外科病理诊断中全自动微波辅助快速组织处理仪的临床应用价值

刘家斌 李凤银 上栗县人民医院 （江西 萍乡 337000）

内容提要： 目的：探讨全自动微波辅助快速组织处理仪在外科病理诊断中的临床应用价值。方法：收集2021年2月～2023年3月本院病理科经外科切除病检标本80例，所有标本在不影响常规病理诊断的前提下，于相同部位连续取材2块，同时根据不同处理方式分为观察组与对照组，各80例。对照组切片使用常规全封闭自动脱水机处理，观察组使用全自动微波辅助快速组织处理仪处理。比较两组切片质量及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、P16、Ki-67表达一致性。结果：比较两组切片合格率可得P＞0.05，差异无统计学意义；比较两组ER、PR、P16、Ki-67表达水平，两组ER、Ki-67表达水平一致，观察组PR阳性率略低于对照组，P16阳性率略高于对照组，经计算分析可得P＞0.05，差异均无统计学意义。结论：全自动微波辅助快速组织处理仪在外科病理诊断中的应用能够有效缩短组织处理时间，提升临床检测效率，同时不会影响切片质量及免疫组化指标表达解读，可用于辅助外科临床病理诊断工作。

病理诊断是疾病临床诊疗的重要参考依据，临床意义重大。组织处理是组织学制片的常用技术，在制片过程中起关键性作用，是外科病理诊断的重要步骤，直接关系组织切片质量。传统常规组织处理往往需要较长时间，一般情况下需经10～14h的过夜处理，患者至少需等待2～3d时间才能得到诊断结果，部分疑难杂症病例还需再进一步检查。但随着医院规模的不断扩大，需进行病理检查的患者增多，标本量不断增大，医院普遍出现病床周转率增高现象，病理诊断也需随之加快诊断时效，缩短标本处理时间，临床病理诊断对快速组织处理技术的需求日益增高[1-3]。全自动微波辅助快速组织处理是常规石蜡切片的快速处理技术之一，结合微波及真空技术，提高组织液对组织的渗透作用，充分发挥其脱水、透明作用，精简切片处理程序，缩短处理时间，提高出片效率[4,5]。当前关于经微波辅助快速组织处理后的切片质量的研究较少，本研究旨在探讨全自动微波辅助快速组织处理仪在外科病理诊断中对切片质量及免疫组化检验的影响，为其在临床诊断中的应用提供依据。

1.资料与方法

1.1 一般资料

收集本院病理科2021年2月～2023年3月经外科切除的病检标本80例，患者年龄均在25～65岁，术前均未接受其他治疗。病检标本包括乳腺标本20例，宫颈标本20例，子宫内膜标本40例，所有标本在不影响常规病理诊断的前提下，于相同部位连续取材2块，同时根据不同处理方式分为观察组与对照组，各80例。院内医学伦理委员会审核并批准此研究。

1.2 方法

将80 例组织放置于取材台进行标准化取材（大小为1.5cm×1.5cm×0.2cm），并使用4%浓度中性甲醛固定液固定30min，将组织装入包埋盒中。对照组使用全封闭自动脱水机处理，按照脱水机预设程序进行脱水处理。观察组使用全自动微波辅助快速组织处理仪处理。处理完毕后进行石蜡包埋，包埋过程中需注意包埋方向，保持组织垂直，将蜡块放置冰箱冷冻后，进行连续切片，切片厚度需保持在3～4μm，烤片后进行常规苏木精-伊红染色。

1.3 观察指标与判定标准

①切片质量。将切片交由2位病理医师进行显微镜阅片，依据《临床技术操作规范·病理学分册》[6]切片质量分级标准对切片质量进行评分：90分以上者等级为优、75～89分为良、60～74分为基本合格，59分以下者为不合格。汇总2位医师评分结果，记录并比较最终数据。总合格率=（优例数+良例数）/总例数。②雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）、孕激素受体（Progesterone Receptor，PR）、P16和Ki-67表达一致性。由2位临床病理医师对免疫组化检验结果进行判读，比较上述指标阳性表达率。其中，ER、PR、Ki-67阳性表达定位于细胞核，P16阳性表达定位于细胞核和（或）细胞浆。不着色（-）记为阴性，呈现浅黄色（+）、棕黄色（++）、深棕色（+++）情况均记为阳性，2位病理医师判断不一致时经讨论达成共识。对比两组组织切片中ER、PR、P16、Ki-67表达情况。③免疫组化染色图分析。

1.4 统计学分析

采用SPSS 23.0统计学软件分析数据，计数资料以n、%表示，采用χ2检验，以P＜0.05为有统计学差异。

2.结果

2.1 两种处理方式下切片质量对比

比较两组切片合格率可得P＞0.05，差异无统计学意义，见表1。

表1.两种处理方式切片质量对比(n=80,n/%)

2.2 两种处理方式下ER、PR、P16和Ki-67表达一致性对比

比较两组ER、PR、P16、Ki-67表达水平，两组ER、Ki-67表达水平一致，观察组PR阳性率略低于对照组，P16阳性率略高于对照组，经计算分析可得P＞0.05，差异均无统计学意义，见表2。

表2.两种处理方式下ER、PR、P16和Ki-67表达一致性对比(n=80,n/%)

3.讨论

病理诊断是组织学、病理学、胚胎学、细胞学等领域内评估组织或细胞性质、分级的重要手段，但大多数组织结构在自然状态下无法被观察分析，其内部结构显示较差，需要对组织结构进行一定的固定、脱水处理。在当前外科病理诊断中，免疫组化的应用十分广泛，作为不可或缺的检测技术，免疫组化为肿瘤组织的分型、诊断、预后判断、临床治疗指导均提供了重要的依据，良好组织处理是免疫组化染色的先决条件。传统组织处理中包含甲醛固定、酒精脱水、二甲苯透明浸蜡、石蜡包埋、切片染色等步骤，需10～14h处理时间，尽管耗时较长，但处理效果较为稳定可靠[7]。随着临床肿瘤诊疗工作量的不断提高，优化组织处理工作程序、缩短病理诊断时间成为临床外科病理诊断所亟需解决的问题[8,9]。当前快速组织处理技术不断涌现，对其处理结果的评估对后续诊疗工作十分重要。

全自动微波辅助快速组织处理仪利用微波及真空渗透技术，大大缩短组织处理时间，将传统组织处理时间10～14h缩短至1.5h，同时支持批量加载，有效提高出片效率。除此之外，全自动微波辅助快速组织处理仪还具备一定的环保优势，其所使用的一体化环保试剂同时具备脱水与透明效果，其作用相当于常规组织处理中乙醇与二甲苯的效用，应用该一体化试剂后，能够有效避免实验室人员接触甲醛、二甲苯等毒害物质，毒性较低且不易挥发，易降解，能够从最大限度上保护实验室人员的身体健康[10]。本研究中，经全自动微波辅助快速组织处理仪处理的组织切片与传统常规全封闭自动脱水机处理切片质量相当。分析其原因在于：微波与超声波均能够有效提高组织通透性，有利于溶剂与细胞内水分的交换，提高溶液穿透力，同时，微波可直接作用于组织细胞，迅速完成含双硫键的蛋白质变性，抑制减少可溶性蛋白质溶解，有效保护细胞中的结构蛋白及各类抗原。当前已有大量研究证明，超声快速组织处理能够获取较好的染色效果[11,12]。微波属于电磁波的一种，对组织的穿透作用较强，其高频振动下所产生的能量能够快速固定组织，缩短组织固定时间，同时微波辐射还有助于提高组织细胞通透性，微波状态下，溶液中的极性分子快速运动，穿透力大大增强，水分交换效率提升，有利于组织脱水、透明、浸蜡，微波处理能够完整保存组织形态结构及抗原活性，为免疫组化检测提供良好基础。

在乳腺癌诊疗中，ER、PR具有重要意义。若乳腺上皮细胞发生癌变，ER、PR均会出现一定缺失，若细胞中仍保留有ER、PR表示癌细胞的生长仍受内分泌调控，两者同为阳性时，乳腺癌患者预后情况最佳，患者术后可采取内分泌治疗手段，单个阳性中，雌激素阳性患者预后较孕激素阳性患者更好，两者同为阴性时患者预后最差，因此，ER、PR表达水平检测对患者预后判断及治疗方法指导具有重要意义。P16是细胞周期素依赖性的蛋白激酶抑制剂，是宫颈活检、乳腺癌检查中的常规免疫组化指标，P16阴性表达患者大多都是炎症性病变，若P16出现阳性表达，则表示患者极可能出现癌前病变，在肿瘤诊断中具有重要意义。Ki-67属于核抗原，其参与DNA合成，与细胞增殖周期密切相关，于人体细胞周期G1期开始出现表达，至M期达到峰值，细胞分裂晚期消失，脱离细胞周期后又能够快速降解，因此能够作为测定肿瘤细胞增殖活性的标志物，反映细胞增殖情况，在恶性肿瘤中的发展及预后判断中具有一定价值，同时将其作为乳腺癌肿瘤增殖活性评估标志物，灵敏度与特异度较好，可较好判断患者预后结果。上述指标均为免疫组化常用指标，对患者疾病诊断、预后判断、治疗指导具备重要意义。本研究中，经全自动微波辅助快速组织处理仪处理，苏木精-伊红染色结果与经常规全封闭自动脱水机处理组织切片相比没有显著差异，提示经全自动微波辅助快速组织处理，切片免疫组化染色较为理想，阳性定位较为准确，阳性表达无显著差异。本研究中，两组PR、P16表达略有差异，分析其原因可能在于手工免疫组化染色所致，免疫组化染色步骤较多，受多因素干扰影响，其操作流程标准化、规范化十分关键，此外也可能与切片位于肿瘤边缘相关，导致其表达结果出现差异。因此，在进一步工作中需严格规范标准化标本送检、切片切取部位等操作，进一步完善各项检测。

综上，全自动微波辅助快速组织处理仪在外科病理诊断中的应用能够有效缩短组织处理时间，提升临床检测工作效率，同时不会影响切片质量及免疫组化指标表达解读，可用于辅助外科临床病理诊断工作，后续可根据实际情况选择应用。