5.0, 1.4 Hz, Hβ-4),2.42(1H, m, H-6),2.38(1H, ddt,J=18.8, 9.2, 2.8 Hz, Hα-4),2.02(1H, m, Hβ-9),1.72(1H, m, H-7a),1.55(1H, m, H-7b),1.50(2H, m, H-8),1.41(1H, m, Hα-9);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:196.0(C-10),149.5(C-3),146.0(C-2),68.9(C-5),44.1(C-6),38.6(C-1),33.2(C-9),31.5(C-4),26.2(C-7),25.5(C-8)。以上数据与文献[5]报道一致,鉴定为tsaokin。

化合物8:白色结晶,ESI-MSm/z:166.9[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:7.55(1H, d,J=8.0 Hz, H-6),7.53(1H, s, H-2),6.95(1H, d,J=8.0 Hz, H-5),3.97(3H, s, H-9),2.60(3H, s, H-8);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:196.7(C-7),150.4(C-4),146.4(C-3),130.2(C-1),123.8(C-6),113.4(C-5),109.7(C-2),56.1(C-9),25.6(C-8)。以上数据与文献[14]报道一致,鉴定为香草乙酮。

化合物9:无色油状物,ESI-MSm/z:168.2[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:7.43(1H, d,J=8.7 Hz, H-6),7.40(1H, s, H-2),6.83(1H, d,J=8.7 Hz, H-5),3.73(3H, s, -OCH3);13C-NMR(150 MHz,CD3Cl)δ:167.3(-COOH),151.1(C-4),147.1(C-3),123.5(C-6),115.1(C-2),112.7(C-5),55.3(3-OCH3)。以上数据与文献[15]报道一致,鉴定为香草酸。

化合物10:淡绿色油状物,ESI-MSm/z:278.8[M+H]+。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:4.30(4H, t, H-1, 1″),1.72(4H, m, H-2, 2′),1.46(4H, m, H-3, 3′),1.17(6H, td, H-4, 4′),7.55(2H, m, H-3″, 6″),7.75(2H, m, H-4″, 5″);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:167.7(C-7″, 8″),132.4(C-4″, 5″),130.9(C-1″, 2″),128.8(C-3″, 6″),65.5(C-1, 1′),30.6(C-2, 2′),19.1(C-3, 3′),13.7(C-4, 4′)。以上数据与文献[16]报道一致,鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。

化合物11:白色结晶,将其与β-谷甾醇通过TLC检识,发现两者在同一展开体系下有相同Rf值,并且混合熔点不降低,鉴定为β-谷甾醇。

4 讨论

本实验从草果中分离得到11个化合物,其中化合物3~5均有抗肿瘤作用[17-19]。草果化学成分复杂,需要深入研究以发现更多的新颖结构,以期为其药效基础及其他豆蔻属植物药理活性研究提供参考。

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