百蕊草水提液对AA肉鸡生长性能、免疫和抗氧化功能的影响

许 梦, 徐皓男, 周功强, 陈 浩

(1.安徽科技学院 动物科学学院,安徽 凤阳 233100;2.安徽科技学院 生命与健康科学学院,安徽 凤阳 233100;3.固镇县立业养殖专业合作社,安徽 固镇 233704)

2019年7月10日,中国正式出台了有关“饲料禁抗”的政策法规,畜禽养殖业进入“无抗时代”[1],因此,寻找“绿色、高效、无副作用”的替抗产品已经成为畜禽养殖业的研究热点。百蕊草是我国民间常用的中草药,且是具有较好的广谱抗菌作用,属檀香科、百蕊草属半寄生多年生草本植物[2],分布于我国南北各地区。百蕊草最早记载于《图经本草》中,性辛,味苦涩,性寒而平缓,归肺、脾、肾经,具有“植物抗生素”之美称[3]。百蕊草主要包含黄酮类、有机酸、生物碱、甾醇、鞣质、酚类、多糖、挥发油以及甘露醇等多种化学成分,具有抗菌消炎、清热解毒、通顺气脉、补肾涩精、调气等作用[4]。临床上多用来治疗呼吸道感染、各种肺炎、急性扁桃体炎、咽喉炎等病症,且具有广谱的抑菌作用[5]。苏兵[6]研究了百蕊草片对呼吸系统感染患者的临床治疗效果,证明了百蕊草对呼吸系统感染疾病具有良好的治疗效果。

百蕊草作为一种天然富含广谱抗菌成分的中草药,主要分布在我国南北各地,是安徽省传统优质道地药材代表之一,其中滁州产的百蕊草产品市场潜力巨大,对呼吸道感染疾病具有令人满意的效果,但国内外极少有关于百蕊草应用到肉鸡方面的研究报道,因此,本试验旨在研究不同浓度的百蕊草水提液对AA肉鸡生长性能、免疫功能、血清抗氧化功能的影响,探究其作为中草药饲料添加剂的功效,为推动畜禽健康养殖奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验百蕊草由安徽九华华源药业有限公司提供。百蕊草水提液的制备:称量1.25 kg干燥百蕊草置于锅内,加入25 L水浸泡1 h,煎煮30 min后过滤,药渣加12.5 L水,继续煎煮30 min后过滤,合并2次滤液,浓缩成5 L百蕊草水提液,置于4 ℃下保存备用。

1.2 试验设计

试验选择遗传背景相同、同一批次、体质量均匀、健康状况良好的1日龄健康AA肉鸡300只(购自嘉吉动物蛋白(安徽)有限公司),随机分为5组,分别为空白对照组、阳性对照组、0.075、0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液组,每组3个重复,每个重复20只。空白对照组在日常饲养中不添加抗生素和百蕊草水提液,阳性对照组在日常饲养中只使用抗生素不添加百蕊草水提液(抗生素种类见表1),百蕊草水提液组分别在饮用水中添加0.075、0.150和0.300 g/kg(百蕊草生药量/鸡体质量)的百蕊草水提液。饮水中添加百蕊草水提物分前期(8～21日龄)和后期(22～42日龄)2期进行。

表1 抗生素种类

1.3 试验饲粮及饲养管理

基础饲粮采用玉米-豆粕型日粮,参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)分两阶段配制,第Ⅰ阶段为1～21日龄,第Ⅱ阶段为22～42日龄,其组成及营养水平见表2(风干基础)。试验在安徽省蚌埠市固镇县立业养殖专业合作社进行。试验开始前彻底清扫消毒鸡舍,检查出风口和进风口,设置适宜的温度(20～30 ℃),确保饮水器能正常使用等,试验采用全封闭式笼养,鸡笼分为上、中、下3层。试验期间百蕊草水提液组在每天08:00—11:00饮水给药,其余时间自由饮水,采食、光照时间、免疫及日常管理等参照《爱拔益加商品代肉鸡饲养管理手册》。

表2 基础饲粮组成及营养水平

1.4 指标检测

1.4.1 生长性能 试验前以每个重复为单位称量空腹鸡只的体质量,并记录试验鸡只的初质量、末质量、采食量及剩余采食量,计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G),试验期间记录鸡只的死淘数以计算淘汰率。

1.4.2 免疫器官指数 第21、42日龄时,从各个组每个重复中随机选取2只鸡称其体质量,屠宰,剔除法氏囊、胸腺及脾脏周围脂肪,用生理盐水清洗后称重,记录数据,计算各免疫器官与体质量的比值,结果以免疫器官指数表示,免疫器官指数=免疫器官质量(g)/宰前活体质量(kg)。

1.4.3 血清免疫及抗氧化指标 第21、42日龄时,从每个重复中随机选取2只鸡,于翅静脉采血,静置后离心并吸取上层血清,于-80 ℃保存,待测。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量,试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。血清新城疫抗体效价采用ELISA法测定,试剂盒购自泉州市睿信生物科技有限公司。采用比色法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,采用WST-1法测定总超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,所有指标均按照试剂盒说明书测定,试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.5 数据处理

采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析,采用LSD法进行多重比较,结果用“平均值±标准差”表示,P<0.05表示差异显著,P<0.01为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 百蕊草水提液对AA肉鸡生长性能的影响

由表3可知,8～21日龄时,百蕊草水提液组AA肉鸡平均日增重、平均日采食量均极显著高于空白对照组(P<0.01),极显著降低了AA肉鸡的料重比(P<0.01);与阳性对照组相比,0.300 g/kg百蕊草水提液组AA肉鸡的平均日增重极显著提高(P<0.01),料重比极显著降低(P<0.01)。22～42日龄时,与空白对照组相比,百蕊草水提液组AA肉鸡的平均日增重、平均日采食量均极显著提高(P<0.01),料重比极显著降低(P<0.01);0.300 g/kg百蕊草水提液组AA肉鸡的平均日增重极显著高于阳性对照组(P<0.01),料重比极显著低于阳性对照组(P<0.01)。

表3 百蕊草水提液对AA肉鸡生长性能的影响

2.2 百蕊草水提液对AA肉鸡免疫器官指数的影响

由表4可知,21日龄时,与空白对照组相比,各百蕊草水提液组胸腺指数均极显著提高(P<0.01),阳性对照组胸腺指数显著提高(P<0.05),0.300 g/kg百蕊草水提液组脾脏指数显著提高(P<0.05),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液组法氏囊指数显著高于空白对照组(P<0.05);与阳性对照组相比,各百蕊草水提液组胸腺指数均极显著提高(P<0.01)。42日龄时,0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液组胸腺指数极显著高于空白对照组(P<0.01)和阳性对照组(P<0.01),0.075 g/kg百蕊草水提液组胸腺指数显著高于空白对照组(P<0.05),空白对照组与阳性对照组胸腺指数未见显著差异(P>0.05),0.300 g/kg百蕊草水提液组脾脏指数极显著高于空白对照组(P<0.01)和阳性对照组(P<0.01),0.300 g/kg百蕊草水提液组法氏囊指数显著高于空白对照组(P<0.05)。

表4 百蕊草水提液对AA肉鸡免疫器官指数的影响

2.3 百蕊草水提液对AA肉鸡血清中免疫指标的影响

由表5可知,与空白对照组相比,0.075、0.300 g/kg百蕊草水提液组极显著提高了21日龄AA肉鸡血清IgA含量(P<0.01),对21日龄AA肉鸡血清IgG和IgM含量无显著差异(P>0.05),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液组显著提高了AA肉鸡血清新城疫抗体效价(P<0.05),21日龄的0.075、0.300 g/kg百蕊草水提液组AA肉鸡血清IgA含量极显著高于阳性对照组(P<0.01)。在42日龄,各百蕊草水提液组AA肉鸡血清IgA含量与空白对照组无显著差异(P>0.05),但添加百蕊草水提液提高了AA肉鸡血清IgG和IgM含量,与空白对照组相比,添加0.075 g/kg百蕊草水提液可显著提高AA肉鸡血清IgM含量(P<0.05),各百蕊草水提液组极显著提高了AA肉鸡血清新城疫抗体效价(P<0.01)。

表5 百蕊草水提液对AA肉鸡血清中免疫指标的影响

2.4 百蕊草水提液对AA肉鸡抗氧化指标的影响

由表6可知,21日龄时,与空白对照组相比,各百蕊草水提液组极显著提高了AA肉鸡血清T-AOC、GSH-Px活性,极显著降低了MDA含量(P<0.01),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液组SOD活性极显著高于空白对照组(P<0.01),各百蕊草水提液组AA肉鸡血清T-AOC、SOD活性和GSH-Px活性均极显著高于阳性对照组(P<0.01),各百蕊草水提液组MDA含量与阳性对照组无显著差异(P>0.05)。42日龄时,各百蕊草水提液组AA肉鸡血清T-AOC、SOD活性和GSH-Px活性均极显著高于空白对照组(P<0.01),MDA含量均极显著低于空白对照组(P<0.01),0.150 g/kg百蕊草水提液组AA肉鸡血清T-AOC极显著高于阳性对照组(P<0.01),0.075、0.150 g/kg百蕊草水提液组AA肉鸡血清SOD活性极显著高于阳性对照组(P<0.01),0.300 g/kg百蕊草水提液组GSH-Px活性极显著高于阳性对照组(P<0.01),0.075 g/kg百蕊草水提液组MDA含量极显著低于阳性对照组(P<0.01)。

表6 百蕊草水提液对AA肉鸡抗氧化指标的影响

3 结论与讨论

3.1 百蕊草水提液对AA肉鸡生长性能的影响

中草药中富含多种成分,包括糖类、黄酮类、氨基酸、蛋白质、维生素、有机酸、鞣质、挥发油、生物碱、苷类等有效成分,可以提升动物的生长性能、肉品质、免疫功能及抗病能力等。肉鸡在养殖过程中生长品质好坏可以通过生长性能指标来观察,也是评估经济效益的重要指标。百蕊草作为一种天然富含广谱抗菌成分的草药,常用来治疗呼吸系统疾病,但其应用于肉鸡生产的研究尚未见报道。试验结果表明,在日常饲喂中添加百蕊草水提液对AA肉鸡的生长性能有一定的影响,对AA肉鸡日增重有所提高的同时降低了料重比,特别是随着添加剂量的提高,AA肉鸡的生长性能也在提高,可能是由于百蕊草水提液相较于其他中药味甜、适口性好[5],富含黄酮类有效成分,可有效改善AA肉鸡肠道营养物质的吸收率[7],提高了饲料利用率,从而使AA肉鸡的生长性能得到提高。

3.2 百蕊草水提液对AA肉鸡免疫器官指数的影响

免疫器官主要是由淋巴组织组成,按功能不同可分为中枢性免疫器官和外周免疫器官,鸡的中枢性免疫器官包括骨髓、胸腺和法氏囊,外周免疫器官包括脾脏、扁桃体、哈德氏腺、盲肠扁桃体、黏膜相关淋巴组织,其中脾脏是最大的周围免疫器官[8]。各种免疫功能的发育是以免疫器官的正常发育为基础的,通常可用器官的质量和指数来判断机体的发育状况、健康程度和免疫机能情况,动物在健康状态下,免疫器官指数越高,免疫功能则越强[9]。试验表明,在AA肉鸡饮水中添加百蕊草水提液可促进免疫器官发育,提高免疫器官指数,从而增强AA肉鸡的免疫力。梁英等[10]通过研究在饲粮中添加黄芩黄酮对肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响发现,黄芩黄酮能提高肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数,促进免疫器官的发育。上述研究与本研究结果相似,本试验中AA肉鸡的胸腺指数和脾脏指数随着百蕊草水提液含量的增加,呈现出升高的趋势,而对法氏囊的发育也有一定的促进作用。试验结果表明,不同剂量的百蕊草水提液极显著提高了整个试验期AA肉鸡的胸腺指数,添加0.300 g/kg百蕊草水提液组的AA肉鸡脾脏指数和法氏囊指数效果最好,但21日龄时AA肉鸡脾脏指数未达到显著水平,原因可能是生长前期肉鸡免疫器官发育迅速,营养消耗大,机体调节能力不完善,随着时间的增长,肉鸡的胸腺和法氏囊逐渐退化,脾脏则发挥重要作用。上述试验所用的黄芩含有较高的黄酮类化合物,黄酮类化合物能够增强动物机体抗病力,改善动物机体免疫机能。试验所添加的百蕊草水提液中同样含有黄酮类化合物,这可能是百蕊草水提液在AA肉鸡机体中发挥作用的原因,但具体的作用机制有待进一步验证。

3.3 百蕊草水提液对AA肉鸡血清中免疫指标的影响

血清免疫球蛋白是机体中一种具有抗体活性的球状蛋白,是机体免疫系统的重要组成部分,主要包括IgA、IgG和IgM[11]。IgA是外分泌液中主要的免疫球蛋白,能阻止微生物的入侵,参与机体局部黏膜免疫,具有十分重要的防卫屏障作用;IgG是鸡血液中含量最高的免疫球蛋白,具有抗菌、抗病毒和抗外毒素等多种活性;IgM作为血清中分子质量最大的免疫球蛋白,在机体的初始免疫保护中起重要作用[12],因此,血清免疫球蛋白含量的变化直接关系到动物的免疫功能。中草药能促进血清免疫球蛋白的产生和体液免疫应答反应,提高动物机体的免疫功能[13]。试验结果表明,在AA肉鸡的日常饲喂中添加百蕊草水提液不同程度提高了血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量,表明百蕊草水提液可通过提高血清中免疫球蛋白的含量增强AA肉鸡免疫功能。本试验各添加组免疫球蛋白含量均高于阳性对照组,说明添加不同含量的百蕊草水提液均可提高AA肉鸡的免疫性能,可能是因为百蕊草中含有多糖、黄酮等多种活性成分,促进机体的发育从而改善机体免疫功能[14]。

鸡新城疫是由新城疫病毒感染引起的禽类疾病,具有发病快、病程短、死亡率高的特点[15]。鸡新城疫是一种高度接触性传染病,如果鸡感染了这种疾病,会给养禽业带来巨大的经济损失,所以在家禽养殖过程中对这类疾病的预防和免疫是非常普遍的。注射新城疫疫苗后,肉鸡机体会产生免疫应答,进而分泌抗体,抗体效价越高,抗病能力越强[16]。试验表明,在日常饲喂中添加百蕊草水提液可显著提高21日龄和极显著提高42日龄AA肉鸡血清新城疫抗体效价,说明百蕊草水提液可能刺激了机体的免疫系统,从而促进机体新城疫抗体的产生,具体原因还需进一步试验验证。

3.4 百蕊草水提液对AA肉鸡抗氧化指标的影响

抗氧化剂是保护生物免受氧化损害的物质,根据来源分为外源抗氧化剂和内源抗氧化剂两类[17]。黄酮类化合物是一组公认的天然抗氧化剂,因为具有抑制自由基形成和清除自由基的能力[18]。已经有试验证实黄酮类化合物可以提高细胞内GSH-Px和SOD的水平[19]。试验所添加的百蕊草水提液中含有黄酮类物质,可以提高机体抗氧化能力,降低氧化损伤。动物机体抗氧化能力可以通过T-AOC、SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量来反映[20]。T-AOC是反映机体整体的抗氧化能力[21]。SOD可反映机体对于氧化损伤的缓解能力,是缓解氧化损伤的重要物质之一[22]。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的抗氧化酶,通过催化过氧化氢(H2O2)和脂质过氧化物的还原来减少脂质过氧化物的形成,增强机体抗氧化损伤能力[23]。MDA是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的产物,其含量可反映动物体受攻击的严重程度,从而反映动物机体的抗氧化能力,MDA含量越低,动物机体抗氧化能力越强[24]。李奎[2]通过体外抗氧化试验表明,百蕊草多糖有较强的清除羟基自由基、超氧阴离子自由基的能力,且具有一定清除DPPH自由基的能力,并有较高的抗氧化活性。本试验中,在AA肉鸡日常饲喂中添加不同浓度的百蕊草水提液显著或极显著提高了42日龄AA肉鸡血清SOD和GSH-Px活性及总抗氧化能力,极显著降低了21和42日龄AA肉鸡血清MDA含量。试验结果表明,饮水中添加百蕊草水提液可提高抗氧化酶活性,降低MDA含量,从而提高机体抗氧化能力,原因可能是百蕊草具有清除机体内过多的自由基的功效,保护机体免受自由基的损伤,从而来提高机体的抗氧化能力。综合试验前期和后期结果来看,在日常饮水中添加0.300 g/kg百蕊草水提液可增强AA肉鸡抗氧化能力,但药物最佳添加量有可能会随着品种和生长阶段的变化而变化,因此,在畜禽饲养中百蕊草水提液的添加量可根据品种、饲养阶段、饲养环境和特殊生理需要等各种因素做适当的调整。

综上,在日常饮水中添加0.075、0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液可提高AA肉鸡的生长性能、免疫器官指数、血清免疫球蛋白和抗氧化能力,具备在AA肉鸡中应用的可行性,适宜添加量为0.300 g/kg。