巢式
- 巢式多重聚合酶链反应快速诊断儿童脑膜炎/脑炎
新方法迫在眉睫。巢式多重聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）可在1 h内同时检测多种病原体，包括病毒、细菌和真菌，样本用量少，敏感性和特异性高[7]。本研究拟采用巢式多重PCR检测中枢神经系统感染患儿脑脊液样本，分析这种快速病原体检测方法在儿童脑膜炎/脑炎诊断中的价值。1 材料和方法1.1 研究对象收集2017年5月—2020年5月上海市儿童医院神经内科、新生儿科、重症医学科、血液科、消化与感染科临床诊断为中枢神经系统
检验医学 2023年8期2023-11-07
- 咖啡叶锈病菌单管巢式PCR 检测体系的建立与应用
中，比较常见的是巢式PCR 检测技术[9,10]。但是，由于巢式PCR 需要进行2 轮独立的PCR 扩增反应，第二轮PCR 扩增反应是以第1 轮PCR 扩增产物为模板，在这过程中需要开管进行模板转移，从而增加了污染的概率[11]，而单管巢式PCR 是在巢式PCR 技术发展而来，这就使得单管巢式PCR 检测技术不仅具有巢式PCR 检测技术的特异性和灵敏性，还能节省时间、节约成本，同时又具有可降低潜在污染风险等优点，具有较好的发展前景[12-14]。目前关于咖
特产研究 2023年5期2023-10-12
- 基于巢式PCR 技术对玉米种子携带禾谷镰刀菌的检测体系
究将突破点转向了巢式PCR (Nested PCR)技术，该技术是一种常规PCR 技术的改良模式。常规PCR 只使用一对特异性引物进行扩增，但巢式PCR 由外引物和内引物两对特异性引物组成，降低了扩增多个靶位点的可能性，极大地提高了特异性和灵敏性，多用于检测症状不明显、寄主内病原物采用普通检测方法难检测的真菌病害[20]，是建立快速、灵敏且高度特异种子检测的理想方法，故本研究基于巢式PCR 分子技术，针对禾谷镰刀菌设计特异性引物，构建了玉米种子携带禾谷镰刀
草业科学 2023年9期2023-10-10
- 例谈高中生物学常考的几种PCR扩增技术
增大幅上升。4.巢式PCR巢式PCR先用待扩增DNA外侧的一对引物完成一次PCR,再将其作为模板,根据原来引物内侧的序列设置新的引物,再次完成第二次PCR。由于第二次PCR的模板DNA片段更短,引物更小,因此可以减少第一次扩增中出现的非特异性扩增片段,提升扩增的精确性。但由于操作过程中的开盖处理,会增加产物污染的概率。以2022年扬州三模22题的一部分为例:例3.图2是巢式PCR工作原理示意图,请回答:图2 巢式PCR示意图(1)若用外引物扩增产生了错误片
教学考试(高考生物) 2023年3期2023-08-08
- 基于PCR和巢式PCR技术的玉米南方锈病早期检测
石洁基于PCR和巢式PCR技术的玉米南方锈病早期检测河北省农林科学院植物保护研究所/农业农村部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心，河北保定 071000【目的】建立巢式PCR方法，快速检测处于病害潜育期的玉米叶片内的多堆柄锈菌（），为玉米南方锈病（southern corn rust）的预测和防治提供技术支持。【方法】根据多堆柄锈菌ITS区序列，在其变异区设计3条多堆柄锈菌特异性检测引物NX471-F、NX2
中国农业科学 2023年9期2023-05-12
- 四阶巢式设计分组随区组试验的非平衡数据处理的理论研究
作者经常采用多阶巢式设计[1-6]。1962年Charles EG 等人[7]发表了平衡数据的四阶巢式设计的方差分析原理；2006年El-Saeiti I N 等人[8,9]发表了有缺失数据的四阶巢式设计的方差分析原理。这些研究美中不足是没有考虑区组效应和参试因子与区组重复间的互作,这极大地限制了这些模型在林木遗传育种中的应用。由于四阶巢式设计试验在林木遗传改良中还有一定的市场，例如：种源—林分—家系—个体间的变异;或林分—家系—个体—无性系试验的变异等等
山东林业科技 2022年4期2022-11-01
- 沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR 检测方法的建立与应用*
个基因上同时进行巢式扩增，通过体系优化，建立双重巢式RT-PCR 检测方法，以期在保证GRSPaV 检测效率的基础上，降低检测成本，为该病毒病的防控提供技术支撑。1 材料与方法1.1 供试材料感染GRSPaV 的葡萄样品京秀、达米娜、里扎马特和87-1 以及阴性对照无病毒贝达砧木均采自中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心的保存圃。供检样品为实验室保存的84 份葡萄样品的试管苗和25 份田间葡萄样品。1.2 试剂Taq DNA 聚合酶、dNTPs 和
中国果树 2022年8期2022-09-01
- 甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系的建立
进一步的研究。由巢式PCR（Nested PCR）基础上改进而来的单管巢式PCR（Single-tube nested PCR），其具体原理是在同一个PCR 管中加入两对引物（外引物、内引物对）以完成两轮PCR 扩增；扩增所需反应液组分与普通PCR 的一样，只是在扩增时外引物的退火温度要高于内引物对的退火温度约10 ℃。这样在第一轮外引物扩增时，而此温度下内引物不能结合；随后第二轮内引物扩增以第一轮扩增反应产物为模板，内引物在较低退火温度扩增时，此时外引物
中国糖料 2022年3期2022-07-04
- 蜱携带牛丙型肝炎病毒新亚型巢式PCR检测方法的建立
检测的金标准，而巢式PCR是PCR的优化方法，具有敏感性高、特异性强，重复性好的特点。因此，建立HNV病毒的巢式PCR检测方法，可有助于HNV病毒在临床上的快速诊断。本实验室前期对采集自牛体表的蜱进行了宏转录组高通量测序，经试验获取到1株病毒全基因组，基于保守基因NS3、NS5B构建系统发育树，发现其为HNV新亚型，命名为BovHepV-GDZJ(GenBank登录号MZ221927)。为了更好地鉴别、监测、防控以及深入研究该新亚型病毒的流行情况，本研究结
畜牧兽医学报 2022年3期2022-03-30
- 基于CiteSpace 的巢式病例对照研究热点与前沿分析
海 519041巢式病例对照研究又称套叠式病例对照研究或队列内病例对照研究，可分为前瞻性和回顾性巢式病例对照研究[1]，其具有设计便捷、适用疾病范围广泛等特点，广泛应用于生物医学领域[2-3]。在当前研究领域中，对热点与前沿分析研究偏少，众多学者不能清晰认知领域研究热点及前沿。同时，这些研究鲜有被文献计量学研究系统的分析和报道。本研究旨在利用CiteSpace 软件对巢式病例对照研究文献关键词及研究演化趋势进行可视化分析，探究其研究现状、热点及前沿，对领域
中国医药导报 2022年5期2022-03-23
- 巢式监测井施工工艺与方法研究
井、从式监测井、巢式监测井等，其中巢式监测井是指在一个钻孔中安装多根不同长度井管，分别监测不同深度的两个及两个以上目标含水层的监测井。由于巢式监测井施工工序繁多，难度较高，再加上钻孔直径较大、钻孔较深、地层岩性复杂、技术措施不合理等诸多问题，容易造成钻孔坍塌、钻孔倾斜、各单井井管相贴、投料止水不到位，导致深层水和浅层水相通，既达不到巢式监测井监测多层地下水位的效果，又给施工单位带来返工的财产损失和工期的延误。因此，巢式监测井质量的控制要严格要求施工工艺，投
能源与环境 2022年1期2022-03-07
- 猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测方法建立
括聚合酶链反应、巢式PCR技术（Nested PCR,nPCR）、实时荧光定量PCR技术（Quantitative Real-time PCR, QPCR）等。聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）是1983年由美国研究人员发明的，利用DNA的天然复制过程，对DNA片段短时间内进行数百万倍扩增，再利用核酸电泳跑胶并染色的方式于紫外下观察，从而检出核酸含量极少的样品，但其精确度依旧不是太高，无法应对现有的检测要求。实时荧光
养猪 2022年1期2022-02-17
- 巢式生物流化床技术在处理低负荷废水上的应用
进型的生化技术—巢式生物流化床技术，及其在处理低负荷废水上的应用，为处理低负荷废水提供思路和借鉴依据。1 工艺原理及特点1.1 巢式生物流化床工艺原理巢式生物流化床技术是以有机人造多孔性生物填料为核心的新型生物膜法处理系统，吸收了传统生物流化床优点[3]，其内部采用多孔性载体为流化介质，在载体上可累积大量及特定族群的生物膜微生物，提高微生物的附着数量和机会，微生物一般生长环境在气、固、液三相中，每个多孔载体都是一个小型微型反应器，可提高水中污染物的处理效率
化工管理 2021年34期2021-12-15
- 镜检和疟原虫抗原快速检测（RDT）胶体金法及巢式PCR法在疟疾诊断中的价值
DT）胶体金法及巢式PCR法等，各诊断方式的检出率也存在一定的差异。基于此，本研究选取2019年2月至2020年2月本中心接收的疑似50例疟疾患者作为研究对象，探究镜检、RDT胶体金法、巢式PCR法在疟疾诊断中的价值，旨在为指导临床合理抗疟疾提供重要支持与参考依据，现报道如下。1 资料与方法1.1 临床资料选取2019年2月至2020年2月本中心收治的疑似疟疾患者50例作为研究对象，其中男27例，女23例；年龄18～70岁，平均年龄（54.48±3.27）
当代医学 2021年29期2021-10-13
- 黄栌枯萎病菌巢式PCR检测方法的建立
检测;相比之下,巢式PCR灵敏性更高。本研究基于大丽轮枝菌特异性引物P1∕P2扩增出的片段序列设计巢式PCR引物,以期为黄栌枯萎病早期诊断和快速检测提供有效方法。1 材料与方法1.1 供试菌株大丽轮枝菌:2014年5月于北京香山公园采集黄栌枯萎病感病枝条,采用常规组织分离法分离培养病原菌,经鉴定为大丽轮枝菌,低温保存备用。海棠腐烂病菌(Valsa ceratosperma)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizocton
上海农业学报 2021年3期2021-07-06
- 玉溪地区鸽子弓形虫感染情况调查
文运用IHA 和巢式PCR 两种检测方法对该地鸽子进行弓形虫检测，能准确掌握鸽子弓形虫的感染情况，为鸽子弓形虫病的防控提供参考。1 材料与方法1.1 样品来源和采集采集云南玉溪地区的鸽子血样共计100 份。 3000r/min 离心10min，吸取血清置于-20℃冰箱备检。1.2 主要试剂弓形虫抗体间接血凝 (IHA) 检测试剂盒 (中国农业科学院兰州兽医研究所)，血液DNA 提取试剂盒 （天根公司），PCR 试剂 （大连宝生物公司）。1.3 试验方法1.
中国畜禽种业 2020年1期2020-02-24
- 小鼠诺如病毒巢式PCR 检测方法的建立及应用
列,建立MNV 巢式PCR 检测方法,为MNV 感染的分子生物学诊断提供了一种快速、敏感的检测方法。1 材料与方法1.1 病毒 感染小鼠诺如病毒、呼肠孤病毒III 型(Reovirus type III)、小鼠轮状病毒(Mouse rotavirus)、小鼠细小病毒(Minute virus of mice)、小鼠微小病毒(Mouse parvovirus),小鼠腺病毒(Mouse adenovirus)病料,均由华北理工大学实验动物中心实验室检测并保存。
中国兽医杂志 2019年7期2019-11-28
- PCR反应程序对土壤微生物PCR-DGGE分析的影响
n[13]。B：巢式-降落式PCR。以27F/1492R引物扩增产物为模板，进行V3区片段扩增，反应程序同A。C：普通PCR。以提取的微生物总DNA为模板，进行V3区片段扩增，参考Kimura等的方法，反应条件为94 ℃预变性5 min；94 ℃变性1 min，55 ℃复性1 min，72 ℃延伸1 min，30个循环；72 ℃ 延伸8 min[14]。D：巢式PCR。以27F/1492R引物扩增产物为模板，进行V3区片段扩增，反应程序同C。每个土样PCR
江苏农业科学 2018年21期2018-12-05
- 基于巢式Logit模型的城际交通方式研究
用函数建立改进的巢式Logit模型，并用该模型对武汉至咸宁的城际交通方式进行研究。同时，将改进的巢式Logit模型与计算结果进行对比分析，从而深入探索改进模型的可行性与优越性。1 城际旅客出行特征分析城际轨道交通是城市群系统内新型的交通方式，其市场分担额不仅与轨道交通和其他交通方式的服务水平和技术经济特征有关，而且还受到城际旅客出行特征的影响。城际旅客出行过程中，主要是从始发城市选择某种交通出行方式到达目的地城市，选择的交通方式有高速铁路、普通铁路、城际轨
重庆交通大学学报(自然科学版) 2018年8期2018-07-30
- 不同浓度乙型肝炎病毒全基因组高通量测序方法的建立及其应用
l)样品。1.4巢式PCR扩增引物设计及HBV基因组扩增由生工生物工程(上海)股份有限公司合成巢式PCR扩增引物，以3个不同浓度HBV核酸为模板，以AR1(Forward)5′-ACAGTGGGGGAAAGC-3′，P3(Reverse)5′-CTCGCTCGCCCAAATTTTTCACCTCTGCCTAATCA-3′为第一段第一轮扩增引物；以AF1(Forward)5′-GTCTGCGGCGTTTTATC-3′，P4(Revers-e)5′-CTGGTT
中华实验和临床病毒学杂志 2018年2期2018-05-23
- 核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立
.parvum的巢式PCR检测方法。结果表明，建立的体系可以从不同来源的5个N.parvum菌株中特异性地扩增出97 bp的目的条带，灵敏度达30 fg/μL，是常规PCR的10倍，而从其近缘种葡萄座腔菌属Botryosphaeria sp.的病原菌及其他供试菌株均未扩增出任何条带。以感染N.parvum的核桃组织总DNA为模板进行检测，可以在发病早期检测出N.parvum的存在。本研究建立的巢式PCR体系可以为核桃枝枯病的田间检测提供思路。关键词核桃枝枯
植物保护 2018年3期2018-05-14
- 不同PCR 方法检测牛卵形巴贝斯虫的比较分析
立了卵形巴贝斯虫巢式PCR 诊断方法。 田万年等[4-5]建立了卵形巴贝斯虫荧光定量PCR 检测方法，对延边地区卵形巴贝斯虫病进行了流行病学调查。 目前国内外未见关于以上3 种方法比较的文献，本试验从敏感性和临床样本检出率方面进行对比，筛选出牛卵形巴贝斯虫病的最佳检测方法。1 材料与方法1.1 样本来源 血液样本采自吉林省珲春地区散养的延边黄牛血样86 份，无菌采取抗凝血，用PBS洗3 次。 存于-20 ℃备用。 同时制作了血液涂片，甲醛固定保存，供染色镜
中国兽医杂志 2018年12期2018-04-25
- 三种内阿米巴原虫巢式多重PCR检测方法
种内阿米巴原虫的巢式PCR方法，为其分子检测和防控提供简便可靠的技术工具。1 材料与方法1.1 虫体及基因组DNAE.histolytica、E.dispar和E.moshkovskii包囊和滋养体均由实验室收集、保存，其中3种内阿米巴原虫包囊分离自单独感染上述阿米巴原虫的食蟹猴粪便(经镜检和3种阿米巴原虫特异的PCR方法鉴定[4])；3种内阿米巴原虫滋养体收集于上述粪便经培养后的带菌培养物。含有E.histolytica、E.dispar和E.moshk
安徽科技学院学报 2018年6期2018-03-12
- 广东果蔗宿根矮化病菌检测
采用常规PCR与巢式PCR技术分别对广东韶关和广州南沙果蔗产区的主栽品种‘黑皮果蔗’(‘Badila’)及华南农业大学甘蔗育种基地新引进的果蔗品种‘内江蜜蔗’、‘甜城21号’、‘甜城22号’和‘甜城99号’等进行宿根矮化病菌的检测。结果表明,巢式PCR检测的阳性检出率达88.6%,明显高于常规PCR检测(40.4%);广东韶关果蔗产区‘黑皮果蔗’宿根矮化病阳性率为86.8%;广州南沙果蔗产区‘黑皮果蔗’宿根矮化病阳性率为92.7%;华南农业大学甘蔗育种基地
植物保护 2017年6期2017-11-29
- 不同分子生物学方法在手足口病标本检测中的应用
T-PCRZ组﹑巢式PCR组进行检测，比较分析三种方法检测肠道71型（EV71）敏感性。结果实时RT-PCR法与巢式PCR手足口病检测率明显高于与一步法RT-PCR法（P＜0.05）。结论RT-PCR法与巢式PCR法在手足口病检测方面的检测准确性较高，值得临床应用。手足口病；PCR；一步法；阳性率0 引言手足口病（HFMD）是临床诊疗中较为常见的小儿传染性疾病，主要发病人群是5岁以下儿童，其病原体主要为科萨奇病毒A组16型，及肠道病毒71型[1]。目前，临
智慧健康 2017年12期2017-10-19
- 五层巢式监测井成井工艺与材料研究
71051)五层巢式监测井成井工艺与材料研究冯建月1,2， 王营超1,2， 叶成明1,2， 解 伟1,2， 李小杰1,2(1.中国地质调查局水文地质环境地质调查中心，河北 保定 071051； 2.国土资源部地质环境监测技术重点实验室，河北 保定 071051)针对我国地下水监测现状和存在的技术问题，开展了对Ø50 mm巢式监测井PVC-U井管的建井生产试验并组织实施了一眼五层巢式地下水监测井。介绍了该井整体的结构设计、PVC-U井管、新型止水粘土球、扶正
钻探工程 2017年7期2017-09-03
- 改良环介导等温扩增技术在疟原虫耐药基因SNP检测中的价值及可行性
外周血液样本，以巢式PCR为金标准，比较改良环介导等温扩增技术与其在恶性疟原虫耐药基因SNP检测中的反应效率、敏感性及特异性。结果对照金标准巢式PCR方法，对500例患者进行检测，两种方法的检测符合率为96.4%，差异无统计学意义(P＞0.05)。检测效率比较显示，通过与金标准进行比较，改良LAMP的初反应时间较快，在10 min内即起跳并迅速达到阳性反应阈值，而巢式PCR扩增效率相对较低，明显落后于改良LAMP(q浑浊度=6.492，P＜0.001；q反
海南医学 2017年15期2017-09-03
- HIV阴性免疫力低下患者痰液中耶氏肺孢子的实时荧光定量PCR检测
分别运用ITS-巢式PCR法和ITS-实时荧光定量PCR法检测标本中耶氏肺孢子。结果 71例患者中, 18名临床诊断为PCP。巢式PCR检测阳性结果25例，假阳性率为36.00%, 灵敏度、特异度、阳性预测值分别为88.89%、83.01%和64.00%。若阈值为103copies/mL, 实时荧光定量PCR的特异度和阳性预测值均显著高于巢式PCR。PCP患者中，实时定量PCR检测出耶氏肺孢子的基因载量显著高于非PCP患者。结论 在HIV阴性免疫力低下患者
实用临床医药杂志 2017年9期2017-06-09
- 活体长爪沙鼠幽门螺杆菌检测方法的建立
50)目的 应用巢式PCR方法通过胃液活体检测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染，从而建立可以持续监测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染的检测技术。方法 体外培养幽门螺杆菌并接种至长爪沙鼠体内，在感染后第10周使用普通PCR方法检测长爪沙鼠胃液，使用巢式PCR方法对长爪沙鼠胃液、胃组织、十二指肠内容物、结肠粪便进行检测；同时还利用快速尿素酶试验和血清ELISA方法等对比分析巢式PCR方法的准确性，上述PCR产物均经过测序验证。结果 普通PCR方法检测胃液、巢式PCR方法检测胃液、
中国比较医学杂志 2017年3期2017-04-13
- 大片段PCR方法检测CYP2D6*5基因分型的选择与优化
CR方法(传统和巢式大片段PCR)进行比较优化，并对329例健康男性人群进行CYP2D6*5基因分型的检测。结果 本研究中传统大片段PCR方法分型检测率为92.6%，巢式大片段PCR方法分型检测率为100%；在研究群体中CYP2D6*5等位基因的发生频率为3.9%(n=26)。结论 优化的大片段PCR方法使CYP2D6*5基因分型更高效明确，且巢式大片段PCR方法优于传统大片段PCR方法。CYP2D6*5;大片段PCR;巢式大片段PCR;基因分型0 引言药
实用药物与临床 2017年3期2017-03-28
- 牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究
00）牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究马梦婷1，2，高庆华1，3，王姗姗1，3，陈晓利1，郑永富1，3（1.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，阿拉尔843300；2.塔里木大学生命科学学院，新疆阿拉尔843300；3.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔843300）根据牙釉质基因在牛X染色体和Y染色体上存在的差异设计巢式引物，对牛静脉血基因组DNA样本以及10枚牛早期胚胎DNA样本进行巢式扩增和电泳分析，以鉴定性别。结果表明：利用此方法能
中国草食动物科学 2016年3期2016-11-24
- 羊附红细胞体巢式PCR检测方法的建立与应用
0)羊附红细胞体巢式PCR检测方法的建立与应用王晓星1，崔艳艳1，菅复春1，张忠义2，宁建峰2，张龙现1，王荣军1，宁长申1(1. 河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 450002； 2.宜阳县动物疫病预防控制中心，河南 宜阳 471600)为了建立一种更加准确、敏感的羊附红细胞体检测方法，根据GenBank上发表的羊附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号：AF338268)，设计内、外2对特异性引物，建立了巢式PCR检测方法。筛选该方法的最佳反应条
河南农业大学学报 2016年4期2016-09-25
- 考虑居民出行OD或居住地的出行方式选择巢式Logit模型
地的出行方式选择巢式Logit模型赵金宝1邓卫2王晓原1孙锋1(1山东理工大学交通与车辆工程学院, 淄博 255000)(2东南大学交通学院, 南京 210096)为定量化分析居民出行OD或居住地引入轨道交通后对出行方式选择的影响,在综合考虑出行者家庭特征、个人属性和出行特性的基础上,结合南京市居民出行调查数据,分别建立了考虑居民出行OD、考虑居住地、既不考虑出行OD也不考虑居住地的3个出行方式选择巢式Logit模型,并对比了模型的拟合度．结果表明:考虑居
东南大学学报（自然科学版） 2016年4期2016-09-21
- 国外引进甘蔗材料白叶病植原体巢式PCR检测及其序列分析
材料白叶病植原体巢式PCR检测及其序列分析王晓燕,李文凤,黄应昆*,张荣跃,单红丽(云南省农业科学院甘蔗研究所,云南省甘蔗遗传改良重点实验室, 开远661699)为有效防止引起重要危险性检疫病害甘蔗白叶病(SCWL)的植原体病原随引进甘蔗材料侵入我国,确保我国甘蔗生产安全,本研究对从缅甸、菲律宾、法国和泰国引进的22个甘蔗材料进行了SCWL植原体巢式PCR检测,并对阳性样品的巢式PCR产物进行了测序及序列分析。结果表明,18个甘蔗材料呈SCWL植原体阳性,
植物保护 2016年2期2016-09-14
- 基于巢式PCR的重叠延伸PCR优化
0072)基于巢式PCR的重叠延伸PCR优化彭 雷1，赵 艳2，马银花2(1.贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳 550001；2.武汉大学生命科学学院，湖北武汉 430072)[目的]结合巢式PCR对重叠延伸PCR进行优化。[方法]以褐飞虱Actin1基因启动子区与EGFP表达盒区基因融合为例，通过巢式PCR对重叠延伸PCR进行优化。[结果]成功获得融合片段，经过巢式PCR优化后大大简化试验流程，缩短试验时间，并增强PCR特异性与检出率。[结论]优化了
安徽农业科学 2016年20期2016-09-08
- 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用研究
行研究，分别予以巢式PCR、RT-PCR检测，比较两种检测方法检测结果。结果巢式PCR检测CA16阳性率、EV71阳性率及CA16+EV71双阳性率均显著高于RT-PCR检测，差异有统计学意义（P＜0.05）；对比Agilent2100与普通凝胶电泳结果，差异无统计学意义（P＞0.05）；巢式PCR检测对粪便标本、咽拭子标本的检测灵敏度均显著高于RT-PCR检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论应用巢式PCR检测手足口病标本，其检测灵敏度较高。分子生
中国卫生产业 2016年16期2016-08-22
- 罗非鱼无乳链球菌巢式PCR检测方法的建立
罗非鱼无乳链球菌巢式PCR检测方法的建立邵辰1,2,3，易弋1,2,3，黎娅1,2,3，黄荷1,2,3，伍时华1,2,3，杨军4(1.广西科技大学生物与化学工程学院，广西柳州，545006；2.广西糖资源绿色加工重点实验室(广西科技大学)，广西柳州，545006；3.广西高校糖资源加工重点实验室(广西科技大学)，广西柳州，545006;4.柳州市渔业技术推广站，广西柳州，545006)摘要：根据无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)
淡水渔业 2016年2期2016-04-23
- 猴巨细胞病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用
0）猴巨细胞病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用王莎莎， 贺争鸣（中国食品药品检定研究院重点实验室， 北京 100050）目的 建立猴巨细胞病毒（SCMV）特异的巢式PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SCMV感染或污染情况。 方法 比对分析多株SCMV序列，设计SCMV特异引物，优化巢式PCR实验条件，建立的巢式PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品。 结果 经特异度和灵敏度鉴定，在设计的4对引物中确定一对最佳引物，可以区分SCMV和
实验动物与比较医学 2015年6期2015-10-15
- 巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型
州215003）巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型邵雪君1，朱宏1，黄莉莉1，陶云珍1，徐俊1，何萍1，汪健2（苏州大学附属儿童医院1.检验科，2.普外科，江苏苏州215003）目的：建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的PCR方法。方法：根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶（nitrate reductase，narGHJI）基因启动子区215位上T-C的转换，设计巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型，测定其敏感性，
江苏大学学报（医学版） 2015年4期2015-07-22
- 桉树焦枯病菌巢式聚合酶链反应快速检测方法的建立与应用
4)桉树焦枯病菌巢式聚合酶链反应快速检测方法的建立与应用谯天敏, 张静, 麻文建, 朱天辉*, 郑磊(四川农业大学林学院,四川 雅安625014)桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladiumscoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序
浙江大学学报（农业与生命科学版） 2015年5期2015-07-05
- 鹿人五毛滴虫巢式PCR检测方法的建立
建立鹿人五毛滴虫巢式PCR检测方法并进行验证，根据人五毛滴虫18S rRNA基因的特异性片段设计巢式PCR特异性引物，对两轮PCR反应的退火温度和反应体系中Mg2+浓度进行探索和优化，在此基础上，进一步通过灵敏性和特异性的检测。采用建立的巢式PCR检测方法对68份鹿粪便样品进行检测。结果表明，建立的巢式PCR方法，第一轮PCR最适退火温度为53 ℃，第二轮PCR最适退火温度为53 ℃；镁离子浓度为2.5 mmol·L-1。对鹿人五毛滴虫的检测精度可达每毫升
天津农业科学 2015年5期2015-05-30
- 巢式聚合酶链反应检测男性尿道炎患者尿液中阴道毛滴虫
朱小凤 王宝玺巢式聚合酶链反应检测男性尿道炎患者尿液中阴道毛滴虫乐文静 苏晓红 李赛 刘玉荣 张津萍 朱小凤 王宝玺目的建立两种巢式聚合酶链反应(PCR)方法检测男性尿道炎患者尿液中阴道毛滴虫感染状况,评价两种巢式PCR在临床诊断中的应用价值。方法2011年4月至2013年12月来我院性病门诊就诊的1 088例男性尿道炎患者为研究对象,收集尿道拭子标本做分泌物涂片镜检、阴道毛滴虫湿片检测以及淋球菌培养,同时收集尿液标本提取DNA,针对阴道毛滴虫重复基因组
中华皮肤科杂志 2014年12期2014-12-09
- 猪肺炎支原体巢式PCR诊断方法的建立及应用
0)猪肺炎支原体巢式PCR诊断方法的建立及应用吉 玛,娘 洛,张淑云(青海省果洛州班玛县动物疫病预防控制中心,青海 果洛 814300)为建立一种快速诊断猪肺炎支原体病原的方法，根据GenBank上登录的Mhp基因组序列，在保守区基因内部设计合成2对引物，经过PCR反应条件的优化，建立了检测猪肺炎支原体的巢式PCR方法。结果表明，该方法对鸡毒支原体、猪鼻支原体、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性；第1次扩增的敏感性是1
家畜生态学报 2014年3期2014-09-02
- 三种PCR方法检测柑橘黄龙病菌的效果比较
比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现：3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR柑橘黄龙病; 常规PCR; 巢式PCR; 实时荧光定量PCR; 比较研究柑橘黄龙病是世界柑橘生产上最为严重的病害,在我国及东南亚、非洲、阿拉伯半岛、印度、巴西和美国佛罗里达和加利福尼亚等国家和地区均有发生,严重制约着世界柑橘产业的发展[1
植物保护 2014年5期2014-08-10
- 基于广义巢式Logit的多用户多准则随机用户平衡模型
044）基于广义巢式Logit的多用户多准则随机用户平衡模型李雪飞，郎茂祥＊（北京交通大学城市交通复杂系统理论与技术教育部重点实验室，北京100044）介绍了广义巢式Logit的基本理论，在此基础上，考虑具有不同时间价值的多种用户类别出行者，构造了基于广义巢式Logit的多用户多准则随机用户平衡的等价数学规划模型，并对该模型的等价性和唯一性进行了证明.设计了求解所提出的随机用户平衡模型的基于路径的相继平均法，通过一个算例验证了所设计算法的有效性.分析了分散
交通运输系统工程与信息 2014年4期2014-07-18
- 巢式PCR与LAMP方法在蜱的莱姆病螺旋体检测中的应用
括：普通PCR和巢式PCR。常用的靶基因有：5S-23SrRNA基因间隔区，ospA，fla等。因为巢式PCR比普通PCR具有更高的敏感度和特异度，因此得到广泛的应用。2000年Notomi[9]等开发了一种新的核酸等温扩增方法，即环介导等温扩增法 (loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，其特点是在等温条件下即可高效、快速、高特异、高灵敏地扩增靶基因序列。2011年，杨吉飞等[10]建立了检测蜱中莱姆病螺
中国人兽共患病学报 2014年12期2014-04-09
- 单管巢式实时PCR检测麻风杆菌方法的建立及初步应用
和平·论著·单管巢式实时PCR检测麻风杆菌方法的建立及初步应用覃晓琳 黄进梅 薛耀华 曾维英 吴兴中 欧江丽蓝银苑 唐三梅 方铭恒 百 顺 郑和平∗目的: 明确单管巢式实时PCR检测麻风杆菌的特异性、灵敏性和重复性。方法: 以麻风杆菌hsp18基因为靶基因设计引物和探针，建立单管巢式实时PCR方法检测麻风杆菌并与抗酸染色及普通PCR进行特异性和灵敏性的比较。结果: 单管巢式实时PCR检测下限为2.1 fg质粒DNA，普通PCR为21 fg质粒DNA，敏感性
中国麻风皮肤病杂志 2014年10期2014-03-29
- 荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用
PS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用代元元1，吴晓薇1，2，洪洁心2，王怡飞1，刘中勇2，赵天楚1，郭 卉3，郭霄峰1（1.华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2.广东出入境检验检疫局，广东广州510623；3苏州科技学院，江苏苏州215009）为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法，根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列，设计引物，通过条件的优化，建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测
中国动物检疫 2014年1期2014-02-24
- OsDREB3大豆品系特异性巢式PCR及多重PCR检测方法的建立
3大豆品系特异性巢式PCR及多重PCR检测方法的建立刘营1,2，张明辉1,2，甄贞1,2，李璐1,2，高学军1,2*（1.农业部转基因生物产品成分监督检验测试中心，哈尔滨 150030；2.东北农业大学农业生物功能基因重点实验室，哈尔滨 150030）为建立转基因大豆OsDREB3巢式PCR检测方法和转基因大豆多重PCR检测方法，选择转基因大豆GTS40-3-2、A2704-12及OsDREB3 DNA作为多重PCR方法的待检测基因模板，成功实现3种转基因
东北农业大学学报 2014年4期2014-01-14
- 柯萨奇病毒B5巢式RT-PCR检测方法的建立*
了检测CVB5的巢式RT-PCR方法，报道如下。1 材料与方法1.1毒株、试剂与仪器CVB5、Echo6、Echo25、EV71、CVA16毒株由河南省疾病预防控制中心传染病所实验室分离培养和保存。52份(血清16份，粪便19份，脑脊液17份)样本采自临床确诊的病毒性脑炎病例。RNA提取试剂盒(QIAGEN公司)；RT-PCR试剂盒和PCR反应液(TaKaRa公司)，PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪(BIO-RAD公司)。1.2引物设计与合成从GenBank下
郑州大学学报（医学版） 2013年3期2013-11-20
- 巢式PCR联合焦磷酸测序检测乙肝病毒耐药基因的方法建立和初步临床应用
类似物耐药突变的巢式PCR联合焦磷酸测序技术的检测体系。1 材料与方法1.1 病例来源 选取223例于2011年8月至2013年2月间在湖北省中医院肝病科就诊的CHB患者，诊断标准参照《慢性乙型肝炎防治指南》［2］，其中192例曾经或现在接受核苷(酸)类似物治疗 (用药组)，31例此前无核苷 (酸)类似物治疗史 (未用药组)。男176人，女47人;患者年龄 (41±33)岁。1.2 重组质粒及标准株 HBV B、C型野生标准株由武汉大学生命科学学院病毒学国
中西医结合肝病杂志 2013年3期2013-09-28
- 食用精炼大豆油DNA提取及单管巢式PCR检测
事件特异性基因。巢式及半巢式PCR技术可以使检测的下限下降几个数量级，故在DNA残留量微少的转基因大豆油检测中被成功使用［4－5］。单管巢式PCR是在普通PCR和巢式PCR反应的基础上发展起来的一种PCR技术，目前在医学，兽医学的微量DNA检测方面应用较多［6－9］，但在转基因大豆油检测中未见报道。本实验先用从转基因大豆中提取出的高质量大豆DNA为模板，利用针对转基因Roundup Ready大豆外源基因设计的2条引物进行温度梯度PCR，筛选出内外两轮扩增
食品工业科技 2013年21期2013-05-15
- 考虑空间相关性的居民居住选址模型
9]。随后出现的巢式Logit模型允许每个“巢”内的备选方案之间具有相关性，能在一定程度上克服MNL模型的IIA性质。Hunt[3]、Boots[4]、Deng[5]、Abraham[7]等利用NL模型研究了居民居住地选择及其他空间选择问题。NL模型尽管考虑了空间相关性，但在建模时要求研究者事先确定“巢”以及每个“巢”内备选方案的个数，即备选方案集合被人为地划分为多个相互独立的子集合，主观性较大[10]。广义极值模型GEV的出现，是离散选择模型发展进程中的
中国土地科学 2012年4期2012-09-25
- 基于牙釉质基因巢式PCR性别鉴定超微量DNA检测方法的建立
速、敏感和简捷。巢式PCR法是在PCR技术的基础上发展起来的，它是根据一个性别特异基因设计一对外引物以得到被测基因较长的扩增产物，再根据扩增产物序列设计第二对引物(内引物)对产物进行第二次扩增。巢式PCR经过两次扩增，使扩增产物的量增加，结果更容易判断，同时巢式引物的使用增加了扩增产物的特异性，提高了准确度［4］。本实验采用巢式PCR扩增超微量山羊血液基因组DNA进行性别鉴定，旨在建立超微量DNA检测方法，在对家畜早期胚胎进行鉴定时，尽可能少的切取胚胎，以
塔里木大学学报 2011年2期2011-06-21
- 巢式PCR检测血清中烟曲霉基因的实验研究
和曲霉培养,考查巢式PCR对侵袭性曲霉感染的早期诊断的可行性。还检测了25例临床患者外周血中烟曲霉基因,并与GM试验结果比较,评价巢式PCR方法在IA诊断中的价值。1 材料和方法1.1主要试剂及仪器Taq DNA聚合酶及dNTPs(Promega公司),蛋白酶K(Merck公司),E.Z.N.A.Fung DNA Kit(Omega公司),100bp DNA Marker(Fermentas公司);PlateliaTM Aspergillus EIA GM
中国实验诊断学 2011年1期2011-06-13
- 绵羊肺腺瘤病毒的巢式RT-PCR技术检测*
了2套引物,采用巢式 RT-PCR技术对引起绵羊肺腺瘤病(SPA)的病原进行进一步的确诊,为建立特异性诊断该病的方法提供理论依据。1 材料与方法1.1 样品来源及处理 样品来源于内蒙古呼和浩特市某种羊场自然感染JSRV的病例,经过病理解剖、病理组织切片观察,初步诊断为绵羊肺腺瘤病,取该病羊的肺脏、肾脏、肝脏、脾脏,小鼠、家兔的肺脏分别放在无RNase冻存管中于-80℃保存。取健康绵羊肺脏(阴性对照),放在无 RNase冻存管中于-80℃保存。1.2 常用试
中国人兽共患病学报 2011年6期2011-06-07
- 脑胶质瘤MGMT启动区甲基化PCR检测方法的对比分析
采用传统MSP和巢式MSP两种方法来检测MGMT启动区甲基化的状态，并采用免疫组织化学的结果作为两种MSP法检测结果的参考，比较这两种方法的优缺点，为以后临床广泛开展此项检测和脑胶质瘤患者化疗方案的制订提供较为可靠的依据。1 材料和方法1.1 肿瘤标本的收集随机收集2009年4月至2010年3月首都医科大学附属北京天坛医院神经外科收治的54例脑胶质瘤患者的肿瘤标本，其中男性28例，女性26例，年龄19～74岁，平均(46.2±14.40)岁。根据胶质瘤分类
首都医科大学学报 2011年4期2011-04-28
- 反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
了一种基于反转录巢式多重 PCR的、高度灵敏的、能够在单细胞水平检测多种时钟基因表达的体系,成功检测到单细胞水平时钟基因的表达情况。1 材料和方法1.1 材料主要试剂：SuperScript.Ⅲ First-Strand Synthesis System for RT-PCR RNA抽提试剂 TR Izol,0.25%胰蛋白酶 (美国 invitrogen公司);Qiagen○RMultiplex PCR Kit(德国 Qiagen公司);PCR Mast
首都医科大学学报 2011年3期2011-01-25
- 巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV
510555)巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV夏机良，王 涛，季 芳，孙云霄，彭白露，刘晓明，饶军华(广东省昆虫研究所华南灵长类研究中心 广东蓝岛生物技术有限公司，广州 510555)目的 利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法
中国比较医学杂志 2010年7期2010-09-17
- 普通PCR与巢式PCR检测生殖器疱疹病毒的对照
4)普通PCR与巢式PCR检测生殖器疱疹病毒的对照王秀梅1,陈世义1*,于海滨2,刘玉洁1(1.吉林大学第一医院 皮肤科,吉林 长春 130021;2.北京佑安医院皮肤科,北京 100054)*通讯作者生殖器疱疹(GH)是由单纯疱疹病毒(HSV)引起性传播疾病(STD),GH典型表现临床上诊断并不困难,但对于不典型表现容易漏诊或误诊。HSV主要通过生殖器或肛门、呼吸道、口腔粘膜的分泌物传播。以往病毒培养被看做GH诊断的金标准,但需要约2周的时间,相比之下,
中国实验诊断学 2010年1期2010-08-21