银杏内酯Ｂ协同地塞米松对小鼠哮喘模型气道炎症和辅助Ｔ细胞亚群影响作用的研究

吕进泉　张晓鸣　吕剑平　忻　悦　唐　燕

[摘要] 目的探讨银杏内酯B协同地塞米松对支气管哮喘气道变应性炎症及辅助T细胞亚群的作用。方法40只BALB/c小鼠随机分成正常对照组、哮喘对照组、地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组,每组8只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行白细胞(WBC)及嗜酸性粒细胞( EOS)计数;应用ELISA法测定BALF中IFN-γ和IL-4水平。结果BALF中WBC及EOS计数:3个用药组较哮喘对照组明显减少(P<0.01),联合干预组减少的程度大于地塞米松组(P<0.05)、银杏内酯B组(P<0.01)。3个用药组小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平 与哮喘对照组比较,银杏内酯组、地塞米松组和联合干预组BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分别增高和降低(P<0.05或P<0.01),而联合干预组增高和降低的程度大于地塞米松组(P<0.01)、银杏内酯组(P<0.05)。结论银杏内酯B能减轻小鼠哮喘模型BALF中炎性细胞浸润,并减少IL-4的水平;银杏内酯B与激素具有协同抗炎作用;同时具有更好的调节Th亚群失衡的作用。

[关键词] 支气管哮喘; 银杏内酯B; 气道炎症; T辅助细胞亚群

[中图分类号] R969 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)23-25-02

Effects of Ginkgolide B Coordinated with Dexamethasone on Allergic Airway Inflammation and T Helper Cell Subsets in Asthmatic Rats

LV Jinquan ZHANG Xiaoming LV Jianping XIN Yue TANG Yan

Pediatrics Department,the Affiliated Hospital of Jiangsu University,Zhenjiang 212001,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effects of Ginkgolide B(GB)coordinatedwith Dexamethasone(DXM)on allergic airway inflammation and T helper cell subsets in asthmatic rats. Methods Forty BALB/c rats were randomly divided into 5 groups equally:the normal group,the asthma model group,the DXM group,the GB group and the DXM+GB group. The WBC count and eosinophil(EOS)count in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) were estimated and ELISA was used to determine the concentrations of IFN-γ and IL-4 in BALF. ResultsCompared with the asthma model group,EOS and WBC count and IL-4 level in BALF were significantly lower in the three treated groups(P<0.01),particularly in the DXM+GB group,showing a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01),whereas IFN-γ level was increased. And in the DXM+GB group,they showed a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01). ConclusionGingkgolide B has an inhibitory effect synergistic with Dexamethasone in airway inflammation,and might partly reverse T helper cell subsets in rats with asthma.

[Key Words]Asthma; Gingkgolide B; Inflammation; T-lymphocyte cell subsets

目前,PAF拮抗剂成为哮喘治疗的研究方向之一,本文探讨天然PAF拮抗剂——银杏内酯B对哮喘小鼠气道炎症和T辅助细胞(Th)亚群平衡的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

鼠龄6周的雄性SALB/c纯系小鼠40只,体重20～25g,由江苏大学医学院实验动物中心提供。随机分为正常对照组、哮喘对照组、地塞米松组、银杏内酯组和联合干预组,每组8 只。

1.2 模型建立和给药方法

除正常对照组,其余各组均按文献[1]的方法建立哮喘模型。给药方法:地塞米松组和银杏内酯组小鼠每次雾化前30min分别予以腹腔注射地塞米松注射液(1mg/kg)、银杏内酯B 2mg/kg,联合干预组则同时给予银杏内酯B 2mg/kg和地塞米松注射液(1mg/ kg),哮喘对照组腹腔内注入生理盐水,正常对照组则以注射生理盐水代替OVA致敏和激发。

1.3 支气管肺泡灌洗液细胞计数和分类

最后一次雾化24h后行气管插管,用生理盐水0.6mL灌洗支气管肺泡,反复冲洗3次,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),取0.1mL BALF与白细胞稀释液1︰1 稀释,用细胞计数板计数炎症细胞总数及嗜酸性细胞数量;另外BALF以1200×g离心10min,收集上清液计量体积后置于EP管中,-20℃保存,用于IFN-γ和IL-4测定。

1.4 IFN-γ和IL-4水平测定

用小鼠IFN-γ和IL-4 ELISA试剂盒(购自武汉晶美生物工程有限公司)检测BALF上清中IFN-γ和IL-4水平,根据吸光度(A)值计算出标本中IFN-γ和IL-4的水平。

1.5 统计学处理

用SAS6.12进行统计学处理,白细胞和嗜酸性粒细胞计数结果呈非正态分布,用范围和中位数表示,多组间比较用非参数Kruskal-Wallis检验,两组间比较用Wilcoxon秩和检验; IFN-γ和IL-4以均数±标准差(χ±s)表示,用多组间比较及两两比较均用方差分析(F检验)。

2 结果

2.1 各组小鼠BALF中白细胞总数(WBC)及嗜酸性粒细胞(EOS)计数结果

与哮喘对照组比较,银杏内酯组、地塞米松组和联合干预组BALF中WBC 及EOS计数显著减少(P<0.01),而联合干预组BALF中WBC及EOS计数减少的程度大于地塞米松组(P<0.05)、银杏内酯组(P<0.01)。见表1。

2.2 各组小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平

与哮喘对照组比较,银杏内酯组、地塞米松组和联合干预组BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分别增高和降低(P<0.01),而联合干预组增高和降低的程度大于地塞米松组(P<0.01)、银杏内酯组(P<0.05)。见表2。

3 讨论

支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等炎性细胞分泌的多种炎性介质参与的气道慢性炎症,且Th失衡在哮喘发病中起重要作用。Th分为Th1和Th2两种类型,Th1分泌IFN-γ,Th2分泌IL-4和IL-5,因此检测IFN-γ和IL-4水平可间接反映Th1类细胞和Th2类细胞间的平衡。本组资料表明哮喘对照组小鼠BALF中嗜酸性细胞计数显著增高,提示哮喘患者发生了以嗜酸性细胞浸润为主的气道炎症;同时IL-4高于正常,而IFN-γ低于正常对照组,表明哮喘患者Th1功能低下,而Th2功能相对亢进。Th2分泌的IL-4是促进嗜酸性粒细胞聚集、增生的主要细胞因子,嗜酸性粒细胞聚集于气道可释放多种炎症介质,两者共同作用,促使哮喘患者产生以嗜酸粒细胞浸润为主的气道变应性炎症,IFN-γ可拮抗IL-4的作用。

激素作为非特异性炎性介质拮抗剂是目前治疗哮喘的基本药物,本研究表明,地塞米松组BALF嗜酸性粒细胞和IL-4均明显下降,IFN-γ有所增高,表明激素可有效减轻气道炎症,并可纠正Th亚群失衡。近年来随着人们对于多种炎性介质及其拮抗剂研究的不断深入,特异性炎性介质拮抗剂已成为哮喘治疗的发展方向。目前,白三烯受体拮抗剂已用于哮喘的临床治疗,而在众多炎性介质中,PAF是已知的最强的支气管致痉剂,其致痉作用比白三烯和组织胺强,且比乙酰胆碱所致的支气管痉挛作用强1000倍[3]。PAF可通过趋化作用和与血小板的相互作用使嗜酸性粒细胞等聚集于气道并释放多种炎症介质导致哮喘,并能增加气道反应性。有研究证实,哮喘患者BALF中PAF明显增高,动物气雾吸入PAF后可出现哮喘,我们亦有研究证实哮喘患者发作期血浆PAF水平明显增高[3],表明PAF是一种重要的致喘介质参与了哮喘的发病机制。因而探求PAF拮抗剂有望成为预防和治疗哮喘的一类新型药物。银杏内酯B是由银杏叶的提取物精制而成,具有很强的拮抗PAF的作用,有研究表明银杏内酯B可显著抑制由尘螨和花粉刺激诱发的支气管收缩;动物实验证实它亦可以明显减弱PAF所致的豚鼠肺条收缩作用,并降低BALF中IL-5的水平[4]。在应用银杏叶片治疗哮喘病人临床疗效观察中证实,银杏叶片能抑制哮喘患者的嗜酸性粒细胞对气道的浸润,并改善哮喘患者肺功能、提高临床症状控制率[5,6]。本研究表明,银杏内酯B能减轻小鼠哮喘模型BALF中炎性细胞浸润,并减少IL-4的水平;与地塞米松联合应用,气道内嗜酸性粒细胞和IL-4水平下降更为明显,提示银杏内酯B与激素具有协同抗炎作用;同时具有更好的调节Th亚群失衡的作用。

[参考文献]

[1] Salmon M,Walsh DA,Koto H,et al. Repeated allerge exposure of sensitized Brown-Norway rats induces airway cell DNA synthesis and remodeling[J]. Eur Respir J,1999,14(3):633-641.

[3] 吕进泉,周弘,吕剑平,等. 哮喘患儿血浆血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α和血小板活化因子水平变化及意义[J]. 实用儿科临床杂志,2003, 18(6):445-446.

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[5] 吕剑平,吕进泉,张晓明,等. 银杏叶片联合布地奈德吸入治疗对哮喘儿童气道炎症和辅助T细胞亚群的影响[J]. 江苏医药,2008,34(12):1215-1217.

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(收稿日期:2009-06-03)