毕赤
- 毕赤酵母表达系统及其发酵策略
350117）毕赤酵母（Pichia pastoris）因其生长快、蛋白表达效率高，且易于进行分子遗传学操作等优良特点，被认为是工业上最重要的外源蛋白生产宿主之一。毕赤酵母表达系统作为一种优秀的真核表达系统，不仅能够有效的对外源蛋白基因进行转录和翻译，而且拥有蛋白质折叠、糖基化和分泌的必要细胞机制，可以用来生产与天然蛋白在生理、生化功能上非常接近的蛋白。外源蛋白可由醇氧化酶1（alcohol oxidase 1,AOX1）基因启动子诱导表达，并且其自身蛋
福建轻纺 2023年10期2023-10-27
- 微生物干预降低酱香型白酒酿造中的乳酸
酵母的抑制作用。毕赤酵母是白酒发酵中最常用的产酒功能菌株之一,在汾酒酒醅发酵前期毕赤酵母占真菌群落的60%以上[9],白云边出入窖酒醅中,毕赤酵母属占比约为40%[10],酱香型白酒酿造酒醅中毕赤酵母在前期轮次中占比大于80%[11]。毕赤酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养以及含有多种蛋白质、氨基酸、维生素、生物活性物质等丰富营养成分的优点,是基础研究及应用研究的主要对象,广泛应用于食品、医药等领域[12]。研究发现,毕赤酵母有一定的降解乳
食品与发酵工业 2023年15期2023-08-15
- 毕赤酵母对甲醇胁迫的响应及其对蛋白表达的影响
550000)毕赤酵母(，最新系统命名为)是当今科研和商业化生产重组蛋白最常用、最受欢迎的表达平台之一。毕赤酵母具有良好的生物安全性、易高密度培养、高转录活性的启动子、较强的蛋白合成分泌能力、胞外产物易分离纯化及与更高级真核细胞类似的翻译后修饰等诸多优点。毕赤酵母相比酿酒酵母()而言，其表达分泌蛋白的能力更卓越。蛋白高水平表达技术和策略一直是该领域的研究热点，当前，提高蛋白表达的主要技术有：一是优化发酵条件，包括培养基优化、诱导策略优化、高密度培养等手段
安徽农业科学 2022年16期2022-09-02
- RT-qPCR分析拷贝数及mRNA转录水平对表达左聚糖蔗糖酶的影响
coli）相比，毕赤酵母（Pichia pastoris）的安全性更好，已被认定为一般公认为安全（generally recongnized as safe，GRAS）微生物[7]。毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统是当前最有效、最方便、最广泛的外源蛋白表达系统之一[8-9]，其具有安全性好[10]、外源基因可稳定存在[11]、可实现分泌表达和适合工业化生产[12]等优点，毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统已在食品、医药和工
中国酿造 2022年4期2022-06-22
- Microbacterium sp.XT11黄原胶内切酶在毕赤酵母中的异源表达、性质及应用
制了大规模应用。毕赤酵母(Pichiapastoris)是一种成熟的蛋白表达宿主，在毕赤酵母中胞外表达的酶具有更高的生产率和纯度，操作相对比较简单且成本较低，主要用于生物制药和工业酶的生产[12-13]。合适的启动子能使外源蛋白高效表达，毕赤酵母的启动子分为诱导型启动子和组成型启动子，其中AOX1和GAP最为常用[14]。本研究首次将来自Microbacteriumsp.XT11的黄原胶内切酶，以毕赤酵母GS115为表达宿主进行异源表达。并对其启动子及发酵
食品与发酵工业 2022年6期2022-04-01
- 毕赤酵母产类人胶原蛋白发酵条件的优化
白就更加受重视。毕赤酵母是一种著名的甲基营养型蛋白质表达系统。它具有基因操作成熟,高密度发酵,可以对目的蛋白进行类人的糖基化、二硫键形成等后修饰[15]。毕赤酵母的分泌表达模式也有利于重组蛋白的纯化[16-17]。本研究利用已构建的表达类人胶原蛋白的重组毕赤酵母菌株,进行发酵优化以显著提高类人胶原蛋白的表达量,为重组胶原蛋白在食品工业中的应用奠定基础。1 材料与方法1.1 菌株和试剂重组毕赤酵母GS115-Collagen由本实验室构建并保藏；酵母粉、蛋白
食品与发酵工业 2022年3期2022-02-23
- 基于开源和节流两种策略的耐高渗毕赤酵母菌株的构建
4122)巴斯德毕赤酵母(Komagataellaphaffii)是一种甲醇营养型酵母，其特有的醇氧化酶1(alcohol oxidase 1，Aox1)可以代谢甲醇，使其能在甲醇为唯一碳源的培养基中生长[1]。毕赤酵母具有可严紧调控，可高密度发酵，可翻译后修饰等诸多优点，因而被开发为现在应用最为广泛的重组蛋白表达系统之一。至今已有抗菌肽[2]，病毒样颗粒[3]，牛胃溶菌酶[4]，普鲁兰酶[5]等多种外源蛋白成功在毕赤酵母中表达。但毕赤酵母对渗透压胁迫的抵
食品与发酵工业 2021年24期2022-01-13
- 毕赤酵母新型反向筛选标记基因的鉴定
引言甲醇营养型毕赤酵母(Pichiapastoris)作为目前生产重组蛋白最重要的表达系统之一，具有分子遗传简单、能够对表达的蛋白进行翻译后修饰等优点[1]．随着分子生物学的发展，在基因水平对毕赤酵母进行基因改造成为研究毕赤酵母基因功能的主要手段．对于酵母菌的遗传操作中，经常使用标记基因来筛选重组菌株，然而目前应用广泛的标记基因主要是编码抗生素的基因[2]．对于毕赤酵母而言，能够被实际运用于基因工程的标记基因数量有限，而且进行多次基因操作时，由于可供选择
湖北大学学报(自然科学版) 2022年1期2022-01-05
- 不同来源抗冻蛋白在毕赤酵母中的异源表达
十分困难[8]。毕赤酵母表达系统既有原核生物分子基因操作与生长的特征，又具备真核生物翻译后蛋白修饰的亚细胞机制，是目前应用最广泛的真核表达系统[9]。毕赤酵母表达系统主要具有以下优点：(1) 外源基因通过表达载体整合到酵母基因组上，基因工程菌的遗传稳定性良好[10]；(2) 所得目的蛋白易于分离纯化[11]；(3) 不存在内毒素残留问题[12]；(4) 所得目的蛋白具有天然的高级结构和生物活性[13]；(5) 具有酿酒酵母系统的优点，可进行高密度发酵，易于
河南工业大学学报（自然科学版） 2021年5期2021-11-15
- 柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达
MIC4N，利用毕赤酵母(Pichiapastoris)表达rEtMIC4N，为后续其免疫原性研究打基础。1 材料和方法1.1 材 料柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，北京农学院病理实验室保存。pGEM-T克隆载体、表达载体pPICZαA、大肠杆菌JM109、毕赤酵母GS115、Trizol为Invitrogen公司产品，M-MLV反转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs、Oligo(dT)15、Rnasin、DNA胶回收试剂盒为TaKaRa产品。1.2 方 法
北京农学院学报 2021年3期2021-09-18
- α-法尼烯在巴斯德毕赤酵母中的生物合成
宿主相比，巴斯德毕赤酵母表达系统成本低、周期短、表达量高且可高密度培养，具有大规模生产α-法尼烯的潜力。一些研究已经证明，巴斯德毕赤酵母是生产类异戊二烯的合适宿主[10]。然而，目前没有报道描述巴斯德毕赤酵母中α-法尼烯的异源生产。在本项研究中，首先成功构建了产α-法尼烯的巴斯德毕赤酵母重组菌株。然后揭示了巴斯德毕赤酵母甲羟戊酸途径和α-法尼烯合成途径中限速步骤。之后对限速酶组合过表达并优化基因拷贝数以平衡代谢途径逐步提高α-法尼烯产量。最后通过外源添加不
食品与发酵工业 2021年16期2021-08-31
- 一种通过过表达毕赤酵母翻译相关因子提高重组蛋白胞内表达的策略
0006）巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是重组蛋白表达生产的优良宿主，它被美国食品药物管理局认定为GRAS（通常认为安全的）级微生物[1]，且具有遗传操作简便、培养成本低、有接近高等真核生物的蛋白质翻译后加工和修饰能力[2,3]、可进行高密度发酵[4,5]等优点。此外，毕赤酵母还具有甲醇诱导型强启动子PAOX1，在以廉价碳一化合物甲醇为唯一碳源的条件下，由PAOX1启动的AOX1蛋白可达到胞内总蛋白的30%[6]。大量研究实例证明，除了在
现代食品科技 2021年7期2021-07-27
- 毕赤酵母醇氧化酶2启动子上游调控序列的随机突变研究
海 200093毕赤酵母(Komagataellaphaffii,曾命名Pichiapastoris) 是能够利用甲醇作为唯一碳源生长的甲基营养型微生物，是目前一种重要的表达外源蛋白的工业微生物[1]。其过氧化酶体中的醇氧化酶1(AOX1)和醇氧化酶2(AOX2)将甲醇氧化为甲醛。醇氧化酶对甲醇和氧气的亲和力比较低[2,3]，因此，需要大量的醇氧化酶来代谢甲醇。但是PAOX1和PAOX2都受甲醇严格调控，调控机制相同[4,5]。毕赤酵母在含有葡萄糖、乙醇、
工业微生物 2021年3期2021-06-30
- 毕赤酵母对断奶仔猪采食量等指标的影响
春 130062毕赤酵母的主要成分为破壁酵母，其中含有丰富的甘露聚糖、酵母核苷酸、葡聚糖、游离氨基酸以及各种维生素、有机微量元素等物质，可以起到干扰有害菌定植、促进有益菌繁殖、提升饲料适口性、增强动物免疫力的功能，是最新一代绿色环保型饲料添加剂。1 材料与方法毕赤酵母实验室培养并处理。选取40头健康、体重相近的断奶仔猪，随机分组，每组10头。仔猪饲料组成见表1，试验组分别添加1.0 kg/t、1.5 kg/t和2.0 kg/t的毕赤酵母，饲料均制成颗粒体。
吉林畜牧兽医 2020年11期2020-12-30
- lys1-d缺陷型标记介导毕赤酵母超高拷贝质粒整合
功能，甲醇营养型毕赤酵母已经成为生产重组蛋白最重要的表达平台之一[1-2].为了进一步提高毕赤酵母中外源蛋白的产量，研究者们已经提出了很多策略，其中最普遍的一个策略就是通过引入多个拷贝的外源基因来提高mRNA的水平[3].很多蛋白表达的实例已经显示这一策略能显著增加毕赤酵母重组蛋白产量[4-5].但是，这需要通过构建含有多拷贝外源基因的表达菌株来实现.传统构建毕赤酵母多拷贝菌株的方法有两种：第一种方法是通过体外构建含有多个重复外源基因表达盒的载体，然后将其
湖北大学学报(自然科学版) 2020年5期2020-09-11
- 基于代谢工程构建产β-胡萝卜素重组毕赤酵母
业化[8-9]。毕赤酵母表达系统成本低、周期短、表达量高且可高密度培养，为大规模生产β-胡萝卜素带来了希望[10-12]。ARAYA-GARAY等[12]首次构建了异源表达欧文氏菌类胡萝卜素相关基因的巴斯德毕赤酵母突变菌株，所得菌株的β-胡萝卜素产量仅为339 μg/g(DCW)。我们预测，引入锁掷酵母类胡萝卜素途径可以获得更高β-胡萝卜素产量的重组巴斯德毕赤酵母。本研究首次克隆来自锁掷酵母的类胡萝卜素基因并在巴斯德毕赤酵母中异源表达以产生β-胡萝卜素，并
食品与发酵工业 2020年11期2020-06-15
- 巴斯德毕赤酵母MAPK/HOG信号通路的分子互作研究
子。甘油是巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)广泛应用的碳源[10]，高浓度甘油形成的高渗环境，影响细胞周期和细胞代谢。而针对毕赤酵母MAPK/HOG信号通路的研究很少，因此不能很好地解决上述问题，这对此系统的应用十分不利。与酿酒酵母相比，毕赤酵母中的Hog1具有85%的同源性，然而Hot1、Msn2/4和Sko1等Hog1的主要转录因子同源性却很低。这表明，毕赤酵母MAPK/HOG信号通路可能已经发生了很大的变化，响应高渗的机制也相应改变。本研
生物学杂志 2020年3期2020-06-12
- 重组人源胶原蛋白制备关键技术研究
015）采用巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6 进行高密度发酵，获得细胞外分泌型重组人源胶原蛋白。 SDS-PAGE 电泳分析证明：RHSC 具有确定的相对分子质量， 分别约为56 000 的蛋白质单体与112 000 的二聚体。实验中运用透析法、盐析与柱层析结合法对工程菌的发酵上清液进行纯化。 侯增淼等（2019）为了获得可实现工业化生产的重组人源性胶原蛋白，根据人Ⅰ型胶原蛋白Gly-X-Y 序列， 优选亲水性的Gly-X-Y 胶原肽段设
食品与生物技术学报 2020年2期2020-01-05
- D-氨基酸脱氢酶在不同宿主中发酵产酶条件优化
DH的大肠杆菌和毕赤酵母。大肠杆菌的细胞壁含有D-氨基酸，DAADH会分解D-氨基酸，从而使大肠杆菌破胞，导致清液酶活升高，不利于下游提取纯化，也限制了细胞内酶活提升，但大肠杆菌发酵时间短。毕赤酵母属于真菌，真菌细胞壁中不含D-氨基酸，DAADH不会使毕赤酵母产生破胞问题，但发酵时间长。笔者旨在通过对大肠杆菌产DAADH和毕赤酵母产DAADH的发酵工艺条件进行优化，为工业生产提供参考依据。1 材料与方法1.1 菌 种大肠杆菌BL21(DE3)、毕赤酵母X-
发酵科技通讯 2019年4期2020-01-03
- 毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径
相关基因信息，对毕赤酵母基因组信息分析发现，毕赤酵母细胞中可能同时存在OAS途径、OAH途径、转硫途径及逆转硫途径。图1 不同类型酵母含硫氨基酸生物合成途径Fig.1 Different pathways of sulfur amino acid synthesis and transsulfuration in yeast species1 材料与方法1.1 菌株、质粒、培养基菌株：毕赤酵母SMD1186（作者所在实验室保存）及以SMD1168为出发菌株
食品与生物技术学报 2019年7期2019-10-30
- 废弃毕赤酵母核糖核酸提取条件的优化
6]。甲醇营养型毕赤酵母（Pichia pastoris）是能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌，作为一类优秀的表达系统，除了具有蛋白质的加工和折叠等真核表达系统所共有的优点外，还兼具诸如大肠杆菌等微生物的易于操作的特点；与动物细胞等真核表达系统相比，它具有简便、快捷、成本低、表达水平较高等优点。毕赤酵母表达系统已被广泛应用于植酸酶、木聚糖酶、白蛋白等产品生产基因工程菌的构建[7-10]，并实现了这些产品的工业化生产。在生产过程中会产生大量的毕赤酵母菌体
浙江化工 2019年4期2019-05-13
- 毕赤酵母甘露寡糖对大肠杆菌攻毒断奶仔猪免疫细胞数量的影响
损伤条件下，研究毕赤酵母甘露寡糖对断奶仔猪生产性能、肠上皮细胞内免疫细胞数量变化与分布的影响，探讨毕赤酵母甘露寡糖的作用机理。1 材料与方法1.1 试验材料本试验所使用的毕赤酵母甘露寡糖标识含量为：甘露糖≥15%、甘露寡糖≥20%、蛋白质≥25%，水分≤6%和粗灰分≤2%。1.2 试验动物分组与日粮本试验选用48头平均体重为7.34 kg的健康断奶仔猪，共饲养24 d。试验初期分为两个日粮处理组：对照组和0.2%毕赤酵母甘露寡糖组，对照组饲喂基础日粮，试验
饲料工业 2019年6期2019-04-08
- 毕赤酵母中tRNA基因的表达及其作用效果
目前应用较广泛的毕赤酵母真核表达系统中还未有相关研究报道。为了实现在毕赤酵母中提高稀少tRNA丰度提高外源基因表达量的目的，需要获得准确的毕赤酵母稀少tRNA基因。目前，tRNA基因主要依靠软件预测技术进行发掘，其中应用最为广泛的是tRNAScan-SE软件[19]。其预测结果被大多数基因组作为测序分析tRNA基因的注释依据而采用。但由于真核生物tRNA基因的转录后修饰较为复杂，依靠识别基因组中tRNA基因的第34–37位碱基作为反密码子的预测方式偏差较大
生物工程学报 2019年1期2019-01-30
- 传统食品“稻庭面条”内部的空洞和龟裂之作用
条的面劲儿里添加毕赤酵母M2，放几小时即可变软，抻拉性增强，很适合做面条，且面条的内部会形成比较大的空隙，这是稻庭面条所特有的。如果不添加毕赤酵母，做成的面条其间空隙很小。面条煮的时间长短与盐的含量有关，为此监测了煮面条过程中溶出的盐含量，计算式是（煮汤里盐的最终浓度）-（面汤随煮时间盐浓度的变化值）。将添加和不添加毕赤酵母的面条进行比较，发现添加了毕赤酵母的面条断面发生龟裂和空隙，而未添加一方的断面没有龟裂。前者由于有龟裂和较大空隙，不仅盐的溶出速度加快
中国酿造 2019年5期2019-01-14
- 毕赤酵母甘露寡糖对母猪及仔猪生产及免疫性能的影响
期母猪提供来源于毕赤酵母细胞壁的甘露寡糖产品，研究其对母猪的繁殖性能、血清、初乳成分以及后代仔猪生产性能的影响来探讨毕赤酵母甘露寡糖的适宜添加量，为毕赤酵母甘露寡糖的合理使用提供理论依据[1]。1 材料与方法1.1 试验材料本试验所使用的毕赤酵母甘露寡糖来由北京华美源生物科技有限公司提供，产品标识含量为：甘露糖≥15%，甘露寡糖≥20%，蛋白质≥25%，水分≤6%，粗灰分≤2%。1.2 试验设计本试验选用胎次在2～4胎、分娩日期相近、妊娠日龄为85 d的二
饲料博览 2018年10期2018-11-20
- 海洋源金属硫蛋白毕赤酵母重组菌株的构建及其表达活性研究
的热点研究方向。毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统具有优良特性，是目前广泛应用的微生物表达系统之一，作为真核生物，其不仅具备原核表达系统的繁殖速度快、操作简单及价格低廉、外源蛋白表达量高等优点，还能够对外源蛋白进行翻译后加工、折叠及修饰，自身分泌的蛋白质少便于分离纯化，更适用于大批量发酵生产。目前，已有多种外源基因在巴斯德毕赤酵母表达系统中成功地重组表达[5-7]。底栖双壳类海洋动物为滤食性生物，对重金属有较强的生物富集能力，其体内MT基因
吉林农业科技学院学报 2018年3期2018-10-10
- 非甲醇诱导重组毕赤酵母表达木聚糖酶的条件优化
表达[2-3]。毕赤酵母(Komagataellaphaffii)是一种较为理想的外源蛋白表达宿主[4]，它以甲醇为唯一碳源而生长。甲醇诱导的醇氧化酶启动子AOX1能大量表达醇氧化酶。毕赤酵母作为真核表达宿主的优点可以总结如下：(1)具有醇氧化酶AOX1基因启动子，这是目前最强，调控机理最严格的启动子之一；(2)表达效率高,其表达的外源蛋白可占总表达蛋白的90%以上,有利于目的蛋白的分离纯化；(3)类似于细菌表达系统，酵母的生长是快速和便宜的，而且酵母细胞
食品与发酵工业 2018年3期2018-04-12
- 食品用酶毕赤酵母表达载体的构建
圳 518102毕赤酵母由于其强大的分泌表达能力，已经成为最常用的真核表达系统，利用毕赤酵母表达各种的蛋白和酶类已广泛应用于医药、工业和食品等领域[1]。此外，毕赤酵母已被美国食品药品管理局（FDA）认定为 GRAS（GenerallyRecog⁃nized as Safe）微生物，毕赤酵母表达的乳糖酶也在国内被批准用于食品行业。可以预期，越来越多的食品用酶将可以通过毕赤酵母生产。对于食品用酶而言，其安全评价至关重要，不仅要求生产菌株的安全性，而且还要求其
生物技术通讯 2018年2期2018-04-09
- 毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展
238000）毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展蒋慧慧（巢湖学院，安徽 巢湖 238000）毕赤酵母是真核细胞常用表达系统之一，具有细胞密度高、纯化方法简单、转录后修饰功能完善等优点。作为重要的调控元件，表达系统中启动元件的功能强弱与表达效率的高低密切相关。目前，毕赤酵母表达系统中常用的启动元件分为三类，分别是以pAOX为代表的甲醇诱导型、以pGAP为代表的非甲醇诱导型，还有一些新型工业酵母启动子也是理想的表达系统启动元件。充分了解这些酵母启动子的最新
巢湖学院学报 2017年3期2017-08-12
- 一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法
，吴静一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法梁晨晨1,2，王立1,2，罗秋玲2，吴静11 江南大学药学院，江苏无锡 214122 2 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122梁晨晨,王立, 罗秋玲, 等. 一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法. 生物工程学报, 2017, 33(7): 1178–1189.Liang CC, Wang L, Luo QL, et al. A method to increase the producti
生物工程学报 2017年7期2017-08-01
- 毕赤酵母分泌表达JEV prME蛋白及其形成病毒样颗粒的免疫原性鉴定
范浩杰，曹瑞兵毕赤酵母分泌表达JEV prME蛋白及其形成病毒样颗粒的免疫原性鉴定赵鹏，江雅，王经满，范浩杰，曹瑞兵南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室，江苏南京 210095赵鹏, 江雅, 王经满, 等. 毕赤酵母分泌表达JEV prME蛋白及其形成病毒样颗粒的免疫原性鉴定. 生物工程学报, 2017, 33(5): 863–874.Zhao P, Jiang Y, Wang JM, et al. Secreted expression o
生物工程学报 2017年5期2017-07-05
- 离心法分离毕赤酵母活细胞和死细胞
93离心法分离毕赤酵母活细胞和死细胞刘泰瑜， 冯 豪， 张建国*上海理工大学食品科学与工程研究所，上海 200093本文以毕赤酵母为研究对象，探索出一种分离活酵母细胞的新方法。研究发现，通过改变淋巴细胞分离液和50%聚蔗糖溶液的比例，获得不同密度的酵母细胞分离液，进而通过离心分层的方法可使毕赤酵母活细胞主要存留于离心液的上层。当酵母细胞分离液的密度为1.1467 g/mL(27.5% 淋巴细胞分离液+72.5%聚蔗糖溶液)，分离液上下层中酵母活细胞的分配
工业微生物 2016年5期2016-11-11
- TTC比色法筛选高存活率的毕赤酵母突变株
法筛选高存活率的毕赤酵母突变株刘胜男，张燕，刘泰瑜，许可，张建国(上海理工大学 食品科学与工程研究所，上海 200093)采用TTC比色法筛选高存活率毕赤酵母NTG突变株，探讨了pH值、菌体浓度(OD600)、反应时间、细胞存活率等对TTC显色反应的影响，并与平板计数法进行比较。结果表明，在pH值为4.0～7.0或菌体浓度(OD600)低于50.00时，pH值、OD600均与1,3,5-三苯基甲臜(TPF)生成量(OD485)呈线性正相关关系；反应时间超过
化学与生物工程 2016年10期2016-11-10
- His标签的水稻硅转运蛋白表达载体的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达
的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达林红梅1,3, 方长旬1,3, 林瑞余1,3, 何建宇2,3, 林伟伟1,3, 李颖哲1,3, 林文雄1,3(1.福建农林大学生命科学学院；2.福建农林大学作物科学学院；3.福建省农业生态过程与安全监控重点实验室，福建 福州 350002)以水稻根系cDNA为模板，PCR扩增含His标签的Lsi1基因开放阅读框，并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9k中，PCR及测序验证重组质粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.
福建农林大学学报（自然科学版） 2016年5期2016-10-26
- 毕赤酵母干粉吸附还原氯金酸制备金纳米颗粒
，因此，本文利用毕赤酵母干粉还原氯金酸制备金纳米颗粒。1 实验部分1.1 试剂与仪器氯金酸、无水乙醇、氢氧化钠、盐酸、葡萄糖均为分析纯;大豆蛋白胨，生化试剂。SHZ-82 气浴恒温振荡器;SPX-150B-Z 生化培养箱;YX-280D 高压灭菌锅;SW-CJ-1FD 超净工作台;SHZ-82 恒温振动器;BS124 电子天平;SIGMA3-18K 冷冻离心机;Cary 5000 紫外可见近红外分光光度计;TAS-986 原子吸收分光光度计;TECNAI
应用化工 2015年5期2015-12-24
- 毕赤酵母甘露寡糖对断奶仔猪生产性能肠道绒毛和细胞因子的影响
100193）毕赤酵母甘露寡糖对断奶仔猪生产性能肠道绒毛和细胞因子的影响李玉欣，张立梅，韩丹丹，张诗瑶，丁来弟，韩 博（中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193）为了研究不同剂量毕赤酵母甘露寡糖对断奶仔猪生产性能、肠道肠绒毛形态结构和细胞因子的影响，本试验选取144头28日龄平均体重为7.17±0.16 kg的断奶仔猪，分别给予3个日粮处理：对照组C、0.1%毕赤酵母甘露寡糖组T1和0.2%毕赤酵母甘露寡糖组T2，试验周期28 d。结果显示，处理
中国兽医杂志 2015年11期2015-12-08
- Effects of Mutagenesis by UV lrradiation and60Co-γ lrradiation on Fermentation of Xylose to Ethanol by Pichia stipitis
pitis（树干毕赤酵母发酵木糖生产燃料乙醇）［J］.Liquor-making（酿酒），2009（1）:23-26.［7］ZHONG GF（钟桂芳），FU XH（傅秀辉），SUN JS（孙军社），et al.Advance in producing ethanol by xylose-fermenting and its prospect（发酵木糖生产酒精的研究进展及其应用前景）［J］.Journal of Microbiology（微生物学杂志），20
- 基于基因组序列的树干毕赤酵母生理特性解析
基因组序列的树干毕赤酵母生理特性解析刘 婷1，2，刘立明1，史仲平2（1.江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122；2.江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122）树干毕赤酵母作为一种潜在的纤维素乙醇生产菌株，有其独特的生理优势。然而与酿酒酵母生产乙醇相比，树干毕赤酵母生产纤维素乙醇还存在着诸多阻碍。为了从细胞整体水平进一步解析树干毕赤酵母的生理代谢特征，基于树干毕赤酵母的全基因组序列，利用生物信息学的分析算法
生物加工过程 2015年1期2015-11-11
- 毕赤酵母表达系统发展概况及趋势
朱泰承，李寅毕赤酵母Pichia pastoris目前已是仅次于大肠杆菌的最常用蛋白表达系统，广泛应用于实验室规模的蛋白质制备、表征以及结构解析等方面，已有上千种蛋白在毕赤酵母系统中得到成功地表达。近些年，毕赤酵母被美国FDA认定为GRAS (Generally recognized as safe) 微生物，为其在食品和医药上的应用铺平了道路。在医药蛋白领域，已有胰岛素、乙肝表面抗原、人血清白蛋白、表皮生长因子等多种蛋白使用毕赤酵母表达实现商品化制备[1
生物工程学报 2015年6期2015-02-15
- 内切葡聚糖酶与木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达
糖酶与木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达刘高磊1， 胡 蝶2， 邬敏辰*3， 殷 欣2， 汪俊卿2（1.江南大学 药学院，江苏 无锡 214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122；3.江南大学 无锡医学院，江苏 无锡214122）为实现内切葡聚糖酶和木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达，进而降低酶制剂的生产成本，构建含木聚糖酶基因的重组表达载体pPICZαA-Aoxyn11A，经Sac I线性化后，电转化至含内切葡聚糖酶基因Aucel12A
食品与生物技术学报 2015年3期2015-01-06
- 基于文献的毕赤酵母研究趋势分析*
，200093)毕赤酵母是一种能利用甲醇为碳源的甲基营养型微生物［1］。经过几十年的研究，它已经是药物蛋白、酶及积累代谢中间体的热门来源之一［2-5］。毕赤酵母高密度发酵后细胞干重达到130 g/L［6］，适用于单细胞蛋白的生产。此外，它富含甲硫氨酸、色氨酸等高附加值营养物质。毕赤酵母以过氧化物酶体中3个酶(醇氧化酶、二羟丙酮合成酶、甲醛脱氢酶)代谢甲醇，毕赤酵母过氧化物酶体中含有2个醇氧化酶(AOX1、AOX2)。由于醇氧化酶与甲醇结合的亲和力弱，所以醇
食品与发酵工业 2014年9期2014-12-16
- 毕赤酵母直接基因敲除方法的研究
6005）巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是19世纪80年代初期发展起来的一种新型的外源蛋白表达系统，在生物表达系统中研究最为广泛。巴斯德毕赤酵母具有易于高密度发酵、培养基成本低、外源基因整合稳定、外源蛋白以分泌蛋白形式存在、内生蛋白较少，以及蛋白翻译后真核加工等优点。该系统相较其他表达系统而言，弥补了大肠杆菌表达系统不易表达复杂蛋白的限制以及植物、动物细胞表达系统周期长、操作繁琐、成本高的缺点，完善了酿酒酵母（Saccharomyces
惠州学院学报 2014年6期2014-12-12
- 外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中高效表达的策略
0415)巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)是一种单细胞真核生物,其表达系统是近些年发展起来的一种真核表达系统,它与酿酒酵母有着很多相同的遗传学和生物学特性。优点概括为三点:高稳定、高表达、高分泌。相对其它酵母来说更加易于操作。毕赤酵母相对其它酵母更易于分泌外源蛋白,而且外源基因整合非常稳定,发酵工艺相对成熟,宿主细胞生长迅速。毕赤酵母能够进行高密度的发酵,有着很强的诱导启动子。不仅如此,毕赤酵母重组产物的生物活性比较高,其表达水平是其它酵母的10～1
生物技术世界 2014年9期2014-08-15
- 毕赤酵母工程菌表达猪β-干扰素
汉430023）毕赤酵母工程菌表达猪β-干扰素高智明，赵沁沁，张国华，闫达中，刘军*（武汉轻工大学生物与制药工程学院，湖北武汉430023）根据毕赤酵母密码子偏爱，人工合成了猪β-干扰素（PoIFN-β）基因，构建了重组载体pPICZA-PoIFN-β。重组载体经SacI线性化后，电击转入毕赤酵母GS115，对在含博莱霉素（Zeocin）平板上生长的转化子进行鉴定，得到分泌表达猪β-干扰素的毕赤酵母基因工程菌株GS115/pPICZA-PoIFN-β。以1
中国酿造 2014年4期2014-03-04
- 川西北牧区传统发酵牦牛酸奶中发酵毕赤酵母菌的分离鉴定
酵牦牛酸奶中发酵毕赤酵母菌的分离鉴定王远微1，张诚民1，索化夷2，岳 华1，李 键1，汤 承1，* （1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041； 2.西南大学食品科学学院，重庆400715）对川西北部分牧区的10份传统发酵牦牛酸奶样品进行酵母菌的分离，通过常规形态特征和26S rRNA基因测序分析鉴定出6株发酵毕赤酵母菌（Pichia fermentans）。同源性分析显示6株分离菌与已知发酵毕赤酵母菌的同源性高达99.7%～100%。实验
食品工业科技 2014年12期2014-02-28
- 重组毕赤酵母发酵产PGA的条件优化
10004）重组毕赤酵母发酵产PGA的条件优化罗 倩，黎继烈，王 卫，郭 璐，朱晓媛（中南林业科技大学 生命科学与技术学院， 湖南 长沙 410004）对重组毕赤酵母发酵产青霉素G酰化酶(PGA)的培养条件进行探讨。依据基础盐摇瓶发酵培养基，通过单因素试验考察了接种量、甘油浓度、pH以及诱导过程中氨水浓度、甲醇浓度等因素对PGA表达的影响。并采用Box-Behnken实验设计进行因素组合优化。结果与意义：最佳发酵条件为：甘油浓度40 g/L、氨水浓度0.1
中南林业科技大学学报 2013年5期2013-12-27
- 毕赤酵母表达系统研究进展
表达系统宿主——毕赤酵母(Pichia pastoris)[7］。1 毕赤酵母表达系统的特点毕赤酵母是一种甲醇营养型酵母，以甲醇为唯一的碳源和能源[8］。毕赤酵母具有强有力的醇氧化酶基因AOX启动子，是目前最强、调控机制最严格的启动子之一。它能够严格调控外源基因的表达，使外源基因只在含有甲醇的培养基中有效表达。基因组中存在两个基因AOX1和AOX2，对AOX基因进行编码，两个基因的同源性为92%，编码蛋白质的同源性高达97%。AOX1启动子受到甲醇的诱导强
黑龙江科学 2013年9期2013-10-10
- 树干毕赤酵母基因组文库的构建及纤维二糖酶基因的筛选
[3-4]。树干毕赤酵母（Pichia stipitis）不仅可以发酵木糖、葡糖糖、甘露糖、半乳糖，还可以发酵纤维二糖和木二糖，对于纤维质原料发酵产燃料乙醇具有重要意义[5-6]。树干毕赤酵母已被证明具有良好的转运和利用纤维二糖的能力，但该菌株产酒精的能力有限，无法在工业规模应用[7]。近年来也有许多学者通过改变发酵条件提高树干毕赤酵母发酵产乙醇的得率，但其生产能力距工业化还有一定的距离，这就凸显出通过基因手段改造得到理想菌株尤为重要。目前，对于树干毕赤酵
食品与生物技术学报 2013年5期2013-02-19
- 毕赤酵母在基因克隆与表达中的应用
酵母体系，其中对毕赤酵母（Pichia pastoris）的研究最为热门，该体系既有糖基化程度不高，对目的蛋白污染小，对生长环境要求不高，其培养基易配置，便于高密度发酵表达等特点，又具有强效的启动子，还可对复杂的外源蛋白的高级结构进行翻译后加工折叠和修饰过程，比如糖基化、蛋白折叠及生成二硫键等，是一种优秀的真核生物表达系统[4]。经过多年的研究发展，毕赤酵母表达系统已成为一个相对成熟和理想的蛋白表达系统，被国内外广泛应用于工农生产以及医疗卫生等领域。目前，
猪业科学 2012年11期2012-08-15
- 重组毕赤酵母细胞壁蛋白的抽提和分析*
0006)巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)作为一种甲醇营养型酵母具有很多优点，已有数百种外源蛋白实现了在毕赤酵母中的高效表达［1-2］.巴斯德毕赤酵母细胞在甲醇诱导培养时响应细胞变小，细胞壁增厚［3］.笔者对甲醇诱导毕赤酵母外源蛋白表达的RNA-Seq与数据分析结果表明:61个预测的毕赤酵母糖基化磷脂酰肌醇(GPI)细胞壁蛋白基因中，有24个基因的表达水平(RPKM)大于全基因表达的平均水平(约为130)，其中:11个预测的GPI蛋白基因的
华南理工大学学报（自然科学版） 2012年5期2012-03-15
- 从废弃毕赤酵母提取甘露聚糖的研究
5035)从废弃毕赤酵母提取甘露聚糖的研究朱红蕾，杨海龙†(温州大学生命与环境科学学院，浙江温州 325035)对废弃毕赤酵母甘露聚糖的提取条件进行了研究.首先通过单因素试验研究了NaOH浓度、时间、温度和毕赤酵母浓度对甘露聚糖提取的影响，然后采用正交试验分析法对影响甘露聚糖提取的这4个因素进行了优化，优化结果表明，毕赤酵母甘露聚糖提取的最佳工艺条件为：NaOH浓度5%，时间2.5 h，温度80℃，毕赤酵母浓度12.5%.最佳工艺条件下，甘露聚糖的提取率约
温州大学学报（自然科学版） 2012年1期2012-01-12
- 重组木聚糖酶的安全高效表达与应用研究
yn2）在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）中的高效表达，但是却需要甲醇诱导，从而限制其在食品加工等领域的应用。本研究以毕赤酵母组成型启动子——GAP启动子替换pPIC9上的甲醇诱导型启动子AOX，成功地表达了木聚糖酶。在此基础上以经密码子优化后的INU信号肽替换载体上原有的α-Factor信号肽，同时根据已发表的基因序列和AOX1基因的氨基酸序列，按照毕赤酵母的酵母偏爱密码子，对毕赤酵母表达载体pPIC9上的α信号肽序列进行改造，结果表明，
食品工业科技 2011年1期2011-11-10
- 微小毛霉凝乳酶基因在毕赤酵母中的诱导表达研究
毛霉凝乳酶基因在毕赤酵母中的诱导表达研究郑 丽1，王 昕1，王景会2，杨贞耐1，2，*(1.吉林大学生物与农业工程学院，吉林长春130024; 2.吉林省农业科学院农产品加工研究中心，吉林长春130033)目的:研究重组毕赤酵母GS115PJ5诱导表达微小毛霉凝乳酶过程中酵母生长、产酶及培养液总蛋白变化情况。方法:测定毕赤酵母生长曲线、凝乳酶凝乳活性、蛋白水解活性、培养基上清液总蛋白含量。结果:毕赤酵母在开始诱导24h后即进入稳定生长期，并保持到240h，
食品工业科技 2011年7期2011-11-06
- 朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达
,6-葡聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达庄灵习1，段 然1，陈龙军2，凌雪萍1，卢英华1，*(1.厦门大学化学化工学院，福建厦门361005; 2.广州甘蔗糖业研究所，广东广州510316)α-1，6-葡聚糖酶是专一作用于α-1，6糖苷键产生小分子葡聚糖的一类水解酶，广泛的运用于制糖工业和啤酒工业中。采用PCR法扩增朱黄青霉(Penicillium minioluteum)C12114的α-1，6-葡聚糖酶基因，将其插入毕赤酵母表达载体pPIC9K。经Sac
食品工业科技 2011年11期2011-11-06
- 拷贝数对毕赤酵母重组菌表达猪胰岛素前体的影响
1]。甲醇营养型毕赤酵母(Pichiapastoris)是一种优秀的外源蛋白表达系统，具有乙醇氧化酶基因启动子(PAOX)强、外源蛋白表达量高、分离容易、外源基因稳定性高、培养基要求低等特点[2]，其高密度发酵工艺日臻成熟。目前，大约有500多种外源蛋白成功地在该系统中得到表达[3]。鉴于酵母直接表达人胰岛素原比较困难，作者采用表达猪胰岛素前体(Porcine insulin precursor，PIP)，再通过纯化和体外转肽反应，以转化为医用人胰岛素[4
化学与生物工程 2011年2期2011-07-25
- 抗菌肽酵母表达系统的研究进展
1989）。2 毕赤酵母表达系统表达抗菌肽的优势巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种甲基营养型酵母，在缺乏抑制性碳源（如葡萄糖、甘油）时，能利用甲醇作为唯一碳源。巴斯德毕赤酵母表达系统经长期发展，已基本成为可以生产多种融合蛋白的高效表达系统。它不仅可以克服大肠杆菌表达系统缺乏转录后加工修饰的缺陷，生产可溶的、具有正确折叠的重组蛋白，而且可以对蛋白进行转录后加工（Daly 和 Hearn，2005）。由于从天然资源中提取抗菌肽成本高、得率低
中国饲料 2011年8期2011-02-12
- 树干毕赤酵母菌对内醚糖的利用*
00083)树干毕赤酵母菌对内醚糖的利用*代江红1，余志晟1，王晓燕2，张洪勋11(中国科学院研究生院资源与环境学院，北京，100049)2(北京林业大学生物科学与技术学院，北京，100083)研究了树干毕赤酵母菌(Pichia stipitis)对内醚糖的利用及发酵产乙醇的情况。结果表明，与对葡糖糖的利用相比，树干毕赤酵母菌利用内醚糖的效率较低，且不能发酵产乙醇。然而，在内醚糖和葡萄糖同时存在的情况下，内醚糖可促进树干毕赤酵母的生长，乙醇产率也获得提高。
食品与发酵工业 2010年12期2010-11-02
- 毕赤酵母中植酸酶和内切葡聚糖酶共表达菌株的构建及其高效表达
安 625014毕赤酵母中植酸酶和内切葡聚糖酶共表达菌株的构建及其高效表达吴振芳，唐自钟，陈惠，韩学易，赖欣，吴琦四川农业大学生命科学与理学院，雅安 625014植酸酶和内切葡萄糖苷酶广泛应用于动物饲料添加剂中，能更有效地帮助饲料的利用，同时为动物的生命活动提供必需的重要物质。首先构建重组质粒pPICZα-EG，经过线性化后，电转化到含有植酸酶phyA基因的毕赤酵母感受态细胞中，构成含有植酸酶基因和内切葡萄糖苷酶基因的重组体菌株 GS115-phyA-EG
生物工程学报 2010年5期2010-09-29
- 浅析巴斯德毕赤酵母表达系统的研究
工作效率，巴斯德毕赤酵母表达系统就具有这方面的优点，其优越性表现在：分泌性表达，不需要复性，有效率为100%，纯化程序简单，大大降低了生产成本，尤其适用于动物干扰素的表达。1 巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)表达系统的特点巴斯德毕赤酵母是近年来兴起的一个真核高效表达系统，具有许多独特的优点，已迅速发展成为分子生物学领域中被广泛用于重组蛋白生产的主要表达系统之一[1]。Pichia Pastoris是一种噬甲基酵母，可以在以甲醇为唯一碳源和能
山东畜牧兽医 2010年10期2010-08-15